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尼克酰胺对膀胱癌细胞的作用及其机制
目的 探究尼克酰胺对膀胱癌细胞的作用及其机制.方法 采用浓度梯度的尼克酰胺对膀胱癌细胞系UM-UC-3及T24行加药处理,采用MTT实验、流式细胞检测、Transwell实验检测其表型并与对照组对比,Western blot检测特定相关蛋白加药后改变以探究其作用机制.结果 加入尼克酰胺后两种膀胱癌细胞系均出现增殖能力下降、细胞周期G0/G1期阻滞、迁移能力下降、且浓度越高越明显.并且周期相关蛋白Cyclin D1,CDK2,CDK4,CDK6和EMT(上皮-间质转化)相关蛋白E-Cadherin和Vimentin均出现相应改变.结论 尼克酰胺可以抑制膀胱癌细胞系的增殖和迁移,并且诱导其G0/G1期周期阻滞,对迁移的抑制是通过对EMT的抑制引起的.
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Cell Stem Cell:鳞状细胞癌肿瘤起源细胞特异性染色质决定癌细胞上皮-间质转化
癌细胞发生“上皮-间质转化”(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指肿瘤上皮细胞失去粘附性,丧失上皮细胞的特异性标准物,并获得间充质细胞的特异性标准物而使游走、迁移、侵袭能力增强,但为什么有的癌细胞会发生EMT,这在一定程度上反应了肿瘤的异质性.长期以来,人们猜测肿瘤细胞的异质性可能与肿瘤起源细胞的差异性及内在特质有关,不同的肿瘤起源细胞在致癌因素的打击下,可能获得了不同的肿瘤表型特征,但一直没有研究证实这一假设.
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肝纤维化的细胞和分子机制研究进展
肝纤维化指慢性肝损伤之后,肝组织的修复过程;表现为炎症细胞募集并诱发级联反应,肝肌成纤维细胞激活和再生,细胞外基质成分如胶原的过度形成和沉积.反复的损伤-炎症-纤维化发生过程和累积导致纤维间隔和假小叶形成.肝脏小叶结构被肝硬化结节取代,血管重构,终导致肝衰竭.
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MicroRNA与肿瘤上皮-间质转化关系的研究进展
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,在肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用.microRNA (miRNA)作为一类长度为19-25个核苷酸的短链非编码RNA,是转录后调控网络中重要的调控因子,与肿瘤EMT相关基因表达之间关系密切,已成为肿瘤领域的研究热点.现对近年来miRNA与肿瘤EMT关系的研究进展做一综述.
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TGF-β/Smad信号通路与食管癌上皮间质转化的研究进展
国内外的多项研究显示,在消化系统肿瘤中普遍存在上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)现象,并与浸润转移及预后差密切相关.已有研究发现转化生长因子-β(TGF-β)在诱发EMT过程中起重要作用,而Smads蛋白是TGF-β下游关键的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子.本文就食管癌上皮-间质转化与TGF-β/Smad信号通路关系的研究进展作一综述.
关键词： 上皮-间质转化 食管癌 TGF-β/Smad -
TGF-β对EMT的诱导及EMT抑制剂研究进展
上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的主要途径.转化生长因子β(TGF-β)是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子.本文系统介绍TGF-β及其诱导肿瘤细胞发生EMT的信号通路,并综述抑制EMT发生的新抑制剂.
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EMT与胚胎发育及肿瘤侵袭转移
上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞受到细胞外因子刺激后向间质细胞转化的现象.EMT作用于钙粘蛋白,破坏细胞间连接,并受多种生长因子与转录因子调节.在胚胎发育及肿瘤的侵袭与转移起到重要作用.
