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siRNA下调Gli基因影响食管腺癌OE33细胞生长转移的实验研究
目的 研究Gli表达下调对食管腺癌OE33细胞生长转移的影响,并探讨其相关的分子机制.方法 将Gli1、Gli2 siRNA和空白对照siRNA转染OE33细胞48 h,实时荧光定量聚合酶链反应检测OE33细胞Gli1和Gli2 mRNA表达水平;采用Western blot检测OE33细胞中Gli1、Gli2、Cyclin D1、p27、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表达水平;流式细胞术检测OE33细胞增殖和细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力.结果 采用Gli1和Gli2 siRNA抑制Gli1和Gli2 mRNA及蛋白表达后,可下调Cyclin D1和N-cadherin蛋白表达,增加E-cadherin和p27蛋白表达,同时抑制细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期并降低细胞的侵袭能力,与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05).结论 Gli在食管腺癌的生长转移中具有重要作用,敲掉Gli1和Gli2基因表达可抑制食管腺癌细胞周期分布和上皮-间质转化能力,这可能与Cyclin D1、p27、E-cadherin及N-cadherin蛋白变化相关.
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BEZ235联合AZD6244对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响
目的 探讨联合应用PI3K和mTOR双重靶向抑制剂BEZ235及上皮间质转换(EMT)抑制剂AZD6244对人宫颈癌细胞增殖、迁移能力的影响.方法 采用MTT法分析BEZ235、AZD6244对Hela和SiHa细胞增殖能力的影响,损伤愈合实验检测BEZ235、AZD6244对Hela和SiHa细胞迁移能力的影响,Western blot检测BEZ235、AZD6244对EMT相关标志物蛋白的表达变化.结果 BEZ235、AZD6244对宫颈癌细胞Hela和SiHa的增殖有协同抑制作用;联合应用BEZ235、AZD6244可以通过EMT途径抑制Hela和SiHa细胞的侵袭、迁移.结论 BEZ235、AZD6244联合应用可体外抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移,其部分机制是通过抑制EMT途径实现的.
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核糖核酸酶抑制因子与整合素连接激酶对膀胱癌上皮-间质转化与转移的影响
目的 研究核糖核酸酶抑制因子(RI)与整合素连接激酶(ILK)相互作用对膀胱癌上皮-间质转化(EMT)与转移的影响.方法 构建过表达RI或ILK的膀胱癌EJ细胞系,免疫荧光检测RI与ILK在EJ细胞中的表达及共定位,倒置相差显微镜下观察细胞形态,Western blot检测细胞中RI、ILK及EMT标志物的表达,复制膀胱癌裸鼠移植瘤模型,免疫组织化学分析瘤组织中RI、ILK及EMT标志物的表达,HE染色观察裸鼠肺转移.结果 EJ细胞中RI与ILK存在共定位的现象,RI与ILK存在相互作用.Western blot结果显示,EJ-RI组E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达高于EJ组(P ＜0.05),EJ-ILK组基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、扭转蛋白(Twist)、核转录因子(Snail)与重组人S100钙结合蛋白A4(S100A4)表达高于EJ组(P ＜0.05).过表达RI抑制膀胱癌体内外EMT及移植瘤自发性肺转移,而过表达ILK促进EMT发生及膀胱癌转移.结论 RI与ILK相互作用调节膀胱癌EMT与转移.
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下调基因表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的 探讨抑制α-catulin基因表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及可能的机制.方法培养人胃癌细胞SGC-7901,根据转染物不同将细胞分为siRNA-α-catulin组、siRNA-对照序列组和空白对照组,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中α-catulin、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达.结果siRNA-α-catulin组细胞24、48、72及96 h时吸光度A值均低于siRNA-对照序列组和空白对照组,差异有统计学意义(<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-α-catulin组迁移细胞数和侵袭细胞数均降低,差异有统计学意义(<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-α-catulin组细胞中α-catulin、N-cad-herin及Vimentin蛋白相对表达量均降低,而E-cadherin蛋白相对表达量增加,差异有统计学意义(<0.05).结论特异性沉默人胃癌细胞SGC-7901中基因表达可有效抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制上皮-间质转化过程有关.
