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TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化及对Twist1表达的影响
目的 探讨TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化(EMT)及对Twist1表达的影响.方法 采用10 ng/ml的TGF-β1作用结肠癌细胞SW480 72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力;细胞免疫荧光、Western blot和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测E-cadherin、Vimentin及Twist1的蛋白和mRNA表达.结果 经TGF-β1诱导72 h后,SW480细胞呈典型间质型细胞形态,且细胞的迁移能力明显增强(P＜0.05);E-cadherin蛋白及mRNA表达显著下降,Vimentin、Twist1蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P＜0.05).结论 TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮间质转化时可促进Twist的表达.
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上皮-间质转化与肝细胞癌炎症微环境的关系研究
目的 分别对肝细胞癌炎症微环境和其上皮-间质转化过程进行介绍,并对二者之间的关系做一综述.方法 通过对国内外相关文献的查阅和筛选,对上皮-间质转化与肝细胞癌炎症微环境二者之间的关系进行归纳和总结.结果 肝细胞癌炎症微环境中的许多炎症因子以及病毒基因编码蛋白都在其肿瘤的上皮-间质转化过程中扮演了重要角色,对肿瘤的侵袭转移推波助澜.结论 肝细胞癌的炎症微环境是其上皮-间质转化过程中不可或缺的角色,其炎症微环境的抑制和治疗可能在控制肿瘤侵袭转移方面起到更加积极的作用.
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Claudins在乳腺癌中的研究进展
目的 了解Claudins家族成员对乳腺癌细胞增殖、活化影响机制的研究进展.方法 检索近年来国内外有关Claudins在乳腺癌中研究进展的相关文献并对其进行综述.结果 Claudins在哺乳动物中有24个Claudin成员,在人类中Claudin-13缺失.Claudins的表达与分布模式具有高度的组织特异性,且在许多组织中表达多重Claudin蛋白.Claudin蛋白的表达可从转录水平进行调控、转录因子及合成后修饰协同调控、受后转录水平调控.Claudins家族与上皮-间质转化有关.目前研究较多较明确的主要有Claudin-1、-2、-4、-6及其他一些亚型,Claudin-1的表达可预示肿瘤的不良预后,Claudin-2与乳腺癌肝转移的关系密切,Claudin-4与三阴性乳腺癌密切相关,Claudin-6在乳腺癌形成中的作用尚有争议.除上述Claudins外,还有其他Claudins成员在乳腺健康组织及乳腺恶性肿瘤中起一定作用,Claudin-5有可能通过N-WASP和ROCK信号通路参与乳腺癌的转移,CD24和Claudin-7免疫抑制对乳腺浸润性导管癌预后有指导意义,Claudin-16和HAPLN3基因在人类乳腺癌中表达显著提高,Claudin-20导致乳腺癌细胞成为侵袭性较强的亚型且可减少上皮转化的抵抗.目前国际上提出了三阴性乳腺癌中Claudin-low亚型的概念,其在众多方面与其他亚型乳腺癌均有所不同,较三阴性乳腺癌中的其他亚型预后良好.结论 Claudin家族作为紧密连接蛋白的重要组成成员,已被证实与上皮-间质转化有关,认为Claudin家族在乳腺癌细胞的解离、活化、侵袭及转移方面起重要作用,但是究竟是哪些Claudin成员在乳腺癌侵袭、转移中起主要作用尚未有明确定论,除此之外,关于某些Claudin成员在乳腺癌中的作用目前也有相悖的研究,其原因有可能是某些Claudin成员在不同乳腺癌亚型中的作用不同或截然相反,所以未来仍需细化Claudin成员在不同乳腺癌亚型中的作用.
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肿瘤起始细胞及上皮-间质转化在肿瘤转移及耐药中的作用
目的 总结肿瘤起始细胞(tumor initiating Cells,TICs)和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其在肿瘤转移和耐药中的研究现状.方法 检索近年来国内外有关TICs和EMT及其与肿瘤转移和耐药关系的文献并做综述.结果 TICs是肿瘤细胞中一小群具有自我更新、高度增殖及多向分化能力的细胞,表达多种表面标志物,如CD133、CD44等,在肿瘤的侵袭、转移和耐药中起着重要的作用.EMT是肿瘤上皮细胞失去极性转变为间质细胞的一种现象,常见于胚胎发育及组织修复,能够促进肿瘤的侵袭、转移以及逃避宿主的免疫反应,EMT可能是TICs所致肿瘤转移和复发的根源.靶向TICs或EMT的治疗可能有效预防肿瘤的复发及改善患者的预后.结论 EMT是TICs致肿瘤转移及耐药的重要机理,对于TICs和EMT的研究可用于探索更有效的针对肿瘤的靶向治疗策略.
