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miR-200家族在消化系肿瘤中的研究进展
miR-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429)是众多已被发现的mieroRNA中的一员,其在上皮来源肿瘤的增殖、侵袭、转移中的作用成为近年来的研究热点之一,本文对miR-200家族在同为上皮来源的消化系肿瘤中的研究进展进行了综述.
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Tiam1与大肠癌细胞EMT的关系
目的:探讨Tiaml和EMT在不同转移能力的大肠癌细胞中的关系.方法:用Real time-RT PCR法分析Tiaml mRNA,Ecadherin mRNA和Vimentin mRNA在6种大肠癌细胞系中的表达:通过免疫组织化学检测Tiaml,Ecadherin和Vimentin在LoVo和HT29中的表达.通过考马斯亮蓝染色观察LoVo和HT29的细胞骨架.结果:在SW620,SW480/M5,HT29,LoVo和LS174T中,Tiam1 mRNA的表达水平分别是SW480的0,51,7,67,0,00,0,36,0,06倍,差异具有统计学意义(P<0.05);Ecadherin mRNA的表达水平分别是SW480的3.18,2.27,5.92,0.00,0.61倍,差异具有统计学意义(P<0.05);Vimentin mRNA的表达水平分别是SW480的6.08,0.02,0.35,11.72,0.00倍,差异具有统计学意义(P<0.05).细胞免疫组织化学显示LoVo细胞的Tiaml表达呈阳性(++),Vimentin表达呈强阳性(+++),Ecadherin表达阴性(-);HT29细胞的Ecadaerin表达呈阳性(++),Tiaml和Vimentin表达阴性(-).LoVo细胞质中丝网状的骨架蛋白结构及点状肌动蛋白小体比HT29多.结论:Tiam促进大肠癌转移的机制可能与EMT发生有关.
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EMT在消化系肿瘤中的研究进展
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞通过特定的程序转化为间质细胞的生物学过程,EMT在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤的侵袭迁移等过程中起重要作用,EMT在恶性肿瘤的侵袭迁移病理过程中的分子机制成为研究热点,尤其是消化系肿瘤方面.由于上皮性肿瘤在恶性肿瘤中所占比例较大及转归预后较差,探究上皮细胞在获得迁移侵袭能力的过程,即EMT过程,为消化系肿瘤的预防和治疗提供方向.EMT的研究将为消化系肿瘤患者的预后和抗肿瘤药物的应用提供依据,本文对EMT的机制和在消化系肿瘤方面的研究进展作一综述.
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上皮-间质转化与肝胆管结石病的研究进展
上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是一个上皮细胞转分化成间质细胞的复杂生理病理过程,参与胚胎形成、组织器官纤维化、肿瘤发生、转移等.近年来研究显示胆管细胞发生上皮-间质转化在多种胆管病包括肝胆管结石病中发挥着重要作用,并涉及β-转化生长因子/Smads信号通路的调节.文章着重介绍上皮-间质转化的概念、类型,总结胆管上皮细胞(bile duct epithelia cells,BDECs)发生EMT的研究现状及在肝胆管结石病中的作用及可能机制.
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肝内细胞上皮-间质转化:肝纤维化发生的新机制
上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)现象是近年来肝纤维化研究的热点问题之一.根据其发生环境的不同,EMT分为3种类型:Ⅰ型在胚胎形成中;Ⅱ型在创伤修复和纤维化过程中;Ⅲ型发生在肿瘤侵袭和转移中.在此过程中,一些细胞表达物会发生变化,可以用于研究EMT.这些生物学标记物包括细胞表面蛋白、细胞骨架蛋白、细胞外蛋白、转录因子、微小RNA等.涉及EMT的主要信号通路有TGF-β通路、Wnt通路等.研究EMT的方法有免疫组织化学和细胞世代追踪技术,前者较为普遍.本文着重介绍了肝内3种主要的细胞(肝细胞、胆管细胞、肝星状细胞)发生上皮间质转化的证据.均有体外试验证据证明肝细胞、胆管细胞、肝星状细胞在一定刺激因子作用下可以发生EMT,但仅有为数不多的利用细胞发育制图技术进行的体内试验结果则相互矛盾或有被质疑之处.总之,EMT现象在肝纤维化中是否存在以及起多大作用,是值得深入研究的有趣问题.本文的目的就是综述支持或反对肝纤维化进程中肝内细胞发生EMT/MET现象的证据,以便今后做更深入的研究.