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二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)是否上调维甲酸相关孤核受体α(ROR α)抑制人胃癌细胞株MGC803细胞上皮-间质转化(EMT).方法 相差显微镜观察MGC803细胞形态的改变.逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT的相关分子表达.裸鼠实验检测DADS与沉默RORα对移植瘤生长的影响.结果 相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803细胞大小与形状差异更明显.DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降.RT-PCR与Western blot显示,DADS处理后较处理前各组RORαmRNA与蛋白表达上调(P＜0.05).DADS作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显(P＜0.05).RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子(Snail)和波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达上调,而E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA与蛋白下调(P＜0.05).DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调(P＜0.05).免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱.DADS作用后,结果相反.裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加(P＜0.05),增殖细胞核抗原(Ki-67)、Snail、CD34及Vimentin阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低.DADS处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强.结论 DADS通过上调RORα可体内外抑制人胃癌MGC803细胞EMT.
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MicroRNA-192、ZEB1对膀胱癌上皮-间质转化的影响
目的 探讨microRNA-192(miR-192)和锌指结构转录因子1(ZEB1)在膀胱癌组织中的表达及其意义.方法 选取96例择期行手术治疗的膀胱癌患者作为膀胱癌组,同期留取外伤性膀胱破裂患者正常膀胱黏膜组织41例作为对照组,采用荧光定量聚合酶链反应检测不同组织中miR-192和ZEB1基因的表达,Western blot检测不同组织中ZEB1、E-cadherin及Vimentin蛋白的表达,分析其相关性.结果 膀胱癌组织中miR-192表达水平低于对照组(P<0.05),而ZEB1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05).膀胱癌组织中miR-192和ZEB1 mRNA表达水平与病理学分级、TNM分期、淋巴结转移与否有关(P<0.05).Western blot检测结果显示,膀胱癌组织中ZEB1和Vimentin蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平低于对照组(P<0.05).Pearson相关性分析显示,膀胱癌组织中miR-192与ZEB1、Vimentin蛋白表达水平呈负相关(r=-0.279和-0.318,均P=0.000),与E-cadherin蛋白表达水平呈正相关(r=0.376,P=0.000).结论 miR-192在膀胱癌组织中呈低表达,miR-192可能通过负性调控ZEB1促进上皮-间质转化过程,从而加速膀胱癌的浸润和转移.
关键词： 膀胱癌 MicroRNA-192 锌指结构转录因子1 上皮-间质转化 -
EZH2介导ROS1表达上调促进肺癌细胞上皮-间质转化
目的 研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)对肺癌细胞中沉默抑制子1(ROS1)表达及细胞上皮-间质转化的影响.方法 Western blot检测肺癌细胞中EZH2表达;过表达EZH2后,RT-PCR和Western blot检测肺癌细胞HCC461中EZH2表达水平;Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力变化;Western blot检测过表达EZH2对ROS1、E-cadherin、Snail、vimentin表达影响;Western blot检测53例肺癌组织和42例癌旁组织中EZH2与ROS1表达水平并分析其相关性.结果 肺癌细胞中EZH2均高表达;肺癌细胞HCC461过表达EZH2后ROS1表达上调,上皮标记物E-cadherin下调,间质标记物Snail、vimentin表达上调,细胞侵袭转移能力增加;肺癌组织中EZH2、ROS1均显著高表达,且两者表达呈显著正相关.结论 EZH2可介导肺癌细胞中ROS1表达上调来促进肺癌细胞上皮-间质转化.
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白藜芦醇对镉诱导大鼠前列腺损伤的保护作用
目的:探讨白藜芦醇对镉诱导大鼠前列腺损伤的保护作用.方法:通过连续15 d,每日皮下注射0.2mg/kg氯化镉的方式建立大鼠前列腺损伤模型,每日予白藜芦醇(20或40 mg/kg)灌胃给药.实验结束后检测大鼠前列腺超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,并检测上皮-间质转化(EMT)标记物上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(fibronectin) mRNA表达以及前列腺TGF-β1、TGF-βR 1、Smad3、p-Smad3、Nrf-2、HO-1、keap1和γ-GCLC蛋白表达.结果:白藜芦醇能显著降低镉诱导前列腺损伤大鼠前列腺MDA、NO含量,提高SOD、GSH-Px、CAT活性,升高GSH含量及E-cadherin水平,降低vimentin、α-SMA和fibronectin水平,减少TGF-β1、TGF-β3R I和p-Smad3蛋白表达并增加Nrf-2、HO-1、keap1和γ-GCLC表达.结论:白藜芦醇能抑制镉诱导大鼠前列腺氧化损伤和EMT,其作用机制与调控前列腺TGF-β1和Nrf-2通路有关.
