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裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制
目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from CaUicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制.方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日培给药1次,连续8周.给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10).建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1 BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n =4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-ECN以及10 nmol· L-1 BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n =3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Westernblot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg· L-1 ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况.结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P＜0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P＜0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P＜0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P＜0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达.结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用.抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一.
关键词： 裸花紫珠乙酸乙酯提取物 转移 乳腺癌 锌指转录因子 上皮性钙黏附蛋白 -
Ikaros和FUT4在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及其相关性研究
目的:通过分析临床样本Ikaros功能状态与岩藻糖基转移酶Ⅳ(fucosyltransferase Ⅳ,FUT4)表达水平的相关性,探讨Ikaros调控FUT4表达的可能分子机制,为儿童ALL的个性化治疗靶点提供理论依据.方法:采用巢式PCR及克隆测序法鉴定儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL) Ikaros的表达亚型,计算功能型比率;通过荧光定量PCR检测FUT4 mRNA的相对表达水平,以血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿的骨髓样本为对照组,利用△△Ct法分析初诊未治的ALL患儿FUT4相对表达水平;分析Ikaros的功能状态与FUT4表达的相关性.结果:110例ALL中,功能亚型Ikaros以Ikaros1(Ik1)和Ikaros2(Ik2)为主,无功能亚型以Ikaros6 (Ik6)为主,其Ik6的表达率为20.91％,其中3例患儿单纯表达Ik6(2.73％);功能型与Ik6杂合表达比例为18.18％,且在复发患儿中Ik6表达比例升高.初诊ALL的FUT4的表达水平高于对照组,随着治疗缓解其表达降低,复发患儿的FUT4表达升高.通过2者的相关性分析,Ikaros的功能型比例与FUT4呈负相关(r=-0.6329),而Ik6的表达量与其成正相关(r=0.6605).结论:显性负向型Ik6是预后的独立危险因素,与儿童ALL复发密切相关,Ikaros调控FUT4的表达且呈负相关可能是儿童急性淋巴细胞白血病预后的机制之一.
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转移相关基因3、锌指转录因子Snail1、E-钙黏素在胆道闭锁患儿肝脏中的表达及相互关系
目的 探讨胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中转移相关基因3(MTA3)、锌指转录因子Snail1、E-钙黏素(E-cadherin)三者的表达、相关性及其在胆道闭锁发生、发展中的作用.方法 选取2012年2月至2013年9月河北医科大学第二医院小儿外科收治的21例胆道闭锁、17例胆总管囊肿及10例肝破裂患儿的肝组织活检标本,相应分为胆道闭锁(BA)组、胆总管囊肿(CCC)组及正常肝(NL)组.分别应用免疫组织化学法、逆转录-多聚酶链反应从蛋白和基因mRNA水平检测对比三组肝组织中MTA3、Snail1、E-cadherin表达情况.结果 在蛋白水平及mRNA水平BA组肝组织中Snail1呈高表达,MTA3、E-cadherin均呈低表达,MTA3和Snail1的表达呈负相关(r=-0.671,P＜0.05;r=-0.862,P＜0.05),Snail1和E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.571,P＜0.05;r=-0.715,P＜0.05),MTA3和E-cadherin的表达呈正相关(r=0.671,P＜0.05;r=0.752,P ＜0.05).结论 肝组织中MTA3减少,可能会降低对Snail1的抑制,进一步抑制E-cadherin的表达,促使胆管上皮EMT发生,导致BA的发生与发展.
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WT 1在儿童白血病中应用的研究进展
1 WT 1基因的作用WT 1基因(Wilms'tumor gene)位于11p13,编码是一种半胱氨酸-组氨酸锌指转录因子,分子量约为52-54 kD,在具有肾母细胞瘤遗传倾向和散在发病的儿童中被灭活.特异的杂合子显性失活突变时WT 1存在活性,此时与严重的肾脏和性分化异常有关[1].WT 1种系突变或缺失导致一系列泌尿生殖系的异常发育,两性畸形和儿童肾母细胞瘤的易感性增加[1].初认为它编码一种转录抑制因子,如今发现WT 1相关的功能更偏向于一种参与肾脏发育和性决定的基因的转录激活因子.