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幽门螺杆菌感染在胃癌干细胞形成中的作用
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是胃癌的关键性诱因,而胃癌干细胞的形成在胃癌的发生发展中发挥重要作用,因此两者必然关系密切,本文分别概述了H.pylori 感染和胃癌干细胞与胃癌的关系,并进一步阐明H.pylori感染一方面通过上皮-间质转化产生胃癌干细胞,另一方面通过影响Wnt/β-catenin、Hh/SHH、Notch、FGF/BMP等肿瘤干细胞信号通路来参与胃癌干细胞的形成和进展.在此基础上,我们提出H.pylori 感染与胃癌干细胞研究领域内面临的挑战以及将来可能的进展方向.
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MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用
目的 探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和上皮-间质转化(EMT)的调控作用.方法 用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物(miR-429 mimic)和无意义小分子阴性对照片段(miR-NC)分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白(vimemin)、E-钙黏蛋白(E-cad)及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果 培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的(1.369 ±0.878)、(1.518±0.041)、(0.549±0.076)倍,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的(0.423±0.038)、(0.652±0.043)、(2.235±0.045)倍,蛋白表达量是(0.683±0.053)、(0.548±0.049)、(1.548±0.038)倍,差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的(0.459±0.038)、(0.525±0.029)倍,差异均有统计学意义(P ＜0.05或＜0.01).结论 上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路.
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转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间质转化及其与钙蛋白酶的关系
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对肺泡上皮细胞上皮-间质转化的影响及与钙蛋白酶的关系.方法 体外培养人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为空白对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+钙蛋白酶抑制剂处理组、钙蛋白酶抑制剂组,给予相应处理后Western-blot和RT-PCR分别检测上皮细胞标志物E钙黏素和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙蛋白酶-1(Calpain-1)的表达.结果 与空白对照组对比,TGF-β1组钙蛋白酶-1的mRNA表达及蛋白表达明显增高(P＜0.01),E钙黏素的mRNA表达及蛋白表达均明显降低(P＜0.01),α-SMA的mRNA表达及蛋白表达明显增高(P＜0.01);加入钙蛋白酶抑制剂后再加入TGF-β1刺激,相对于TGF-β1处理组,钙蛋白酶-1的mRNA表达及蛋白表达明显降低(P＜0.01),E钙黏素的mRNA表达及蛋白表达明显升高(P＜0.05),α-SMA的mRNA表达水平及蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),而与对照组比较,钙蛋白酶-1、E钙黏素、α-SMA表达无明显差异(P＞0.05);单加入钙蛋白酶抑制剂后,与空白对照组比较,钙蛋白酶-1、E钙黏素、α-SMA的mRNA表达及蛋白表达无明显差异(P＞0.05).结论 TGF-β1可以通上调钙蛋白酶的表达诱导A549细胞发生上皮-间质转化.
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MicroRNA在胃癌上皮-间质转化中的研究进展
上皮-间质转化不仅参与正常胚胎发育过程中器官和组织的生成,而且也有助于提高癌细胞的侵袭及转移.当上皮-间质转化受到刺激时,细胞和细胞之间黏附及极性由于黏附分子如E-钙黏蛋的消失而被打乱,导致细胞之间的相互作用发生改变,导致细胞发生间充质表型的改变,终激活癌细胞的迁移和侵袭.研究证明部分转录因子、生长因子以及相关信号通路参与上皮-间质转化过程,而miRNA可通过调控癌基因或抑癌基因参与胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及转移过程,其中也涉及上皮-间质转化的调控.本文就近年来miRNA在胃癌EMT过程中的具体调控机制予以综述.