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葛根素注射液对糖尿病KKAy小鼠肾小管上皮细胞的影响
目的:观察葛根素治疗糖尿病小鼠肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)过程中肾小管上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达的变化,为临床药物治疗糖尿病RIF提供实验依据.方法:将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组(n=8)和葛根素注射液治疗组(n=8).8只C57BL/6J小鼠作为正常组.用药组小鼠14周龄开始以腹腔注射的方式给药,观测小鼠日常状态及血糖变化,于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和转化生长因子β Ⅰ型受体(TGF-β-RI)蛋白的表达.结果:形态学观察可见模型组发生明显的纤维化改变,而经葛根素注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微.治疗组KKAy小鼠肾组织中较模型组小鼠肾组织中α-SMA、TGF-β1和TGF-β-RI蛋白的表达减少.结论:葛根素注射液可在一定程度上减少α-SMA的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中TGF-β1和TGF-β-RI蛋白表达,阻断并逆转EMT的过程,延缓肾间质纤维化的发生和发展.
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上皮性卵巢癌中 PARP-1的表达及其与 EMT 的关系
目的：探讨上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly （ADP-ribose） polymerase-1，PARP-1]的表达及其与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的关系。方法：免疫组化、实时荧光定量PCR法检测EOC和良性卵巢肿瘤组织中PARP-1、E-钙黏蛋白（ E-cadherin ）、波形蛋白（vimentin）和转录调控因子Snail的表达；Western blotting 法检测高效PARP-1抑制剂PJ34处理SKOV3细胞后PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail蛋白的表达。结果：PARP-1、vimentin和Snail在EOC中阳性表达率高于良性卵巢肿瘤组织，而E-cadherin则相反，差异均有统计学显著性（ P＜0.05）。 PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail与EOC的病理分级、临床分期和有无淋巴结转移有关（P＜0.05），与年龄和病理类型无关。 E-cadherin表达与PARP-1表达呈负相关（ P＜0.05）， vimentin、Snail 表达与PARP-1表达呈正相关（ P＜0.05）。 EOC中PARP-1、vimentin 和Snail mRNA的相对表达量高于良性卵巢肿瘤组织，E-cadherin mRNA的相对表达量低于良性卵巢肿瘤组织，差异均具有统计学显著性（P＜0.05）。 PJ34处理SKOV3细胞后，PARP-1、vimentin和Snail 的蛋白水平明显下降，E-cad-herin的蛋白水平显著提高，差异有统计学显著性（ P＜0.05）。结论：PARP-1通过调控E-cadherin、vimentin和Snail的表达促进EOC上皮间质转化。 PARP-1及其参与的上皮-间质转化在EOC进展中发挥重要作用。
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微小RNA-101通过USP22抑制人肝癌MHCC97H细胞的上皮-间质转化功能
目的 研究微小核糖核酸(miR)-101对人肝细胞癌(肝癌)MHCC97H细胞的上皮-间质转化功能的影响及其相关机制.方法 MHCC97H肝癌细胞株分别转染miR-101 mimics和negative control mimic,分别作为M101组、NCM组,并设立未转染对照(control)组,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞miR-101含量.Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力.Western-blot法检测3组细胞vimentin、α-catenin、E-cadherin和USP22表达水平.双荧光素酶实验检测miR-101与USP22的关系.结果 M101组miR-101的表达水平明显上调,表达水平约为control组的761倍(P<0.05).M101组迁移细胞数量明显低于control组的[(15.7±1.6)个比(94.1±1.8)个,P<0.05].M101组侵袭细胞数量明显低于control组的[(9.1±0.4)个比(51.6±0.9)个,P<0.05].M101组细胞vimentin蛋白表达量明显降低,α-catenin及E-cadherin蛋白表达量明显升高,USP22蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-101的下游靶基因.结论 miR-101可能通过降低下游靶基因USP22水平影响EMT相关蛋白表达,抑制MHCC97H肝癌细胞的上皮-间质转化功能.