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上皮-间质转化在胃肠道肿瘤中的研究进展
目的 介绍上皮-间质转化(EMT)在胃肠道肿瘤中的研究现状.方法 收集近年来国内、外有关EMT及其调节因子与胃肠道肿瘤关系的文献并作综述.结果 EMT是胚胎发育的一个基本过程,在成熟上皮细胞中EMT的异常激活可以降低细胞间黏附分子表达进而促进肿瘤的转移.上皮细胞表面标志物E-钙黏素表达抑制和EMT发生密切相关,E-钙黏素转录抑制因子可能在调节EMT过程中起重要作用,并且这些转录抑制因子在胃肠道肿瘤中呈明显高表达.此外,EMT的发生可能在胃肠道肿瘤干细胞形成过程中起重要作用.结论 EMT及其调节因子在胃肠道肿瘤发生、侵袭和转移过程中起了重要作用,对于EMT及其调节因子的研究可以为肿瘤发生机理提供新的视角,为肿瘤治疗提供新的靶点.
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Ovol2基因的过表达抑制肺腺癌细胞远处转移及侵袭力的研究
目的 研究Ovol2基因对肺腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程及其侵袭能力的影响,以期为肺腺癌的靶向治疗提供一定的理论基础.方法 通过体外培养肺腺癌细胞株A549,并感染PLV-BSD-Ovol2及PLV-BSD-Control慢病毒形成实验组(过表达Ovol2)和对照组;通过实时荧光定量PCR实验(quantitative real-time PCR,Real-time PCR)检测与EMT相关基因的mRNA表达水平变化;用蛋白印迹法检测相关标记蛋白,如E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达水平;划痕实验(wound healing)及侵袭实验(transwell)比较实验组和对照组细胞的转移和侵袭能力的变化.结果 Ovol2基因过表达后,不论在mRNA还是在蛋白表达水平,E-钙黏蛋白表达上升,N-钙黏蛋白及波形蛋白表达下降;同时肺癌细胞的转移和侵袭能力也相应被抑制.结论 Ovol2基因的过表达会通过抑制肺腺癌细胞的EMT过程来抑制其远处转移和侵袭力.
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GOLPH3通过EMT促进食管癌转移的研究
目的 探讨GOLPH3在食管癌转移中的作用.方法 通过划痕实验、Transwell侵袭实验和3D培养等方法,研究GOLPH3对KYSE-140细胞迁移和侵袭能力的影响.用qRT-PCR法检测CYR61,CD44与Snail这三个上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子与GOLPH3的关系,初步探索GOLPH3对食管鳞癌细胞转移能力的影响.结果 GOLPH3对食管鳞癌细胞的迁移和侵袭有促进作用,且CYR61,CD44与Snail在食管鳞癌细胞中的表达水平与GOLPH3的表达呈正相关.结论 GOLPH3高表达可促进食管鳞癌细胞的上皮-间质转化,从而促进食管癌的转移和进展,发挥癌基因作用.
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盐酸川芎嗪联合顺铂对Lewis肺癌细胞侵袭转移能力的影响
目的:探讨盐酸川芎嗪联合顺铂(TMP+ DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭转移的影响及可能的分子机制.方法:体外培养绿色荧光蛋白(GFP)标记的小鼠Lewis肺癌细胞株(LLC-GFP),盐酸川芎嗪和顺铂处理后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,细胞黏附实验、Transwell小室实验检测细胞侵袭、黏附能力的改变,Wes卜em Blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达变化.结果:与对照组相比,盐酸川芎嗪呈剂量依赖性抑制小鼠Lewis肺癌细胞的增殖;Transwell实验、细胞黏附实验显示,盐酸川芎嗪联合顺铂作用细胞24h后,与对照组相比,细胞的侵袭、黏附能力均有不同程度的下降,其抑制率呈剂量效应(P ＜0.01);Western Blot实验表明,盐酸川芎嗪联合顺铂作用细胞24h后,与对照组相比,LLC-GFP细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显上调(P＜0.01).结论:盐酸川芎嗪联合顺铂可显著地抑制LLC-GFP细胞的生长、侵袭、黏附能力,其机制可能与其能上调E-cadherin蛋白表达水平相关.
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炎症加速癌症转移的驱动力
肿瘤微环境在癌变中发挥重要作用,这一点已经得到越来越多的共识.炎症组分存在并有助于肿瘤增殖、血管生成、转移以及对激素和化疗的抵抗.