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骨膜蛋白与上皮-间质转化标志物在结直肠癌中表达相关性的研究
目的 探讨结直肠癌中骨膜蛋白与上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin和临床病理参数间的相关性.方法 通过免疫组织化学染色方法检测106例结直肠癌患者癌组织和对应癌旁正常组织中骨膜蛋白、E-cadherin和N-cadherin表达情况,并对其结果进行分析.结果 骨膜蛋白、E-cadherin和N-cadherin在结直肠癌组织中表达与对应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(62/106 vs 21/106,x2=34.027,P＜0.05;43/106 vs 89/106,x2 =42.480,P＜0.05;66/106 vs 19/106,x2 =43.382,P＜0.05).结直肠癌组织中骨膜蛋白表达水平与肿瘤分化程度、肿瘤浸润程度、淋巴结转移及远处转移有关(x2=7.752,P =0.007; x2 =5.008,P=0.031; x2=10.227,P =0.002; x2 =8.001,P=0.006),与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.435,P＜0.001),与N-cadherin表达呈正相关(r=0.213,P=0.028).结论 骨膜蛋白可能通过调节上皮间质转化过程参与结直肠癌的发生发展.
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微小RNA-122对肝癌细胞迁移和侵袭的影响以及相关机制
目的 检测微小RNA-122(miR-122)在肝癌中的表达,探讨其在肝癌细胞侵袭与迁移中的作用及机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌组织、癌旁组织、正常肝细胞、肝癌细胞系中miR-122的表达,通过转染升高或抑制肝癌细胞系中miR-122的表达,Transwell实验分析其对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,蛋白印迹(western blot)检测相关机制蛋白表达量,包括胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1 R)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin).结果 肝癌组织中miR-122表达水平低于癌旁组织[(20.5±4.2)×10-4比(30.3 ±5.6) ×10-4];与HBV(-)组比较,HBV(+)组肝癌组织miR-122表达降低更为明显[(25.6±3.5)×10-4比(19.1±3.2)×10-4].几种肝癌细胞系中,MHCC-97H的miR-122表达降低为明显[(33.7±1.3)×10-3],SMMC-7721表达相对较高[(65.3±1.3)×10-3].与各自阴性对照比较,过表达miR-122抑制MHCC-97H侵袭与迁移[(218.7±24.O)个比(418.0±23.4)个,(392.7±12.8)个比(706.6±19.8)个];抑制miR-122表达促进SMMC-7721侵袭和转移[(233.0±14.4)个比(145.0±8.0)个,(561.3±9.6)个比(218.0±11.3)个].Western blot实验结果显示升高miR-122表达抑制IGF-1R、Vimentin表达,促进E-cadherin表达.结论 miR-122在肝癌组织中表达降低,HBV(+)肝癌组织中降低更为明显,miR-122可通过IGF-1 R调控上皮-间质转化抑制肝癌的侵袭与迁移,miR-122可能为肝癌的治疗提供新的靶点.
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转移相关基因3、锌指转录因子Snail1、E-钙黏素在胆道闭锁患儿肝脏中的表达及相互关系
目的 探讨胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中转移相关基因3(MTA3)、锌指转录因子Snail1、E-钙黏素(E-cadherin)三者的表达、相关性及其在胆道闭锁发生、发展中的作用.方法 选取2012年2月至2013年9月河北医科大学第二医院小儿外科收治的21例胆道闭锁、17例胆总管囊肿及10例肝破裂患儿的肝组织活检标本,相应分为胆道闭锁(BA)组、胆总管囊肿(CCC)组及正常肝(NL)组.分别应用免疫组织化学法、逆转录-多聚酶链反应从蛋白和基因mRNA水平检测对比三组肝组织中MTA3、Snail1、E-cadherin表达情况.结果 在蛋白水平及mRNA水平BA组肝组织中Snail1呈高表达,MTA3、E-cadherin均呈低表达,MTA3和Snail1的表达呈负相关(r=-0.671,P＜0.05;r=-0.862,P＜0.05),Snail1和E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.571,P＜0.05;r=-0.715,P＜0.05),MTA3和E-cadherin的表达呈正相关(r=0.671,P＜0.05;r=0.752,P ＜0.05).结论 肝组织中MTA3减少,可能会降低对Snail1的抑制,进一步抑制E-cadherin的表达,促使胆管上皮EMT发生,导致BA的发生与发展.