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Axl及Slug在胆管癌中的表达及临床意义
目的 研究Axl与锌指转录因子Slug在胆管癌中的表达及与临床参数的关系.方法 收集2010年9月至2015年7月定州市人民医院手术切除的病理证实为胆管癌石蜡标本70例,并收集其中病理证实为非癌组织的癌旁胆管蜡块标本20例,采用免疫组织化学(S-P)法进行检测,分析其临床意义.结果 不同年龄、肿瘤大小、肿瘤分级的Axl与Slug蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05),有淋巴结转移、动静脉受侵的Axl与Slug蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移和动静脉受侵组(P<0.05).在胆管癌中Axl与Slug的表达呈正相关(r=0.658,P<0.001).结论 Axl与Slug表达可能与胆管癌的发生、发展有关,在胆管癌细胞增殖、侵袭及转移中起重要作用.
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信号通路分子、乳头状甲状腺癌基因、锌指转录因子在不同宫颈疾病中的表达
目的:研究信号通路分子(SHH)、乳头状甲状腺癌基因(PTC1)、锌指转录因子(GLI1)在宫颈上皮内瘤变CIN1、CIN2、CIN3中的表达,探讨SHH、PTC1、GLI1在宫颈癌发生发展中的作用.方法:应用免疫组织化学方法将150例患有宫颈疾病的患者分为正常宫颈上皮组、CIN1组、CIN2组、CIN3组及宫颈癌组,每组各30例.对以上5组进行PTC1、GLI1、SHH检测.结果:SHH主要表达于腺体细胞的胞浆内,在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组13.3%、CIN1组40.0%、CIN2组63.3%、CIN3组83.3%及宫颈癌组93.3%,且强阳性率随阳性率增高而明显增高.PTC1、GLI1在胞质及胞膜上阳性染色多呈弥漫状分布.PTC1在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组23.3%、CIN1组40.0%、CIN2组43.3%、CIN3组63.3%及宫颈癌组73.3%.GLI1在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组10.0%、CIN1组16.7%、CIN2组26.7%、CIN3组50.0%及宫颈癌组56.7%.结论:SHH、PTC1、GLI1介导着多种死亡受体诱导的细胞凋亡信号传导通路,与宫颈癌的癌前病变过程密切相关.
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Krüppel样锌指转录因子在内皮细胞中的生物学作用
Krüppel样锌指转录因子(Krüppel-like transcription fac-tom,KLFs)是spl/Krüppel样转录因子(Spl-like and Krüappel-like transcription factors,Spl/KLFs)家族中的一个亚家族.在Spl/KLFs家族中spl首先被克隆和纯化,在SV40启动子中Spl通过3个C2H2锌指与富含CC的位点特异性结合.在果蝇属胚胎调节因子Krüppel中也存在类似的DNA结合区,随后具有与Spl高度相似锌指结构的其他转录因子相继发现,形成一个Spl/KLFs家族[1].
