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HPV18-E7介导的上皮间质转化与抑癌基因Rb的关系研究
目的 探究宫颈腺癌细胞中HPV18-E7介导的上皮间质化(EMT)与抑癌基因Rb之间的关系.方法 针对HPV18-E7的siRNA转染入人宫颈腺癌HeLa细胞运用Realtime PCR技术、免疫印迹实验在mRNA水平和蛋白水平检测E7与Rb的表达变化;Real-time PCR技术筛选特异性针对Rb基因的siRNA,并将其转染入HeLa-siE7细胞运用免疫印记实验检测EMT相关的标记因子的表达变化,CCK-8细胞增殖实验和免疫荧光染色法检测细胞增殖能力及细胞骨架的变化;后用染色质免疫沉淀和real-time PCR技术检测Rb是否通过作用于E-cadherin基因的启动子区来发挥调控其表达的作用.结果 HeLa-siE7细胞内Rb表达较对照组细胞显著上调;HeLa-siE7-siRb细胞较HeLa-siE7细胞E-cadherin的表达明显下调,vimentin的表达却显著上调;HeLa-siE7-siRb细胞增殖能力显著增强;沉默E7表达后细胞失去极性,呈卵圆形,而在沉默E7表达的基础上沉默Rb后,细胞又重新获取细胞极性变回梭形;染色质免疫沉淀实验结果表明抑癌基因Rb可直接作用于上皮性标记因子E-cadherin的启动子区.结论 HPV18-E7能够结合抑癌基因Rb使其失去活性从而致使其无法绑定在上皮标记因子E-cadherin启动子区来调控其表达,终导致宫颈腺癌发生EMT,促进肿瘤发生侵袭转移.
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缺氧诱导因子-1α在食管鳞癌上皮-间质转化中的作用及机制
目的 检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白、上皮间质转化(EMT)相关因子E-钙黏素蛋白和波形蛋白在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达,分析3者在食管鳞癌组织中表达的相关性,探讨其与食管鳞癌患者临床病理因素及预后的关系.方法 采用回顾性病例对照研究方法.收集2006年1月至2009年12月天津医科大学肿瘤医院收治的116例食管鳞癌患者的临床病理资料.采用免疫组织化学染色检测食管鳞癌组织和癌旁组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白和波形蛋白的表达.观察指标:(1)HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达情况.(2) HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白在食管鳞癌组织中表达的相关性.(3)食管鳞癌患者临床病理因素(性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤直径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期)与HIF-1α.蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白阳性表达的关系.(4)食管鳞癌患者癌组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白表达与患者预后的关系.采用门诊和电话方式进行随访,了解患者生存情况.随访时间截至2014年12月.计数资料比较采用x2检验.相关性分析采用Spearman秩相关分析.采用Kaplan-Meier法计算患者生存率,Log-rank检验进行生存分析.结果 (1) HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达情况:食管鳞癌组织和癌旁组织中HIF-1α蛋白阳性表达率分别为50.86％(59/116)和22.22％(8/36),两者比较,差异有统计学意义(x2=9.142,P＜0.05);E-钙黏素蛋白阳性表达率分别为25.00％ (29/116)和52.78％ (19/36),两者比较,差异有统计学意义(x2=9.811,P＜0,05);波形蛋白阳性表达率分别为32.76％(38/116)和11.11％ (4/36),两者比较,差异有统计学意义(x2=5.401,P＜0.05).(2) HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白在食管鳞癌组织中表达的相关性:食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白和E-钙黏素蛋白均为阳性表达患者7例,均为阴性表达患者35例,HIF-1α蛋白阳性且E-钙黏素蛋白阴性表达患者52例,HIF-1α蛋白阴性且E-钙黏素蛋白阳性表达患者22例.食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白和波形蛋白均为阳性表达患者28例,均为阴性表达患者47例,HIF-1α蛋白阳性且波形蛋白阴性表达患者31例,HIF-1α蛋白阴性且波形蛋白阳性表达患者10例.Spearman秩相关分析结果显示:食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白与E-钙黏素蛋白表达呈负相关(r=-0.624,P＜0.05),与波形蛋白表达呈正相关(r=0.319,P＜0.05).(3)食管鳞癌患者临床病理因素与HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白阳性表达的关系:肿瘤浸润深度为T1 ～2期HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白阳性表达患者例数分别为11、14、6例,T3～4期上述患者例数分别为48、15、32例,不同肿瘤浸润深度食管鳞癌患者癌组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白的阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(x2=7.574,6.014,5.549,P＜0.05).