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Notch-3表达与胰腺癌患者上皮-间质转化及预后的关系
目的 探索Notch-3表达与胰腺癌患者上皮-间质转化(EMT)及预后的关系.方法 收集2004年1月至2012年10月在我院接受根治手术的胰腺癌患者的临床资料.对切除标本进行Notch-3、钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)免疫组化染色,Imagingpro plus 3.0分析染色强度.Kaplan-Meier法分析胰腺癌患者预后.结果 在67例纳入研究的胰腺癌患者中,41例(61.2％)E-cadherin低表达,44例(65.6％)高表达Vimentin,40例(59.7％) Notch-3高表达.Notch-3表达与Vimentin表达正相关(R2=0.872,P＜0.05),与E-cadherin负相关(R2=0.570,P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,E-cadherin、Vimentin及Notch-3高表达患者的中位生存期分别为(25.2±2.3)、(14.8±0.9)及(15.8±0.8)个月;低表达组患者的中位生存期分别为(14.3±1.0)、(25.5±2.4)及(25.1±2.9)个月,差异具有统计学意义(均P＜0.05).结论 Notch-3表达与胰腺癌患者EMT密切相关;E-cadherin低表达、Vimentin及Notch-3高表达胰腺癌患者预后较差.
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上皮-间质转化是肝动脉断流后肝癌侵袭转移潜能增加的重要机制
目的 研究肝动脉断流对原发性肝癌(简称肝癌)侵袭转移潜能的影响.方法 采用24只 BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植模型.种瘤术后2周荷瘤裸鼠随机分为2组干预:一组行肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL);另一组假手术作为对照.每组随机抽取6只裸鼠于干预术后4周进行肿瘤大小和肺转移率的比较,并用免疫组化(S-P法)及Western blot检测移植瘤上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子的表达;其余荷瘤动物观察生存时间.体外以100 μmol/L CoCl2模拟乏氧环境,观察MHCC97L肝癌细胞生长和凋亡以及运动和侵袭能力,用免疫荧光和Western blot检测细胞EMT标志分子的变化.结果 HAL抑制肝癌生长[(1996.8±223.6)mm3比(4049.1±596.5)mm3,P＜0.01],但增加肺转移率(6/6比1/6,P＜0.05),因此不能改善荷瘤动物生存期[(56.0±4.6)d比(60.7±5.8)d,P＞0.05].这与乏氧环境中癌细胞运动[(472.7±84.3)μm比(378.8±73.7)μm,P＜0.05]和侵袭能力[(154.4±30.5)个比(45.2±7.6)个,P＜0.01]增强有关,主要涉及E-cadherin下降及N-cadherin和Twist上调的EMT机制.结论 HAL抑制肝癌生长,促进其侵袭转移潜能,与乏氧环境中癌细胞EMT相关.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过Snail诱导肝卵圆细胞上皮-间质转化
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)诱导肝卵圆细胞(WB-F344)上皮-间质转化(EMT)和促使其迁移能力增强的机制.方法 流式细胞术检测肝卵圆细胞的干细胞标志物.应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA、TSA、NaBu)处理肝卵圆细胞,诱导EMT,观察其形态学变化；划痕试验观察肝卵圆细胞迁移能力的变化.Western blot、荧光定量PCR检测肝卵圆细胞上皮和间质Marker变化及EMT关键转录因子Snail的变化,激光共聚焦检测Snail入核情况.siRNA干扰Snail后,Western blot检测EMT Marker的变化,并观察其形态变化.结果 流式细胞术检测显示在培养过程中肝卵圆细胞干细胞性能未发生改变.HDACi可以诱导WB-F344细胞的EMT,包括形态改变、上皮细胞标志物E-cadherin下调和间质细胞标志物Vimentin上调.HDACi可以促进EMT的关键转录因子Snail的蛋白水平和mRNA水平的增加,以及促进其核转录.siRNA干扰Snail可以抑制HDACi诱导肝卵圆细胞EMT过程.划痕试验显示HDACi可以提高肝卵圆细胞的迁移能力.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过促进snail表达和入核来诱导肝卵圆细胞EMT,提高其迁移能力.