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PAK5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭
目的:探讨p21活化激酶-5(p21-activated kinase 5,PAK5)蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制.方法:观察PAK5过表达对乳腺癌细胞形态的影响,人乳腺肿瘤细胞MCF-7通过慢病毒感染稳定表达Flag-PAK5.然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin),纤维连接蛋白(Fibronectin)和波形蛋白(vimentin)的表达.后通过Transwell实验检测过表达PAK5对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响.结果:过表达PAK5蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭形变化,下调E-cadherin蛋白,促进乳腺癌细胞迁移和侵袭.结论:PAK5可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮-间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生.
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β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化中的作用及相关机制
目的:探讨β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用以及相关分子机制.方法:利用siRNA靶向沉默膀胱癌细胞系T24细胞的β-catenin基因,并利用Real-time quantitative PCR和Western blot实验验证siRNA敲减效率.通过Transwell实验检测β-catenin敲减后T24细胞的侵袭能力,进一步使用Real-time quantitative PCR和Western blot实验检测β-catenin敲减后T24细胞的EMT相关标志物的变化.后,通过下载TCGA数据库,并分析β-catenin与EMT相关标志物的相关性.结果:我们成功在mRNA和蛋白水平上沉默了β-catenin.通过Transwell实验发现,与对照组相比,β-catenin敲减组细胞的侵袭能力下调.与对照组相比,β-catenin敲减组的Slug蛋白、Vimentin蛋白和mR-NA下调,E-cadherin蛋白和mRNA上调.通过分析TCGA数据库发现,β-catenin与Slug(r=0.1835,P=0.0002)和Vimentin(r=0.1903,P=0.0001)均呈正相关.结论:β-catenin通过调控Slug的表达从而调控膀胱癌细胞的EMT.
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miR-489抑制结直肠癌细胞的侵袭转移
目的:探究miR-489在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达情况及其临床意义,并进一步探究miR-489对CRC细胞的侵袭迁移的作用.方法:应用Real-time PCR检测miR-489在CRC组织和细胞系中的表达情况;分析miR-489与CRC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-489对CRC细胞的侵袭与迁移能力的影响;Western blot探究miR-489对CRC细胞上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用.结果:Real-time PCR结果显示miR-489在CRC组织和细胞系中均为显著性低表达(P＜0.05);统计学分析显示miR-489的表达量与CRC的静脉浸润、浸润深度以及淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的侵袭与迁移;Western blot结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的EMT.结论:miR-489在CRC中为低表达,其能够通过抑制CRC细胞的侵袭、迁移与EMT发挥其抗CRC作用.
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CUEDC2通过上皮-间质转化促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移
目的:探讨CUE结构域2(CUE domain-containing 2,CUEDC2)蛋白对人乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制.方法:人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染的Myc-CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)和转录因子SLUG的表达.结果:过表达CUEDC2蛋白能够下调E-cadherin蛋白和基因的表达,而上调转录因子SLUG基因和蛋白的表达.结论:CUEDC2可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮-间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生,CUEDC2可能是人乳腺肿瘤侵袭转移的治疗靶点.
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Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达及意义
目的:检测Twist1在乳头状甲状腺癌组织及细胞中的表达情况,并探讨其与乳头状甲状腺癌的临床病理因素和生物学行为的关系.方法:研究应用免疫组织化学方法检测120例乳头状甲状腺癌组织中Twist1的表达.体外细胞研究构建靶向Twist1的shRNA真核表达质粒,转染乳头状甲状腺癌细胞,采用MTT法检测细胞转染前后增殖能力变化,通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估甲状腺癌细胞株体外侵袭能力的变化;同时检测细胞间连接及黏附相关蛋白E-cadherin、Vimentin等的表达情况.结果:免疫组化结果显示,Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达水平与肿瘤的淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),与其他临床病理因素(如临床分期、分化程度等)没有明显相关性.RNA干扰使乳头状甲状腺癌细胞株IHH-4中Twist1的表达下调;与阴性对照组比较,Twist1蛋白表达分别降低了50％(KD-A)、60％(KD-B)和64％(KD-C).且E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调.结论:Twist1在人乳头状甲状腺癌中表达上调,与肿瘤的淋巴结转移相关.针对Twist1的shRNA真核表达载体能明显抑制乳头状甲状腺癌细胞的Twist1表达,并有效抑制乳头状甲状腺癌细胞的体外侵袭能力.Twist1可能通过调控乳头状甲状腺癌的上皮-间质转化过程来影响其局部浸润及淋巴结转移.