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转化生长因子β1对间皮细胞上皮-间质表型转化的调控及对胃癌腹膜转移的影响
目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）对腹膜间皮细胞上皮-间质表型转化的调控及对胃癌细胞腹膜转移的影响。方法 TGF-β1作用人腹膜间皮细胞系HMrSV5，倒置显微镜下观察间皮细胞形态学变化。采用Western-blot检测上皮细胞表型蛋白（细胞角蛋白和E-钙黏素）、间皮细胞表型蛋白（α-SMA和弹性蛋白）及Smad2蛋白水平的表达情况。采用黏附试验观察表型转化间皮细胞对胃癌细胞系HSC-39黏附的影响。间皮细胞（8×104／孔）与胃癌细胞系HSC-39（4×104／孔）共培养，采用体外Transwell侵袭实验观察腹膜微环境变化对胃癌细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1作用腹膜间皮细胞24 h后部分细胞转变为狭长型，72 h后间皮细胞转变为典型纤维细胞样外观。TGF-β1作用间皮细胞可诱导弹性蛋白和α-SMA表达上调，细胞角蛋白和 E-钙黏素表达下降，并且呈现时间依赖性变化（P＜0．05）。 TGF-β1作用15 min后，间皮细胞内磷酸化Smad2表达开始升高，30 min达到顶峰，较对照组增加432％（P＜0．01）；但总Smad2表达则无明显变化（P＞0．05）。 TGF-β1作用72 h后，间皮细胞与HSC-39胃癌细胞的黏附率较对照组增加（146±17）％（P＜0．05）。胃癌细胞与TGF-β1刺激的间皮细胞共培养48 h后，平均每视野转移癌细胞数目为61．1±11．4，较对照组（31．9±8．1）明显增多（P＜0．05）。结论 TGF-β1能够诱导间皮细胞向成纤维细胞样转化，Smad2信号转导通路在间皮细胞表型转化中发挥重要作用；而这种腹膜微环境变化可增强胃癌细胞的黏附和侵袭能力，为癌细胞转移播散提供适宜的“土壤”环境。
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乳腺癌上皮-间质转化后引发BCRP介导的多药耐药的研究
背景与目的:研究发现肿瘤的侵袭浸润和转移增强是上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)所致,而EMT的发生也与肿瘤细胞多药耐药现象的发生密切相关.本研究通过分析乳腺癌组织和细胞中EMT与乳腺癌耐药蛋白表达的相关性,探讨EMT对乳腺癌中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein, BCRP)介导多药耐药的影响.方法:免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达:构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,转染至MCF-7细胞,采用免疫荧光、Western blot、Real-time PCR检测转录抑制因子snail、上皮标志物E-钙粘素、间质标志物vimentin以及多药耐药蛋白BCRP的表达;MTT法检测细胞对米托蒽醌的耐药指数.结果:免疫组化结果显示乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达呈显著相关:免疫荧光、Western blot、Real-time PCR显示与亲本MCF-7细胞相比,转染Snail后的MCF-7细胞中E-cadherin表达水平明显降低,而snail、vimentin和BCRP的表达水平明显增加;MTT结果显示细胞对米托蒽醌的耐药指数增加至9.93.结论:转染snail真核表达载体pCDNA3.1-snail可使乳腺癌MCF-7细胞发生EMT, 并导致细胞中BCRP表达增加,引发BCRP介导的多药耐药.
