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HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽免疫学特性研究
目的:明确一种人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽作为HPV疫苗发展的可能性.方法:通过对几种主要致病型别HPV外壳蛋白L1 的三维结构及其氨基酸序列的分析,构建HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽疫苗,以该短肽对动物进行免疫接种诱导抗短肽抗血清,再用ELISA、SDS-PAGE电泳、Western blot及免疫组化等方法对短肽和抗短肽血清的免疫学特性进行检测.结果:短肽自身免疫原性较差,而短肽与Furend's完全佐剂合用免疫动物则能诱导较高滴度的抗短肽血清并且该抗血清能与多种型别HPV蛋白发生反应.结论:HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽有望作为HPV疫苗候选物.
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A组轮状病毒感染的流行病学及自然免疫研究进展
轮状病毒(rotavirus,RV)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属,根据病毒外壳蛋白VP6的抗原性不同,RV分为A~G组.A组RV是全球各地儿童胃肠炎的主要病原,几乎所有5岁以下的儿童都感染过RV,每年有100万左右的儿童(大部分是幼儿)死于RV感染[1],主要是由腹泻引起的脱水所致.
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前S1抗原在乙型肝炎中的诊断意义
乙型肝炎病毒(HBV)外壳蛋白是由S蛋白前S1( presl)蛋白和S2蛋白三种成份共同构成[1],作为一项新的HBV 血清学的S1蛋白抗原检测已被普遍认同,并用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.本文通过对210例乙肝患者的血清进行了presl-Ag,HBV-DNA联合检测,主要观察presl-Ag对乙肝患者的临床意义.
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中国大豆花叶病毒SC7外壳蛋白基因的序列测定及其与美国株系的比较
为了探索大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV) SC7外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列与病毒致病性作用及其与美国株系的对应关系,本研究通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),克隆了我国SMV SC7株系的CP基因,并测定了其全序列.结果表明:CP基因长度为795bp,编码的CP蛋白为265个氨基酸.在致病性反应上,SC7的毒力比美国的毒株更强些.在分子水平上,CP基因核苷酸序列差异为4%~5%,编码的氨基酸序列差异为1%~2%.美国株系N端都存在与蚜传有关的保守基序DAG (Asp-Ala-Gl),但在SC7为DAD(Asp-Ala-Asp).将序列信息与SMV株系在鉴别寄主上的症状反应进行综合分析发现,CP基因的同源性与SMV在鉴别寄主上的致病性反应没有明显关系.
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外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响
对野生型烟草花叶病毒(TMV-U1)的外壳蛋白羧端序列进行系列缺失突变,观察到TMV-U1株系的外壳蛋白羧端序列缺失6个氨基酸(保留152个氨基酸),仍能较强系统侵染烟草并高水平表达外壳蛋白,且能在新生叶里复制大量完整的病毒粒子.该研究结果表明:外壳蛋白羧端6个氨基酸序列并非烟草花叶病毒感染和复制所必需,并对利用外壳蛋白羧端缺失型病毒载体表达外源多肽具有一定的启示性.
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临床样品中不同蚀斑表型单克隆轮状病毒VP8基因序列分析
轮状病毒属于呼肠孤病毒属,为没有包膜的双链 RNA病毒,人畜禽共患,其感染每年引起约50万婴幼儿死亡[1]。宿主细胞表面的寡糖分子是一个重要的因子,它们与轮状病毒和细胞的相互识别及吸附有关,同时还影响了病毒的宿主特异性[2]。研究表明,轮状病毒外壳蛋白 VP4的糖类结合区域位于 VP4的亚基 VP8,其与细胞表面寡糖分子的相互作用使病毒识别并吸附到细胞表面。轮状病毒对细胞的感染是通过 VP8与细胞表面多糖,尤其是与内部唾液酸(N-acetyl- and N-glycolylneuraminic acids,Sia)的结合完成的[3]。人株、猴株以及猪轮状病毒 VP8基因序列在识别细胞表面唾液酸或其衍生物甲基-α二氮乙酰神经氨酸的位点有显著的差异[1],影响病毒在细胞培养上的敏感性和适应性。
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人博卡病毒外壳蛋白(VP3)的重组表达及间接ELISA检测方法的建立
人博卡病毒(Human Bocavirus)是2005年Tobias Allander等从小儿下呼吸道感染分泌物分离到的新细小病毒[1],我们曾报道中国分离的人博卡病毒(WLL-1株)的全基因组序列[2,3].