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子宫内膜异位症中子宫内膜间质细胞侵袭、转移能力的研究
目的：检测子宫内膜异位症（EMs）患者子宫内膜间质细胞中环氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、锌指转录因子（Snail）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA表达情况，分析EMs中子宫内膜间质细胞的侵袭、转移能力。方法收集EMs患者的在位及异位病灶子宫内膜组织和子宫肌瘤患者的在位内膜组织，原代消化培养子宫内膜细胞，取纯化的第4代子宫内膜间质细胞进行研究，RT-PCR法检测细胞COX-2、PGE2、Snail和E-cad?herin mRNA的表达。结果 EMs和子宫肌瘤患者分泌期在位子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、Snail和E-cadherin mRNA表达与增殖期比较差异均无统计学意义；EMs患者在位及异位的子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、Snail mRNA表达比肌瘤患者在位细胞均明显升高，而E-cadherin mRNA表达降低（P＜0.05或P＜0.01）；EMs患者异位的子宫内膜间质细胞COX-2、PGE2、Snail mRNA表达比在位间质细胞升高，而E-cadherin mRNA表达降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论 EMs患者的子宫内膜间质细胞侵袭、转移能力强于非EMs患者，且在EMs发病中异位病灶子宫内膜间质细胞的侵袭、转移能力更强。
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Snail在前列腺癌中的研究进展
前列腺癌(PCa)是西方国家男性常见的恶性肿瘤,但是近年来我国PCa的发病率呈逐年上升趋势.Snail是锌指转录因子,属于转录因子中的snail超家族成员,序列和功能很保守,在胚胎发育、肿瘤发生、细胞信号转导、基因表达、细胞周期调控及创伤愈合等中发挥积极作用.Snail在肿瘤细胞中促进上皮-间质转化、上皮细胞钙黏蛋白降解以及肿瘤细胞的侵袭转移.有关snail在PCa中作用的研究报道日益增多,将为以snail为靶点的PCa治疗提供理论依据.
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Snail和N-cadherin在乳腺浸润性导管癌中的表达
目的 探讨Snail和N-cadherin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化染色法(SP法)检测80例乳腺浸润性导管癌、30例乳腺导管内癌和30例乳腺普通型增生组织中Snail与N-cadherin的表达.结果 乳腺浸润性导管癌中Snail和N-cadherin阳性表达率均显著高于乳腺导管内癌与乳腺普通型增生(P＜0.01);Snail和N-cadherin在乳腺浸润性导管癌表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.01);Snail和N-cadherin在乳腺浸润性导管癌中表达呈正相关(r=0.36,P＜0.01).结论 Snail和N-cadherin在乳腺浸润性导管癌中的过表达参与乳腺癌发生、发展以及浸润转移.
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虫草制剂通过TGF-β/Snail信号通路拮抗糖尿病小鼠肾小管上皮细胞间充质转分化
目的 探讨虫革制剂对糖尿病小鼠肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响及转化生长因子β(TGF-β)/锌指转录因子(Snail)信号通路表达情况.方法 将18只C57BL/6j小鼠随机分为正常对照组(6只)、糖尿病模型组(12只).糖尿病小鼠模型制成后,随机分为糖尿病组(6只)(常规饲料喂养正常饮水)和虫草菌液治疗组(6只)(每日给予0.54 g/kg发酵冬虫夏草菌粉提取液).治疗6周测定各组小鼠体质量、血糖、尿蛋白肌酐比(PCr)等生理指标变化;取肾组织光镜下观察胶原含量;免疫组化或免疫印迹技术检测E-钙粘素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(oα-SMA)、TGF-β1及Snail 1蛋白表达.结果 免疫组化及肾组织胶原纤维(Masson)染色显示,与正常对照组比较,糖尿病组及虫草菌液治疗组肾组织E-Cadherin的表达均明显下降,α-SMA的表达均明显上升,胶原成分明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组比较,虫草菌液治疗组E-Cadherin下降幅度、α-SMA上升幅度、胶原成分均减少,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹结果显示,与对照组比较,糖尿病组肾组织TGF-β1及Snail1蛋白表达水平明显上升,差异有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组比较,虫草菌液治疗组TGF-β1及Snail1蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 虫草制剂可能通过下调TGF-β/Snail信号通路表达抑制糖尿病小鼠肾小管上皮细胞EMT,减轻肾组织纤维化.
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KLF3结构及其生理功能研究进展
KLF (Krüppel-like factors)家族是真核生物中一大类基础转录因子(Basic transcription element-binding protein,BTEB),初发现于果蝇胚胎发育调控因子Krüppel,因其与Krüppel 锌指转录因子的 DNA 结合域高度同源而得名[1].KLF3是转录因子KLF家族成员之一.研究发现,KLF3具有参与脂肪和红细胞生成、B细胞发育及对肌肉基因调节和神经系统多种生物学功能,成为目前研究热点之一.