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Ezrin对人舌鳞癌顺铂耐药细胞上皮-间质转化的影响
目的：探讨Ezrin蛋白下调是否能影响人舌鳞癌顺铂耐药细胞CAL27/CDDP发生上皮—间质转化（epithelial?to?mesenchymal transition ，EMT）。方法以人舌鳞癌细胞株CAL27（亲本细胞）及其顺铂耐药细胞株CAL27/CDDP（耐药细胞）为研究对象，MTT检测CAL27及CAL27/CDDP的半数抑制率（half maximal inhibitory concentration ，IC50），光学显微镜下观察细胞形态学变化；蛋白印迹检测上皮间质相关标记蛋白Vimentin、E?cadherin的表达变化和Ezrin的表达水平，Transwell检测细胞的迁移能力。通过小干扰RNA（Ezrin?Si1、Ezrin?Si2）转染CAL27/CDDP，检测Ezrin、Vimentin与E?cadherin蛋白表达及细胞迁移能力的变化。结果人舌鳞癌顺铂耐药细胞CAL27/CDDP较亲本细胞CAL27 IC50提高6.8倍，差异具有统计学意义（t=5.283，P=0.0007）；CAL27细胞呈多边形上皮样结构、成簇生长、细胞之间连接紧密，CAL27/CDDP表现为单个分散的长梭形细胞，细胞间连接消失，呈现间质细胞表型；同时，相较于亲本细胞CAL27，CAL27/CDDP间质标志蛋白Vimentin表达升高（t=4.450，P=0.011），上皮标志蛋白E?cadherin表达降低（t=10.980，P<0.001），Ezrin蛋白表达上调（t=6.487，P=0.003），细胞的迁移能力增强（t=3.403，P=0.010）。小干扰RNA转染人舌鳞癌顺铂耐药细胞CAL27/CDDP后Ezrin蛋白表达明显降低，Vimentin表达降低，E?cadherin表达升高，细胞的迁移能力显著下降。结论下调Ezrin能抑制人舌鳞癌顺铂耐药细胞发生上皮—间质转化及转移。
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基于TGF-β/Smads信号通路探讨胃痞消逆转GPL大鼠胃黏膜EMT效应机制
目的 观察健脾化瘀解毒中药复方胃痞消对胃癌前病变(GPL)大鼠TGF-β/Smads信号通路的调控效应,探讨胃痞消逆转GPL大鼠胃黏膜上皮-间质转化(EMT)的效应机制.方法 采用N-甲基-N,-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为造模剂结合饥饱失常多因素造模方法复制GPL大鼠模型,连续26周,于16周时开始连续灌胃给药10周,分组如下:正常组,模型组,胃复春组(0.2 g·kg-1),胃痞消高、低剂量(15,7.5 g·kg-1)组.观察大鼠胃黏膜组织病理学(HE染色)变化及超微结构;Western Blot法检测尾型同源基因家族2(CDX2)、转化生长因子二型受体(TGF-βRII)、Rho相关激酶(RhoA)、p-Smad2、p-Smad3、神经钙黏蛋白(N-cad)、β-连环蛋白(β-catenin)表达.结果 与正常组比较,模型组GPL大鼠胃黏膜CDX2、RhoA、p-Smad2、p-Smad3和N-cad蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,胃痞消高、低剂量组大鼠胃黏膜TGF-βRII、p-Smad2、p-Smad3和RhoA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),胃痞消低剂量组大鼠胃黏膜CDX2表达显著降低(P<0.05),胃痞消高剂量组大鼠胃黏膜N-cad表达显著降低(P<0.01),β-catenin的表达显著升高(P<0.01).结论胃痞消可拮抗TGF-β/Smads信号通路,进而活化诱导TGF-βRII、p-Smad2、p-Smad3和RhoA表达下调,调控GPL大鼠胃黏膜EMT,延缓GPL向肿瘤的进展.
关键词： 胃癌前病变 胃痞消 TGF-β/Smads信号通路 上皮-间质转化 -
天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究
目的：探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的A549细胞上皮-间质转化（EMT）及其作用机制。方法1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT，观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变， Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、 Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1 siRNA并用TGF-β1刺激细胞，检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果1.与空白对照组比较， TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化， E-cadherin的mRNA和蛋白表达下调， Fibronectin表达上调；与TGF-β1组相比，天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态， E-cadherin 的 mRNA 和蛋白表达上调， Fibronectin表达下调。2. TGF-β1刺激后， Jagged1、 Hey1的表达量随着时间上调，而Notch1表达量无明显变化；天龙咳喘灵提取物可使Notch1、 Jagged1、 Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 siRNA成功敲除Jagged1基因后， TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。
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沉默CIT基因可抑制前列腺癌细胞的增殖和转移
目的 探究Citron Rho-interacting serine/threonine kinase(CIT)基因在前列腺癌中的表达特点,并探讨CIT基因对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控作用及其可能的分子机制.方法 利用TCGA和MSKCC数据库分析CIT在前列腺癌组织的表达水平和临床相关性.采用siRNA干扰CIT的表达,采用CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测CIT对前列腺癌PC-3细胞系的增殖、迁移和侵袭特性的影响.采用Western blotting检测CIT对上皮-间质转化和Hippo-YAP通路的调控作用.结果 TCGA数据库分析表明,CIT在前列腺癌组织中表达显著上调(P<0.05);MSKCC数据库分析表明,CIT表达水平与N分期(P<0.05)、M分期(P<0.001)、Gleason评分(P=0.010)和PSA水平(P=0.004)成正相关关系.PC-3细胞中沉默CIT表达可显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,逆转上皮-间质转化进程,并抑制Hippo-YAP通路的激活.结论 CIT基因可能是前列腺癌的致病基因,其分子机制可能与Hippo-YAP通路的激活有关.