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人乳头瘤病毒11型L1/CD80嵌合真核表达质粒的构建和鉴定
生殖道尖锐湿疣主要是由人乳头瘤病毒6型(HPV6)和11型(HPV11)感染引起.HPV病毒仅存在终末分化的复层鳞状上皮组织中,含量很少.HPV病毒的晚期表达基因L1所表达的外壳蛋白不仅是主要的外壳蛋白,还是主要的病毒抗原蛋白,在宿主细胞表面有其蛋白受体,可成为预防性疫苗理想的靶抗原.
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轮状病毒全长VP4抗原在大肠杆菌中的表达
VP4是轮状病毒的主要抗原,成刺状突起位于病毒的外壳上.蛋白含量仅占病毒蛋白总量的1.5%.前期研究表明,用VP4或其片段免疫小鼠后,能有效地诱导同源或异源保护反应.本研究在大肠杆菌中表达并纯化了轮状病毒SA11株的外壳蛋白VP4,并测定了该纯化产物免疫豚鼠后的中和抗体滴度.
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慢性乙型肝炎患者HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA与肝功能的关系
乙型肝炎病毒(HBV)基因组表面抗原(HBsAg)编码区(S区)由S、前S1和前S2基因组成,分别编码S、前S1和前S2三种主要蛋白,从而共同构成HBV外壳蛋白[1].作为一项新的HBV血清学检测指标,乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV preS1-Ag)的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.我们对310份慢性乙型肝炎患者血清进行了HBV preS1-Ag、HBV-M、HBV-DNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)联合检测,进而分析探讨这些指标之间的关系.
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金标试纸条在乙肝表面抗原检测中的应用
乙肝表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒外壳蛋白中的主要成分,其阳性是感染乙肝病毒的标志,是检查乙肝血清标志物中较重要的一项[1].近年来发展的金标法检测HBsAg与传统的酶免疫吸附实验(EusA)相比,具有简便、快捷、准确等优点,能够满足临床急诊的需要,且较适合使用于流行病学调查,应用前景非常广阔.
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长春地区婴幼儿腹泻轮状病毒分型研究
轮状病毒(HRV)1973年由Bishop等人发现,它是引起婴儿非细菌性腹泻的主要病原.全世界每年约有600 000名5岁以下儿童的死亡与HRV感染有关[1],营养状况对HRV发病危险影响不大,改变卫生条件对轮状病毒的预防并不十分有效,因此发达国家和发展中国家几乎所有3~5岁儿童均感染过HRV[2].HRV血清型是由病毒外壳蛋白VP4和VP7抗原性不同区分的.
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三种免疫状态乙型肝炎患者外周血前S1蛋白的变化
乙型肝炎病毒(HBV)外壳蛋白包括S蛋白、前S1蛋白和前S2蛋白,近年来研究资料显示,前S1蛋白含有肝细胞膜受体,与病毒侵入肝细胞以及复制关系密切[1].本文从免疫状态的角度检测HBV感染的慢性HBV病毒携带者、HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者和:HBeAg阳性CHB患者的前S1蛋白,旨在了解不同组间的差别及分析三种免疫状态CHB患者的前S1蛋白含量的变化趋势.
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慢性乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床应用价值探讨
乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)编码区由S、前S1和前S2基因组成,分别编码S、前S1和前S2三种主要蛋白,从而共同构成HBV外壳蛋白[1].前S1蛋白含有肝细胞膜受体,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答反应中起重要作用.作为一项新的HBV血清学检测指标,乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV pre S1-Ag)的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.检测慢性乙型肝炎患者乙型肝炎血清标志物(HBV-M)、乙型肝炎前S1抗原(HBV preS1-Ag)、乙型肝炎病毒DNA定量(HBV-DNA),分析HBVpre S1-Ag在慢性乙型肝炎中的应用价值.
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浅谈乙型肝炎患者HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA与肝功能的关系
乙型肝炎病毒(HBV)外壳蛋白由S、前S1和前S2三种蛋白共同构成.乙型肝炎病毒前S1抗原(HBVpreS1-Ag)作为一项新的血清学检测指标已广泛应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.我们对455份乙型肝炎患者血清HBVpreS1-Ag、HBV-M、HBV-DNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)的检测结果进行统计并分析这些指标之间的关系.