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增生性玻璃体视网膜病变中上皮-间质转化机制研究现状
上皮-间质转化(EMT)是指上皮细胞在特定生理或病理情况下向间质细胞表型转变的过程；是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的重要病理变化。转化生长因子β等细胞因子通过调控下游信号通路诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞发生 EMT；微小 RNA 也参与调控 RPE 细胞发生 EMT。深入了解 EMT调控因素和相关信号通路,从而抑制 RPE 细胞发生 EMT,将为 PVR 防治提供新的途径。
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转化生长因子B3基因与腭融合
在腭发生过程中，腭突上皮（MEE）形成腭中缝（MES），而后MES裂解消失完成腭部融合，其中转化生长因子（TGF）B3在MES裂解过程中是不可缺少的。TGFB3调控MEE细胞发生上皮—间质转化（EMT）是目前MES裂解机制研究的热点。TGFB3蛋白通过激活磷酸化的Smad2与Smad4复合体和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）信号转导通路，需要淋巴细胞样增强因子1和扭曲蛋白等多种信号转录因子及其他信号的协调配合调控腭部EMT过程。本文重点对TGFB3基因在MES裂解过程中的作用、其介导的信号通路及相关研究进展等作一综述。
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肿瘤微环境与上皮-间质转化的机制
上皮-间质转化是恶性肿瘤浸润和转移的重要机制,而此过程的诸多环节均受肿瘤微环境的影响.因此,研究肿瘤微环境和上皮-间质转化的机制,建立相应的阻断途径,不仅对肿瘤的临床诊断和治疗方案的选择以及预后评估具有重要的意义,而且有可能为其设计新的抗浸润和转移治疗奠定理论和实验基础.下面就上皮-间质转化和肿瘤微环境及其两者间的关系作一综述.
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扭曲基因在成釉细胞瘤中的表达及其意义
目的 探讨扭曲基因(twist)在人成釉细胞瘤CAME)中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测40例AME标本和10例根尖囊肿标本中Twist的表达情况;用蛋白质印迹技术检测5例AME和1例根尖囊肿组织中Twist的表达情况,分析其临床病理意义.结果 Twist在AME和根尖囊肿组织中的阳性率分别为75.0%和20.0%,在AME中的表达明显高于根尖囊肿组织(P＜0.05);Twist在一般型AME中的表达水平明显高于单囊型(P＜0.05).与根尖囊肿组织相比较,Twist在AME中表达明显上调(P＜0.05),但单囊型AME与根尖囊肿相比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Twist在AME中高表达可能与AME的发生发展密切相关.
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IL-8诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化初探
目的 初步探讨白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)在诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的作用,为进一步深入研究卵巢癌恶性转移的分子机理奠定基础.方法 实时无标记细胞技术(RTCA)定量分析外源性人重组IL-8诱导卵巢癌细胞株SKOV3的动态迁移情况;Western blot检测IL-8 (100 ng/mL)诱导处理SKOV3细胞48 h后EMT相关蛋白的表达变化情况;采用Transwell分析经IL-8诱导处理后的SKOV3细胞侵袭情况.结果 RTCA定量结果显示,IL-8处理SKOV3细胞48 h后细胞的迁移达到平台期HL-8可使SKOV3细胞的上皮细胞标志物E-eadherin下调,而间质细胞标志物Vimentin和snail的表达上调,促进卵巢癌细胞发生EMT,SKOV3细胞的侵袭能力明显增强(P＜0.05).结论 IL-8可促使卵巢癌细胞获得EMT特性,从而增强其侵袭、迁移能力.
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肝星形细胞条件培养液对肝癌细胞上皮-间质转化的影响
目的:探讨人肝星形细胞条件培养液(HSC-CM)对肝癌细胞(HCC)上皮-间质转化的影响.方法:采用HSC-CM培养肝癌细胞(SMMC-7721),细胞划痕实验和transwell小室侵袭实验检测HSC-CM对SMMC-7721迁移和侵袭的影响,激光共聚焦显微术(LSCM)和Western blot分析CM培养下SMMC-7721中上皮标志物E-cad-herin、间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达变化,Western blot检测核转录因子Snail的表达水平.结果:HSC-CM培养的SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力增强,和常规培养的SMMC-7721细胞比较,差异有统计学意义(P ＜0.05);SMMC-7721上皮标志物E-cadherin蛋白表达下调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达上调,核转录因子Snail表达上调,与常规培养组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HSC-CM促进了SMMC-7721的上皮-间质转化.
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PRDX2基因沉默促进结直肠癌细胞上皮-间质转化增强侵袭转移能力
目的 探讨Peroxiredoxin 2 (PRDX2)基因沉默在结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其参与侵袭转移的可能机制.方法 将带有抗性的对照shRNA(shRNA-Control)和PRDX2shRNA(shRNA-PRDX2)慢病毒颗粒分别转染结直肠癌SW480细胞,转染后细胞分为PRDX2沉默组(shRNA-PRDX2)和空载对照组(shRNA-Control).采用免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测两组细胞中PRDX2蛋白和mRNA表达;以5 ng/mL的TGF-β1作用两组细胞,在0、48、72 h观察两组细胞形态学变化;划痕实验和Transwell小室分别检测两组细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot和qRT-PCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达.结果 与对照组相比,PRDX2沉默组细胞PRDX2蛋白和mRNA的表达显著降低(P＜0.05),成功建立PRDX2基因沉默稳定细胞株;经TGF-β1作用后,PRDX2沉默组细胞呈纺锤体样间质细胞表型,且迁移和侵袭能力明显增强;E-cadherin蛋白及mRNA水平表达显著下降,Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P＜0.05).结论 PRDX2基因沉默可促进结直肠癌SW480细胞发生EMT,从而增强细胞的侵袭和转移能力,可能与其转录调节Snail、Twist1表达有关.