关键词： 丝/苏氨酸激酶 前列腺癌 转移 上皮-间质转化 Hippo-YAP通路 -
色素上皮衍生因子通过调控上皮间质转化抑制乳腺癌细胞侵袭和转移
目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)是否通过作用上皮间质转化(EMT)抑制乳腺癌浸润转移.方法 免疫组化方法检测119例浸润性导管癌组织中PEDF、vimentin、E-cadherin表达情况;构建PEDF-siRNA-vector干扰载体,应用RNA干扰技术阻断乳腺癌SK-BR-3细胞中PEDF表达,并构建重组腺病毒载体构建(Lentivirus-PEDF-vector),转染SK-BR-3细胞.采用细胞划痕实验、细胞侵袭实验、Western bolt方法检测SK-BR-3细胞中PEDF表达变化,并釆用Western bolt方法检测乳腺癌细胞上皮性标志物E-cadherin和间质性标志物vimentin的表达改变,并观察乳腺癌细胞的体外增殖、侵袭、粘附特性的改变.统计分析采用卡方检验、Fisher精确概率法检验Spearman等级相关检验、配对计数资料检验.结果 乳腺浸润性导管癌中PEDF阳性表达率明显低于正常乳腺组织,PEDF阳性表达与肿瘤大小相关,与E-cadherin表达正相关(r=0.473,P<0.001),与vimentin表达呈负相关(r=-0.412,P<0.001).乳腺癌SK-BR-3细胞在PEDF条件培养基培养后:细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验表明:细胞侵袭转移力减弱;PEDF-siRNA增加SK-BR-3细胞的迁移与侵袭,而Lentivirus-PEDF-vector抑制SK-BR-3细胞的侵袭与迁移能力.Western blot结果显示:细胞中E-cadherin表达明显减少(P<0.05),vimentin表达明显增多(P<0.05).结论 PEDF基因与乳腺癌的浸润转移过程密切相关,PEDF可作用SK-BR-3细胞发生EMT进而抑制乳腺癌的浸润转移.
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miR-92b对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响
目的：探讨miR-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染miR-92b inhibitor和miR-92b mimics后，经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞转移的影响；Western blot检测E-Cadherin、Vimentin、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果 SGC-7901细胞转染miR-92b inhibitors后，迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少（P<0.05）；Western blot结果显示E-Cadherin表达升高，Vimentin表达降低，Akt和p-Akt的表达升高。转染miR-92b mimics后，迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多（P<0.05）；E-Cadherin表达降低，Vimentin表达升高，Akt和p-Akt表达降低。结论 miR-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化，促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭，可能通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。
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外泌体对上皮-间质转化调控作用的研究进展
外泌体是一种具有生物活性的膜性囊泡,既可在细胞间传递活性物质,还可通过调控细胞间的信息传递参与细胞活动.上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞获得间充质细胞特性的过程,在众多疾病中发挥了重要作用.研究表明,外泌体在EMT的发生发展过程中具有双向作用.一方面,外泌体可促进细胞发生EMT,赋予肿瘤细胞侵袭和转移能力,促进血管新生和加快肿瘤生长;另一方面,外泌体亦可抑制EMT,发挥减弱肿瘤细胞侵袭能力,抑制心、肝、肾纤维化,改善心肌梗死等作用.外泌体可能是通过携带EMT相关蛋白或miRNA,调控EMT相关信号通路发挥双向调节作用.