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人胰腺癌细胞株锌指转录因子GLI1及PTCH1基因表达的检测
目的:检测5株人胰腺癌细胞株Hedgehog信号转导通路成员锌指转录因子GLI1、PTCH1基因的表达情况,测定并分析其基因序列.方法:用RT-PCR方法检测5株胰腺癌细胞株及25例正常胰腺组织GLI1、PTCH1mRNA的表达;纯化、回收目的基因GLI1、PTCH1,将其分别插入克隆载体pTA2,限制性内切酶酶切鉴定,测定序列.结果:5株胰腺癌细胞株均表达GLI1、PTCH1,25例正常胰腺组织均不表达GLI1、PTCH1;成功构建重组质粒pTA2/GLI1、pTA2/PTCH1,测序结果与GeneBank公布的基因序列一致.结论:Hedgehog信号转导通路的过度激活参与了胰腺癌的发生,可能是胰腺癌治疗的潜在新靶标.
关键词： 胰腺肿瘤 Hedgehog信号通路 锌指转录因子 PTCH1 -
非小细胞肺癌组织中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表达及临床意义
目的 探讨指转录因子Snail、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)及神经钙黏素(N-cadherin)在非小细胞肺癌组织中的表达及其之间的相关性.方法 采用免疫组化法检测63例非小细胞肺癌(NSCLC)手术切除标本及30例癌旁组织中Snail 、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,并分析相互间关系及其临床意义.结果 与癌旁组织比较,NSCLC组织中E-cad-herin表达显著减少,N-cadhern和Snail表达明显增加(P＜0.01).NSCLC组织中,Snail的表达与N-cadhenn呈明显的正相关(P＜0.05,r=0.33),与E-cadherin呈显著负相关(P＜0.05,r=-0.41),N-cadherinl的表达与E-cadheri也呈明显负相关(P＜0.05,r=-0.56).Snail表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P＜0.05);E-cadherin表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P＜0.05);N-cadherin表达阳性率与组织学分型、TNM分期和有无转移相关(P＜0.05).结论 NSCLC癌组织中Snail、E-cadherin和N-cadherin表达水平与肿瘤的浸润转移密切相关,可作为临床诊断和治疗靶点的参考指标.
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Slug和Claudin-7在食管癌中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响
目的:探讨紧密连接蛋白Claudin-7和锌指转录因子Slug的表达对食管癌生物学行为的影响.方法:选择2012年3月至2015年3月来我院进行检查和治疗的食管癌患者的食管癌组织标本124例作为观察组,另选择64例经检查确定为非食管癌患者的健康食管组织作为对照组.对相关生物样本的分析按照食管癌诊治规范进行.分析观察组所有样本的肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移情况等;检测两组样本中Slug和Claudin-7的表达水平,分析其与肿瘤生物学行为的相关性.结果:Slug和Claudin-7均具有在食管癌组织中呈现阳性表达、而在正常食管组织中表达较少的现象(P＜0.05);性别、年龄和肿瘤大小与Slug和Claudin-7的表达水平无关,而肿瘤的分化程度、浸润深度和是否发生淋巴结转移与Slug和Claudin-7的表达相关(P＜0.05);Slug蛋白表达和Claudin-7蛋白表达之间呈正相关(P＜0.05).结论:Slug和Claudin-7在食管癌组织中表达量显著升高,且与肿瘤细胞的浸润深度、分化程度和淋巴结转移相关,提示Slug和Claudin-7可能在食管癌的发生、分化和转移过程中起一定作用.