无淋巴结转移HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白阳性表达患者例数分别为24、23、12例,有淋巴结转移上述患者例数分别35、6、26例,不同淋巴结转移情况食管鳞癌患者癌组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白的阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(x2=8.992,9.739,11.768,P＜0.05).TNM分期为Ⅰ期HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白阳性表达患者例数分别为0、3、0例,Ⅱ期上述患者例数分别27、19、15例,Ⅲ期上述患者例数分别32、7、23例,不同TNM分期食管鳞癌患者癌组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白的阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(x2=17.215,10.448,13.018,P＜0.05).(4)食管鳞癌患者癌组织中HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白表达与患者预后的关系:116例患者均获得术后随访,随访时间为18.0～96.0个月,中位随访时间为62.3个月.HIF-1α蛋白阳性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为18.0个月,5年累积生存率为27.5％:HIF-1α蛋白阴性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为40.0个月,5年累积生存率为43.6％;两者生存情况比较,差异有统计学意义(x2=5.657,P＜0.05).E-钙黏素蛋白阳性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为24.0个月,5年累积生存率为28.4％;E-钙黏素蛋白阴性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为33.0个月,5年累积生存率为38.9％;两者生存情况比较,差异无统计学意义(x2=2.469,P＞0.05).波形蛋白阳性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为31.0个月,5年累积生存率为36.9％;波形蛋白阴性表达的食管鳞癌患者中位生存时间为22.0个月,5年累积生存率为29.7％;两者生存情况比较,差异无统计学意义(x2=1.167,P＞0.05).结论 HIF-1α蛋白和波形蛋白在食管鳞癌组织中表达升高,E-钙黏素蛋白表达降低;HIF-1α蛋白与E-钙黏素蛋白表达呈负相关,与波形蛋白表达呈正相关,可能促进食管癌EMT;HIF-1α蛋白、E-钙黏素蛋白、波形蛋白表达均与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移、TNM分期密切相关.HIF-1α蛋白阳性表达食管鳞癌患者预后差.
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阿司匹林预防小鼠结肠癌肝转移的作用及其机制
目的 探讨阿司匹林对结肠癌肝转移模型小鼠结肠癌肝转移的预防作用及其可能作用机制.方法 将20只BALB/c小鼠采用随机数字表法分成对照组和实验组,每组10只.对照组给予生理盐水灌胃0.2 mL/d,实验组给予阿司匹林灌胃30 μg/(g·d).两组小鼠灌胃60 d后使用结肠癌C26细胞采用脾脏种植且切除脾脏的方法建立小鼠结肠癌肝转移模型.模型建立成功后,实验组和对照组小鼠分别予以阿司匹林和生理盐水灌胃直到处死小鼠.建模后观察小鼠肝转移及生存情况.将结肠癌细胞系C26分为两组,对照组不作处理,实验组用10 mmoL/L阿司匹林处理24 h,分别对两组细胞进行划痕实验和Transwell实验,观察阿司匹林对C26细胞侵袭转移的影响;另外通过RT-PCR和Western blot检测两组细胞上皮间质转化(EMT)相关基因的表达.组间比较采用Student-t检验方法.Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验.结果 对照组和实验组小鼠肝内转移瘤数目分别为(4.8±1.9)个和(2.6±1.6)个,肝脏荷瘤质量分别为(504±107) mg和(362±67) mg,两组比较,差异均有统计学意义(t=2.840,3.584,P＜0.05).实验组小鼠的1个月生存率为80％,与对照组的40％比较明显提高,差异有统计学意义(x2=4.418,P＜0.05).病理检查结果显示:实验组小鼠肝脏肿瘤细胞的数量和残存肿瘤细胞的异型性与对照组比较均减少.划痕实验结果显示:划痕24 h后,对照组C26细胞发生了明显的迁移,而与对照组比较,实验组未见细胞发生移动.Transwell法检测结果显示:对照组和实验组C26细胞穿膜细胞数分别为(253 ±21)个和(148±13)个,两组比较,差异有统计学意义(t=5.101,P＜0.05).RT-PCR法检测结果显示:对照组和实验组C26细胞中EMT相关基因E-cadherin mRNA相对表达量分别为0.002±0.001和0.005±0.001;波形蛋白分别为1.005±0.286和0.270±0.168,两组比较,差异均有统计学意义(t=-4.606,4.942,P＜0.05).Western blot法检测结果显示:对照组和实验组小鼠肝脏组织C26细胞中EMT相关基因E-cadherin蛋白相对表达量分别为0.473±0.179和1.585 ±0.410;波形蛋白分别为0.787±0.118和0.280 ±0.133,两组比较,差异均有统计学意义(t=-5.542,6.355,P＜0.05).结论 阿司匹林干预结肠癌肝转移模型小鼠,可抑制结肠癌细胞在肝内的种植转移,提高小鼠生存率.其可能作用机制是阿司匹林上调E-cadherin的表达水平,下调波形蛋白的表达水平,抑制了结肠癌细胞EMT的发生,从而减弱了肿瘤细胞的侵袭和转移.