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缺氧对人乳腺癌细胞系 MCF -7生物学行为的影响
目的：研究缺氧对人乳腺癌细胞系 MCF -7的生物学行为，增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α（hyPoxic - inducible factor 1α，eIF -1α）的表达，检验其在这一过程中的作用，并进一步探讨作用机制。方法：慢病毒感染细胞，干扰乳腺癌细胞系 MCF -7中 eIF -1α的表达，得到 eIF -1α表达正常的乳腺癌细胞系 MCF -7- NC 和 eIF -1α表达受干扰的细胞系 MCF -7- eIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧，用 MTT 法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力，ANOVA 检验检测其增殖能力的区别。Transwell 实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力，计数通过 Transwell 小室的细胞，ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达，检验细胞系是否发生了上皮-间质转化（ePithelial - mesenchymal transition，EMT）。结果：MTT 实验结果：正常表达 eIF -1α的 MCF -7- NC 的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱，其差别具有统计学意义（P ﹤0.05）。eIF -1α表达受干扰的 MCF -7- eIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell 实验检测细胞的侵袭能力，缺氧后正常表达 eIF -1α的 MCF -7- NC 的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强，其差别具有统计学意义（P ﹤0.05）。eIF -1α表达受干扰的 MCF -7- eIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后，正常表达 eIF -1α的细胞系 MCF -7- NC 发生上皮-间质转化（ePithelial - mesenchymal transition，EMT）。共聚焦荧光染色显示：在诱导缺氧后，正常表达 eIF -1α的 MCF-7- NC 细胞极性发生变化，呈长梭形改变，上皮标志物人广谱角蛋白（Pan - cytokeratin，P - CK）表达下调，间质标志物人α平滑肌动蛋白（α- SMA）表达上调；而 eIF -1α表达受干扰的 MCF -7- eIF△无明显 EMT变化。结论：在体外条件下，缺氧可以引起乳腺癌细胞系 MCF -7增殖能力减弱、侵袭能力增强，可以诱导乳腺癌细胞 MCF -7发生 EMT，干扰缺氧诱导因子亚基 eIF -1α的表达，则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。
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ZEB1在宫颈癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨锌指 E -盒结合同源异形盒1（ZEB1）在宫颈癌组织和细胞中的表达及其与宫颈癌发生、发展的关系。方法：应用免疫组织化学、免疫细胞化学、蛋白免疫印迹和 RT - PCR 法检测65例宫颈鳞癌、31例宫颈上皮内瘤变、40例正常宫颈组织以及4株宫颈癌细胞系 HeLa、SiHa、C33- A、Caski 中 ZEB1的表达情况，并分析其与宫颈癌临床及病理特征的关系。结果：免疫组化结果显示 ZEB1在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中的阳性表达率依次降低，分别为81.5%、77.4%、30%（P <0.05）。同时，RT - PCR 和蛋白免疫印迹分析显示 ZEB1在宫颈癌组织中的表达较正常宫颈组织高，具有统计学差异（P <0.05）。ZEB1的表达情况与宫颈癌的病理分化程度、临床分期和是否淋巴结转移有关（P <0.05），与患者年龄无关（P >0.05）。另外，免疫细胞化学、蛋白免疫印迹和 RT - PCR 显示 ZEB1在宫颈癌细胞系中均有不同程度的表达。结论：ZEB1的异常表达与宫颈癌的发生、发展密切相关，其可能促进宫颈癌的浸润和转移进程。
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siRNA特异性沉默HIF-1α对缺氧培养的OCM-1细胞中Vimentin表达的影响