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前S1抗原在乙型肝炎诊断中的临床意义
乙型肝炎病毒(HBV)外壳蛋白是由S蛋白、前S1(Pres1)蛋白和S2蛋白三种成分共同构成[1],作为一项新的HBV血清学的S1蛋白抗原的检测已被普遍认同,并用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.
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应用金标免疫斑点法快速诊断轮状病毒感染及临床意义
金标免疫斑点法是采用对人类轮状病毒敏感、特异性较好的单克隆抗体(抗HRV,主要是外壳蛋白VP4)结合金标免疫的技术.该法可检测粪便中轮状病毒抗原(HRV),为临床提供诊断依据,对急慢性腹泻病人(特别是婴幼儿)进行鉴别诊断,提高轮状病毒A型在婴幼儿中的检出率.
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紫藤脉花叶病毒cp基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备
采用RT-PCR方法自紫藤脉花叶病毒北京分离物(WVMV-BJ)的基因组中分离出其CP基因,连接到原核表达载体pET22b(+)上.获得的重组子pET-WVMVCP转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析表明,cp基因在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白分子量约为34.4 kDa.将融合蛋白纯化后免疫兔子,获得了特异性较高的抗血清.微量免疫沉淀法测定该抗血清的效价为1/1024,酶联法(enzyme-linkedimmunosorbant assay,ELISA)测定的效价为1/8192.
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马铃薯X病毒湖南分离物的鉴定与分组研究
从湖南石门采集表现重花叶症状的马铃薯叶片中分离纯化到一株线状病毒HN021.经双链RNA(ds-RNA)抽提、寄主反应测定、病毒粒子和内含体的形状观察, 初步确定该病毒为马铃薯X病毒 (Potato virus X).以ds-RNA作为模板,用相应引物对HN021分离物的ORF4-UTR-ORF5片段进行RT-PCR,得到1kb左右的双链cDNA片段.对该片段进行克隆和测序,并将测序所得的核苷酸序列与Genbank登录的11株不同分离物的相应片段的核苷酸序列进行同源性比较和分析.结果表明,HN021与分离自南美洲的三株分离物(COAT,KPA和HB)的同源性为78.4%~79.4%,与其它8株(分离自亚洲、欧洲、大洋州和北美洲)分离物的同源性为96.4%-97.8%.从氨基酸水平比较,HN021与COAT,KPA和HB三者CP和8kDa蛋白氨基酸序列同源性分别为86.5%~89.0%和74.3%~75.7%,相应地与其它8株分离物的同源性分别为97.1%-98.7% 和97.1%-100%.序列分析的结果证实了HN021分离物为马铃薯X病毒,同时表明PVX明显存在两个组(组Ⅰ和组Ⅱ),HN021和其它来自亚洲、欧洲、大洋州、北美洲分离物的组II,3个南美洲分离物属于组I.
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甘蔗花叶病毒3’末端基因的克隆及外壳蛋白序列分析比较
选取我国SCMV优势株系A株系的分离物SCMV-CA为材料,经过病 毒和病毒RNA的提纯,反转录获得病毒cDNA,并克隆到载体pUC19的Sma I位点上,筛选 得到多个重组质粒。选取其中一个克隆SCMV-CA54进行测序,得到一个全长为1?296?bp的 核苷酸序列。这段序列由一个长为1?044?bp的开放阅读框架(ORF)和一个长279?bp的3 ’ 末端非编码区序列(3'-UTR)及poly(A)尾巴组成。这个ORF包括病毒完整的外壳蛋白(CP )及部分核内含体蛋白b(NIb)基因序列。将所得序列同已知SCMV亚组中各株系分离物的核 苷酸和氨基酸进行同源性比较,结果表明该序列与其它株系分离物CP核苷酸序列的同源性介 于63.7%~77.6%之间,氨基酸的同源性介于64%~89%之间。根据马铃薯Y病毒属的序列同源 性划分标准,SCMV-CA与其它株系或分离物的同源性关系均介于种与株系划分标准之间。这 是我国首次报道SCMV CP基因序列。