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FoxM1调控Snai1促进肝癌上皮-间充质转换的作用
目的 探讨肝细胞癌FoxM1的表达及其在上皮-间充质转换(EMT)中的作用及分子机制.方法 采用Western blot和qRT-PCR方法,检测FoxM1、Snai1和E-cadherin在不同转移潜能的肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达水平.通过转染pcDNA3.1-FoxM1和siRNA-FoxM1调控FoxM1的表达,探讨FoxM1、Snai1在肝细胞癌EMT中的作用.采用划痕实验和Transwell实验检测FoxM1对肝癌细胞侵袭和迁移能力的作用.结果 FoxM1在肝癌细胞中高表达(F=29.617、18.037,P＜0.05),肝癌细胞中高表达的FoxM1与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.893,P＜0.05),与Snai1表达呈正相关(r=0.993,P＜0.05).划痕实验显示,下调FoxM1表达可以降低肝癌细胞的迁移能力(t=4.594,P＜0.05),而上调FoxM1表达可以增加肝癌细胞的迁移能力(t=-4.459,P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,下调FoxM1表达可以降低肝癌细胞的侵袭能力(t=-4.385,P＜0.05),而上调FoxM1表达可以增加肝癌细胞的侵袭能力(t=-4.950,P＜0.05).结论 FoxM1在肝癌细胞中高表达,通过调控EMT促进肝癌细胞的迁移和侵袭,FoxM1可能成为肝癌治疗的新靶点.
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TGF-β/SMAD信号通路与EMT及肺纤维化关系的研究进展
在肺纤维化发病过程中,多条SMAD依赖及非SMAD依赖信号通路参与上皮-间充质细胞转分化(EMT)及纤维化的形成和发展,其中转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路在EMT的形成及信号通路间的联系中发挥着关键性的作用.在该通路中,TGF-β与受体结合后,激活下游的SMAD蛋白,活化的SMAD2与SMAD3形成同源或异源二聚体后与SMAD4共同进入细胞核,与纤维化相关转录因子相互作用,共同调节靶基因的沉默或激活,从而促进EMT及肺纤维化的形成.本文对该通道与EMT及肺纤维化的关系作一综述.
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Notch信号通路与肺纤维化关系的研究进展
Notch信号通路是一个高度保守的信号转导通路.该通路通过Notch配体与相邻受体结合,释放Notch胞内段(NICD),NICD进入细胞核内,进而调节基因的转录、翻译,从而在调控细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期中发挥着重要作用.近年来,越来越多的研究发现,Notch信号通路与肺纤维化的发生、发展密切相关,而应用Notch信号通路的特异性抑制剂能够显著抑制肺纤维化的发生和发展,进而改善肺纤维化病人的预后.本文主要就Notch信号通路与肺纤维化之间的关系作一综述.
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抗肝癌治疗诱导的肝癌细胞上皮-间质转化研究进展
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一种涉及到胚胎发育、创伤愈合及肿瘤发生、发展等多种生理和病理过程的复杂现象.近的研究发现EMT和肿瘤的侵袭、转移及治疗抵抗等方面均具有十分密切的联系.本文综述临床常用抗肝癌治疗手段本身诱导的肝癌细胞EMT现象和机制,为临床抗肝癌综合治疗提供依据.