目的：研究小干扰RNA （ siRNA ）特异性沉默缺氧诱导因子-1α（ HIF-1α）对缺氧状态下人眼葡萄膜黑色瘤OCM-1细胞中波形蛋白（Vimentin）表达的影响，初步探讨HIF-1α对葡萄膜黑色瘤上皮-间质转化（ EMT ）的调控作用。
方法：体外常氧培养及缺氧培养OCM-1细胞。其中，缺氧培养是通过在培养基中加入浓度为100μmol/L的氯化钴（ CoCl 2）模拟肿瘤内部缺氧微环境，并将缺氧培养细胞分为单纯缺氧组、HIF-1α干扰组、β-actin阳性对照组、无义寡核苷酸阴性对照组及空载脂质体对照组。体外设计合成siRNA（包括HIF-1α-siRNA、β-actin-siRNA及阴性对照），以Lipofectamine TM 2000为载体介导siRNA转染缺氧培养的OCM-1细胞，以RT-PCR和Western blot检测缺氧培养前后及转染前后HIF-1α、Vimentin基因和蛋白的表达。
结果：单纯缺氧组与常氧组相比，HIF-1αmRNA表达无明显差异（ P＞0．05），蛋白表达显著升高（ P＜0．01），而Vimentin mRNA和蛋白的表达均显著升高（ P＜0．01）。缺氧培养的各组之间相比，阳性对照组β-actin mRNA表达下降（ P＜0．01），证实转染成功；干扰组HIF-1α、Vimentin mRNA和蛋白表达均明显下降（ P＜0．01），阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别（P＞0．05）。
结论：缺氧可促使OCM-1细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并可通过转录激活下游靶基因 Vimentin，使其在mRNA和蛋白水平表达均升高，提示HIF-1α可能参与调控葡萄膜黑色瘤的EMT ，进而促进肿瘤侵袭、转移；HIF-1α-siRNA转染OCM-1细胞可成功下调HIF-1α及Vimentin的表达，说明从分子水平抑制HIF-1α的表达，可能抑制肿瘤侵袭、转移，从而为肿瘤治疗提供新方向。 -
转录因子Snail、Slug在人宫颈癌上皮-间质转化中的作用
目的 探讨调控因子Snail、Slug对E-钙黏蛋白的调控和参与人宫颈癌细胞转移侵袭的机制.方法 对20例正常宫颈组织标本及85例宫颈鳞癌标本制成石蜡包埋切片,采用免疫组织化学染色方法检测Slug基因和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达；采用免疫荧光化学染色检测转录因子Snail蛋白和上皮标志物E-cadherin的表达.结果 在宫颈鳞癌组织中Slug蛋白和Vimentin的阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P＜0.05),随着临床分期增高,其阳性表达率有升高趋势,但未达到统计学差异(P＞0.05).随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其阳性表达率明显上升(P＜0.05)；Snail蛋白在鳞癌组织中荧光强度高于正常宫颈组织,浸润癌组织高于宫颈CIN组织(P＜0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显增强,但差异亦无统计学意义(P＞0.05)；E-cadherin在正常宫颈组织中荧光强度高于肿瘤组织,宫颈CIN组织高于浸润癌组织(P＜0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显减弱(P＜0.05).结论 人宫颈组织上皮-间质转化在宫颈癌侵袭进展中可能发挥重要的作用,同时Snail、Slug信号通路可能参与了宫颈癌的侵袭转移过程.
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介入治疗前后局部晚期宫颈癌细胞中N-cadherin、E-cadherin的表达及其意义
目的 检测介入治疗前、后局部晚期宫颈癌细胞中黏附分子N-cadherin、E-cadherin表达的变化,评价其对肿瘤转移和浸润的影响.方法 采用免疫组织化学染色(SP)方法,检测14例介入治疗前后局部晚期宫颈癌患者癌细胞中E-cadherin和N-cadherin的表达情况.结果 介入治疗前E-cadherin在局部晚期宫颈癌细胞中的阳性表达率为62.5%,N-cadherin的阳性表达率为100%.介入治疗后E-cadherin的阳性表达率增至100%,但表达增加无统计学意义(P＞0.05);N-cadherin的阳性表达率下降为71.4%,表达下降有统计学意义(P＜0.05).结论 介入治疗能够降低肿瘤细胞的间质表型分子N-cadherin的表达,有可能促进上皮表型分子标志物的正常表达,从而降低肿瘤的侵袭及浸润行为.