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MMP-9、Snail蛋白在肝细胞癌联合表达与术后复发的关系
目的 研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和锌指转录因子(Snail)在肝细胞癌的表达,分析两者联合表达与术后复发的关系.方法 收集手术切除后经病理证实的肝细胞癌组织石蜡标本50例及其患者的临床资料、手术记录和随访记录,采用免疫组化检测MMP-9、Snail在肝细胞癌组织的表达,根据表达结果分为联合阳性表达组和阴性表达组,分析两者联合表达的相互关系以及与术后复发的关系.结果 MMP-9表达主要定位于细胞质,Snail表达主要定位于细胞核,部分伴有细胞质表达.MMP-9、Snail在HCC中联合表达率为64％,联合阴性表达率为24％(P＜0.05).MMP-9和Snail在HCC中的表达密切相关(Kappa值=0.72;P＜ O.01).两者联合表达组的平均复发时间(9.9±0.6)个月,中位复发时间(9.0±0.8)个月,术后1年复发率79.4％,而两者联合阴性表达组术后平均复发时间(20.9±1.2)个月,中位复发时间(20.0±0.82)个月,术后1年复发率8.3％,两者差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 MMP-9和Snail在HCC癌组织的侵袭与转移中可能存在协同关系,两者可以作为评估肝细胞癌恶性程度、术后复发及预后的指标.
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基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用
目的 通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子( Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染人细胞内.通过四甲基偶氮唑兰(MTF)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Westem blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达情况.结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P＜0.05)；体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P＜0.05)；RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P＜0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05).结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致.
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SALL4在生殖细胞和非生殖细胞肿瘤中的表达：3215例标本的系统性免疫组化研究
Sal-like protein 4(SALL4)是一种与胚胎干细胞多能性相关的锌指转录因子,已被证明为有用的生殖细胞肿瘤标志物,但关于其在正常组织及在非生殖细胞肿瘤中的表达研究甚少。为此,作者采用单克隆抗体6E3和全自动免疫组化染色法检测SALL4在人体正常组织和3215例肿瘤中的表达。10周的胚胎中,SALL4表达在卵母细胞、肠、肾和一些肝细胞,在发育成熟的组织中,SALL4仅在生殖细胞中表达。
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2型糖尿病肾病患者肾组织中Snail、MYH9的表达及意义
目的：观察锌指转录因子（Snail）、非肌肉肌球蛋白重链ⅡA（MYH9）在2型糖尿病肾病（DN）患者肾活检组织中的表达，探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本32例（ DN组）和非DN行肾活检的正常肾组织标本10例（对照组），应用免疫组化法检测两组肾组织中Snail、MYH9的表达。结果 Snail阳性染色见于DN组和对照组肾小管上皮细胞，其相对表达量前者高于后者（P＜0．05）；MYH9阳性染色见于DN组肾小球足细胞和肾小管，对照组未见阳性表达；DN组纤维化的肾小球、肾小管中未见Snail、MYH9阳性表达。结论 Snail、MYH9在DN患者肾组织中表达增加，提示Snail、MYH9可能参与了DN的发生发展过程。
关键词： 糖尿病肾病 锌指转录因子 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA 免疫组织化学 -
口腔鳞癌组织中 Slug 表达及意义
目的：观察锌指转录因子（Slug）在口腔鳞癌（OSCC）组织中的表达变化，分析其与上皮间质转化（EMT）特征性蛋白E-钙黏蛋白（ E-cad）和波形蛋白（ Vimentin）的关系，探讨Slug在EMT中的作用。方法采用免疫组织化学法和原位杂交法检测42例OSCC组织（观察组）及12例正常口腔黏膜组织（对照组）中Slug、E-cad、Vimentin的表达，比较Slug在两组中表达的差异性，分析Slug与E-cad及Vimentin的相关性、Slug与OSCC临床病理因素的相关性。结果观察组Slug的阳性表达率明显高于对照组（ P＜0．01）；Slug在OSCC组织中的表达与淋巴结转移、肿瘤病理分级有关（P均＜0．05），与OSCC 发病年龄无关；Slug 与E-cad的表达呈负相关（r＝－3．19，P＜0．05），Slug与Vimentin的表达呈正相关（r＝0．264，P＜0．05）。结论 OSCC组织中Slug表达明显上调，并与E-cad、Vimentin具有相关性，在EMT中具有重要作用，参与了OSCC的发生、分化及转移过程。