关键词： 肝卵圆细胞 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 上皮-间质转化 -
热休克蛋白75在肝癌细胞株中的表达及其在上皮间质转化中的作用
目的 检测热休克蛋白75(Mortalin)在肝癌细胞株中的表达,探讨其在肝癌细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法 选择5株人肝癌细胞和1株正常肝细胞(L02),采用蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin的表达水平.应用RNA干扰技术(shRNA)抑制肝癌细胞株MHCC97H内源Mortalin基因的表达.采用MTT试验和流式细胞仪检测细胞活性,通过蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin、E-cadherin和Vimentin的表达水平.实验设空白组、对照组和shRNA组.结果 Mortalin在Hep3B、MHCC97H、HepG2和HCCLM3中表达,而在MHCC97L和L02中不表达.干扰24 h后,绿色荧光显示质粒成功转进MHCC97H.MTT试验显示转染对三组细胞的毒害作用分别为0％、2.5％和3.5％,流式细胞仪检测三组细胞早期凋亡率分别为0.8％,4.5％和9.2％.这说明转染没有引起严重的细胞损伤.干扰48 h后,蛋白印迹和实时定量PCR检测结果显示,shRNA明显抑制了Mortalin的表达.收集干扰24 h、48 h、72 h和96 h后的细胞,应用蛋白印迹和实时定量PCR分析Mortalin、E-cadherin和Vimentin的关系,发现Mortalin表达抑制伴随着E-cadherin表达升高和Vimentin 表达降低.结论 Mortalin的表达可能与肝癌细胞的转移表型有关,可促进肝癌细胞上皮间质转化.
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抑制残癌细胞上皮间质转化能降低肝动脉结扎增强的肝癌转移潜能
目的 探讨抑制残癌细胞上皮-间质转化对肝动脉断流后肝癌增强的转移潜能的影响.方法 采用MHCC97肝癌细胞系和52只BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植并肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL)模型.另12只荷瘤裸鼠行假手术设为对照.分别观察肝动脉结扎+阻滞剂LY294002以及肝动脉结扎+不同剂量干扰素α(intererin-α,IFN-α)对移植瘤生长和肺转移率的影响.体外将肝癌细胞MHCC97置于缺氧环境中培养.Western blot检测细胞和移植瘤内HIF-1 α、E-cadherin、N-cadherin、Twist表达.结果 肝动脉结扎虽然减小肝癌移植瘤体积(2002.97 ±331.28) mm3 vs.(3921.23 ±786.21) mm3,t =4.052,P＜0.01),但增加荷瘤裸鼠肺转移率( 10/12 vs.4/12,P＜0.05).联合阻滞剂LY294002治疗不能进一步抑制肝癌生长,但显著减少裸鼠肺转移(1/6 vs.10/12 vs.100％,P＜0.05).中等以上剂量的IFN-α(7.5×106 U/kg)显著降低肝动脉结扎诱导的肺转移率(0/6 vs.2/6 vs.100％,P＜0.01,P＜0.05).对移植瘤和细胞样本的分析证实阻滞剂LY294002或中等以上剂量的IFN-α均抑制缺氧肝癌细胞内N-cadherin和Twist上调,增加E-cadherin表达.结论 阻断肝癌细胞上皮-间质转化能够抑制缺氧诱导的肝癌侵袭、转移.