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华蟾素注射液对 人食管癌细胞增殖、侵袭和化疗敏感性 的影响及其机制
目的:研究华蟾素注射液对食管癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的调控作用,并初步探讨其作用机制.方法:应用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测华蟾素注射液对人食管癌ECA109细胞增殖及化疗敏感性的影响;流式细胞术检测华蟾素注射液联合化疗药物(顺铂或表柔比星)对ECA109细胞凋亡水平的影响;Transwell小室实验检测华蟾素注射液对ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot技术检测华蟾素注射液对ECA109细胞中与侵袭、上皮-间质转化(EMT)及细胞耐药相关蛋白(Snail、Twist、MMP2、Vimentin、P-gp及E-cadherin)表达水平的影响.结果:与空白对照组比较,华蟾素注射液可显著抑制食管癌ECA109细胞的增殖能力,且呈时间和剂量效应关系(时间效应,r=0.985,P=0.000;剂量效应,r=0.988,P=0.000),并可明显促进该细胞的化疗敏感性(P=0.000);华蟾素注射液可明显抑制ECA109细胞侵袭和迁移能力(P均=0.000);华蟾素注射液可明显抑制Snail、Twist、MMP2、Vimentin及P-gp蛋白的表达水平,同时促进细胞表达E-cadherin蛋白.结论:华蟾素注射液能有效抑制人食管癌ECA109细胞的增殖及侵袭活性,并可有效增强该细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与该药抑制肿瘤细胞EMT过程有关.
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WWOX基因转染对人卵巢癌干细胞上皮-间质转化影响机制的研究
目的：探讨WWOX基因对人卵巢癌干细胞上皮-间质转化（EMT）影响的机制。方法首先采用Western-blot方法检测WWOX基因转染人卵巢癌干细胞及未转染人卵巢癌干细胞HO8910细胞的EMT标志物（E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin及Fibronectin）的表达情况的变化。其次将pcDNA3.1-WWOX真核表达载体转染至卵巢癌干细胞（重组质粒组），并以转染空载质粒（空质粒组）及未经转染的卵巢癌干细胞（空白对照组）作为对照，采用Traswell 侵袭小室实验，Western-blot方法分别检测卵巢癌干细胞的增殖能力变化；侵袭能力变化；EMT标志物E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin及Fibronectin的变化以及EMT调控因子Elf5及Snail的表达情况的变化。结果①卵巢癌干细胞组 E-cadherin、β-catenin的表达水平较普通HO8910细胞组明显降低，而N-cadherin、Vimentin、Fibronectin等表达水平较普通细胞组明显增强。②重组质粒组各时间点的细胞增值能力较空质粒组及空白对照组明显下降，差异均有统计学意义（P＜0.05）。③重组质粒组的穿膜细胞数为（105.5±3.1）个，分别与空质粒组[（199.7±3.4）个]及空白对照组[（191.4±4.1）个]比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。④重组质粒组的E-cadherin、β-catenin及Elf5的表达水平较其他两组明显升高，而N-cadherin、Vimentin、Fibronectin及Snail的表达水平较其他两组明显下降。结论①卵巢癌干细胞中存在EMT现象。②WWOX基因能抑制卵巢癌干细胞的增殖，并降低其侵袭能力。③WWOX基因可能通过调控转录因子Elf5及Snail的表达进而逆转卵巢癌干细胞的EMT现象。
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细胞核因子Snail在胰腺癌组织中的表达及与EMT过程的相关性研究
目的:探讨细胞核因子Snail在胰腺癌组织中的表达及与EMT(上皮-间质转化)过程的相关性.方法:选择2013年6月至2016年6月我院收治的胰腺癌患者75例为观察组,另选同期于我院进行胰腺癌筛查的健康者30例为对照组.两组均予以免疫组织化学法检测胰腺组织内Snail、vimentin(波形蛋白)、E-cadherin(钙粘附蛋白E)表达.结果:观察组胰腺组织内Snail、波形蛋白表达率均明显高于对照组,钙粘附蛋白E表达率明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);波形蛋白、钙粘附蛋白E与淋巴结转移、肿瘤分期或分化存在一定的关系,但Snail与上述情况均无关联.结论:Snail可作为评估胰腺癌组织EMT过程及肿瘤浸润转移的关键指标.
关键词： 细胞核因子Snail 胰腺癌 上皮-间质转化 -
EMT在呼吸系统疾病中的研究进展
随着现代生物学和细胞形态学的快速发展,关于气道上皮损伤过程逐渐形成了上皮-间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)这一学说.近年来研究发现,上皮细胞修复的延迟,成纤维细胞/成肌纤维细胞产生过多,胶原沉积发生在许多呼吸系统疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)及肺纤维化中.EMT在肿瘤转移、高氧肺损伤、支气管哮喘、肺纤维化等疾病中的作用越来越受到关注.本文主要综述上皮-间质转化(EMT)在高氧肺损伤、支气管哮喘、肺纤维化等呼吸系统疾病中的研究进展.