关键词： 介入治疗 宫颈癌 E-cadherin N-cadherin 上皮-间质转化 -
上皮-间质转化相关标记蛋白在硅肺纤维化大鼠硅结节中的表达
目的 探讨体内一次性支气管灌注二氧化硅(SiO 2)粉尘致大鼠硅肺纤维化后上皮-间质转化现象在硅结节中的表达.方法 大鼠体内一次性支气管灌注SiO 2粉尘(50 mg/mL)混悬液(模型组)和生理氯化钠1.0 mL(对照组),并分为模型对照4周、8周组和硅肺模型4周、8周组.激光共聚焦显微镜检测肺泡表面活性物质(SP-A)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的共定位;免疫组织化学法检测α-SMA与波形蛋白(vimentin)的定位;Western blot法检测E-钙黏蛋白(E-cad)、SP-A、vimentin、α-SMA及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 在SiO 2粉尘灌注后,大鼠肺内有硅结节的形成,并且会有上皮细胞和肌成纤维细胞的共定位表达.在上皮细胞向肌成纤维细胞形态转变过程中上皮细胞标志物SP-A、E-cad明显降低,硅肺模型4周组SP-A、E-cad蛋白的表达分别为对照组的50％,8周组为对照组的21％和35％;而间质细胞标志物α-SMA、vimentin表达显著增强,分别为对照4周组的1.6倍和3.7倍,为对照8周组的1.6倍和2.9倍.同时伴随Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达显著增强,分别为对照4周组的1.7倍和1.6倍;为对照8周组的1.6倍和1.8倍(P<0.05).结论 一次性支气管灌注SiO 2粉尘会导致大鼠发生硅肺纤维化,并在硅结节中会出现上皮-间质转化现象.
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E-cadherin与肿瘤侵袭、转移相关性研究进展
恶性肿瘤的侵袭、转移特性使其成为癌症患者死亡的首要原因,不仅给治疗带来了一定的难度,更让患者承受了身体及心理的巨大痛苦.探究恶性肿瘤侵袭、转移的机制,并针对其相关分子标志物寻找抑制靶点,是临床医务工作者及基础医学研究者面临的巨大挑战.恶性肿瘤的侵袭、转移机制是一个多方面因素相互作用的复杂过程,包括了肿瘤细胞自身生物学行为、肿瘤细胞生存的微环境、及各种细胞因子、信号通路等因素.上皮-间质转化是近年来肿瘤侵袭、转移领域的研究热点,而上皮型钙黏蛋白是上皮-间质转化过程中一种主要的蛋白标志物,更好的理解上皮型钙黏蛋白与上皮-间质转化的关系及它们在癌症进展中所涉及的机制,能够为晚期转移性肿瘤治疗及预防的相关研究提供理论及实验依据.因此本文就上皮-间质转化与肿瘤侵袭、转移的研究作一综述.
关键词： E-cadherin 上皮-间质转化 肿瘤 侵袭 转移 -
IL-1β引起食管鳞状细胞癌细胞上皮-间质转化的实验研究
目的 研究白细胞介素1-β(IL-1β)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 在细胞培养基中加入IL-1β,观察IL-1β处理48 h后ESCC细胞形态及EMT相关标志物的变化,另以加入PBS的ESCC细胞为阴性对照组.结果 IL-1β处理后ESCC细胞由上皮样形态转变为间质样形态.qRT-PCR与Western blot结果显示,IL-1β处理后上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达减少,间质标志物波形蛋白(Vimentin)和Slug表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-1β可引起ESCC细胞发生EMT.