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microRNA-21通过上皮间质转化促进胆管癌细胞侵袭转移的研究
目的 探讨microRNA-21(miR-21)对胆管癌RBE细胞侵袭转移能力的影响及其内在机制.方法 miR-21及其抑制基因片段(miR-21i)通过慢病毒载体感染胆管癌RBE细胞, RT-PCR用于检测RBE细胞中miR-21表达;Transwell体外侵袭实验和细胞划痕试验用于检测RBE细胞侵袭及转移能力;Western blotting用于检测PTEN蛋白和上皮间质转化(EMT)特征性蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达情况.结果 miR-21过表达促进RBE细胞侵袭和转移, miR-21低表达抑制RBE细胞的侵袭和转移.miR-21过表达能够降低PTEN蛋白和E-cadherin蛋白,增强N-cadherin和Vimentin蛋白的表达;转染miR-21i抑制基因组(miR-21i)组则有相反的效果,而转染空白基因组(对照组)相应蛋白表达无明显变化.结论 miR-21起到癌基因的作用,可增强胆管癌细胞侵袭和转移能力,其机制是通过调节抑癌基因PTEN及改变EMT相关蛋白的变化.这些发现为胆管癌侵袭转移的分子机制提供新的科学依据.
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核因子κB在缺氧微环境中对胰腺癌细胞上皮-间质转化调控作用的实验研究
目的 探讨缺氧条件下核因子(NF) κB对胰腺癌细胞上皮-间质转化的调控作用.方法 在常氧和缺氧条件下培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1,分为常氧组和缺氧组.通过光镜观察细胞形态学变化,通过Western blot法检测上皮标志物和间质标志物蛋白表达,通过Western blot 法和电泳凝胶迁移实验检测NF-κB P65的蛋白表达和DNA结合活性,通过Transwell小室观察细胞迁移侵袭能力,通过cell counting kit-8法检测细胞生存率.分别采用药物及siRNA法抑制缺氧细胞NF-κB P65表达后,重复检测上述指标.结果 胰腺癌细胞在缺氧条件下培养48 h后,细胞失去多边形,获得纺锤形态,细胞间黏附减少并出现伪足,迁移侵袭能力增强,对吉西他滨药物敏感性下降,上皮标志物蛋白表达下调,间质标志物蛋白表达上调,NF-κB P65蛋白表达和DNA结合活性升高；阻断缺氧细胞NF-κB P65表达后可逆转上述现象.结论缺氧可能通过上调胰腺癌细胞NF-κB P65活性,调控上皮-间质转化相关蛋白表达,增强其迁移侵袭能力,降低对吉西他滨的药物敏感性.
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TGF-β1诱导瘢痕疙瘩表皮细胞发生上皮-间质转化的研究
目的 通过在体外应用TGF-β1诱导瘢痕疙瘩表皮细胞,探讨其是否发生上皮-间质转化,以及上皮-间质转化对表皮细胞中干细胞表面标志的影响.方法 采集耳部瘢痕疙瘩标本培养表皮细胞,以培养基中终浓度为1 ng/ml的TGF-β1诱导瘢痕疙瘩表皮细胞5d作为实验组,以未诱导的瘢痕疙瘩表皮细胞作为阴性对照组,每组样本均为3例.分别采用免疫荧光染色、Real-time PCR和Western blot检测上皮-问质转化相关标志和基因的表达,并采用Real-time PCR检测表皮干细胞表面标志的表达.采用独立样本t检验对检测结果进行统计学分析.结果 上皮-间质转化相关基因Snail2的mRNA表达从诱导前的0.91±0 23上升至诱导后的1.69 ±0.10,间质细胞标志波形蛋白由诱导前5.86±2.07明显增加至诱导后的24.29 ±5.39(P ＜0.05),而上皮标志E-钙粘蛋白的mRNA表达由诱导前的1.06 ±0.19下降为诱导后的0.65 ±0.09,表达减弱;于细胞表面标志CD29和Lgr6的mRNA表达分别由诱导前0.55±0.14和1.61±0.31增加至诱导后1.19 ±0.12和3.84±0.62,均明显升高(P＜0.05).免疫荧光染色和Western blot均证实细胞E-钙粘蛋白减少,波形蛋白增加,同时p-Smad3表达增加.结论 TGF-β1通过诱导Snail2基因上调启动瘢痕疙瘩表皮细胞发生上皮-间质转化,此过程有TGF-β1/Smad3信号通路参与,而瘢痕疙瘩表皮细胞中干细胞的表面标志发生改变.