关键词： Peroxiredoxin 2 基因沉默 结直肠癌 上皮-间质转化 侵袭转移 -
β拉帕醌联合PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制BGC-823细胞增殖和迁移
目的 研究β拉帕醌(β-1apachone)与磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)抑制剂NVP-BEZ235联合用药对人胃癌BGC-823细胞增殖与迁移的影响及机制.方法 将BGC-823细胞分为空白对照组、1μmol/Lβ-lapachone处理组、50 nmol/L NVP-BEZ235处理组及1μmol/L β-lapachone联合50 nmol/L NVP-BEZ235处理组.采用MTT法和平板克隆形成实验检测BGC-823细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平;划痕实验及TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail及β联蛋白(β3-catenin)的蛋白水平.结果 与β-lapachone处理组或NVP-BEZ235处理组相比,β-lapachone联合NVP-BEZ235处理组能更显著地抑制细胞的增殖和克隆形成能力,p-AKT、p-NF-κB、p-ERK及cyclin D1的蛋白表达下调明显;在联合处理组对细胞迁移的抑制更明显,EMT相关标志物E-cadherin表达上调,vimentin、Snail及β-catenin表达下调明显.结论 β-lapachone联合NVP-BEZ235可有效抑制BGC-823胃癌细胞增殖,可能与p-AKT、p-NF-κB、p-ERK和cyclin D1表达降低有关;并通过调控EMT进程,抑制BGC-823细胞的迁移.
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核因子κB抑制蛋白α在膀胱癌细胞系的表达与上皮-间质转化及体外侵袭能力负相关
目的 探讨核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)在不同膀胱癌细胞系的表达与上皮-间质转化(EMT)及肿瘤细胞体外侵袭能力的关系.方法 Western blot法比较人膀胱癌RT4细胞、5637细胞、235J细胞、J82细胞、T24细胞IκBα、上皮性钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达差异;通过TranswellTM实验比较5种细胞体外侵袭能力的差异;显微镜下观察并比较5种细胞形态学差异.结果 RT4细胞和5637细胞具有上皮细胞的形态学特征,253J细胞、J82细胞和T24细胞具有间质细胞的形态学特征.RT4细胞和5637细胞具有较高的E-cadherin表达水平,但不表达vimentin和N-cadherin.253J细胞、J82细胞和TT24细胞E-cadherin表达部分(253J)或完全(J82、T24)缺失,但vimentin和N-cadherin表达水平较高.RT4细胞和5637细胞的体外侵袭能力明显弱于253J细胞、J82细胞和T24细胞.RT4细胞和5637细胞IκBα表达水平明显高于253J细胞、J82细胞和T24细胞.结论 IκBα在膀胱癌细胞的表达水平与EMT及体外侵袭能力负相关.
关键词： 膀胱癌 上皮-间质转化 核因子-κB抑制蛋白α -
HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化
目的 探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT).方法 将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞.观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化.结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形；与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P＜0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P＜0.05；同时其迁移能力显著升高(P＜0.05).结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力.
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高氧及TGF-β1对肺泡Ⅱ型细胞上皮间质转化的影响
目的:探讨高氧及TGF-β1干预小鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)后,是否发生上皮间质转化(EMT)及其影响.方法:小鼠肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组、TGF-β1干预高氧暴露组.观察各组6、12、24、48 h细胞形态变化.应用细胞免疫荧光双标法及荧光定量PCR法检测各组各时间点肺表面活性物质B (SP-B)及成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)蛋白和mRNA的表达情况.结果:随着高氧及TGF-β1干预时间的延长,AECⅡ逐渐由鹅卵石样变成纺锤体形状,获得成纤维细胞样外观.同时,AECⅡ特异性标记SP-B表达逐渐减弱,成纤维细胞特异性标记FSP1表达逐渐增强,24 h时两者时可见明显的共表达.高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组及TGF-β1干预高氧暴露组24、48 h SP-B mRNA表达较同时间空气暴露组下调,而FSP1 mRNA表达较同时间空气暴露组上调.结论:高氧及TGF-β1均能诱导AECⅡ发生 上皮间质转化,且两者对EMT的作用具有时间依赖性.
