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化学发光微粒子免疫分析法和酶联免疫吸附分析法检测癌胚抗原的效果
目的 比较化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测癌胚抗原(CEA)的效果.方法 分别采用CMIA和ELISA检测临床标本中CEA的水平,分析其灵敏度、检测范围、精密度、准确度及相关性.结果 CMIA法和ELISA法的灵敏度分别为0.5、1.8 ng/mL.CMIA法检测范围为0.5~1336 ng/mL,ELISA法的检测范围为1.8~90 ng/mL.CMIA法高、中、低值混合血清的批内和批间精密度均小于5%,而ELISA法的均小于15%.CMIA法高、中、低的回收率分别为95.9%、103.1%、106.2%,平均为101.7%;ELISA法分别为93.8%、97.4%、94.6%,平均为95.3%.CMIA法和ELISA法检测CEA水平的线性回归方程为Y=0.9244X+3.1739(r=0.967,P<0.01).结论 CMIA法检测CEA水平的灵敏度、检测范围、精密度及准确度均优于ELISA法,但ELISA法检测CEA的结果也能满足临床要求,适用于大批量体检标本检测.
关键词: 化学发光微粒子免疫分析法 酶联免疫吸附分析法 癌胚抗原 -
人生长激素的生物素-亲和素放大酶联免疫法的建立
为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素(hGH)酶联免疫分析法(BA-ELISA),以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术制备出29株分泌抗hGH单克隆抗体(MCA)的杂交瘤株.选择佳配对MCA,利用亲和素与生物素高亲和力的特性,建立了血清hGH双位点的BA-ELISA法.我们的MCA滴度为(0.5 ~ 50.0)×104,亲和常数Ka=(0.13~1.40)×1010L/mol.血清hGH的ELISA的灵敏度为0.04±0.01 μg/L;在血清中分别加入1,2.5,5μg/L的hGH,其回收率为 90.7%~107.6%(平均为 101.20% ±0.03 %);hGH含量为2.8、10.0、29.8μg/L 的血清批内、批间变异系数分别为4.9%、3.8%、7.9%和6.2%、3.5%、9.5%;用本法测定了正常儿童、生长激素缺乏症(GHD)患儿和活动性肢端肥大症患者空腹血清hGH水平,分别为1.87±3.0、0.30±0.42和8.71±6.95 μg/L.上述结果表明,本ELISA方法灵敏、特异、稳定、准确,能确切反映hGH分泌功能,在诸多方面均优于RIA.
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降低血浆同型半胱氨酸水平与脑梗死复发率关系的研究
本研究应用酶联免疫吸附分析法,检测230例脑梗死患者血浆中同型半胱氨酸(Hcy)水平,并评价降低血浆Hcy水平对脑梗死复发的预防作用,为预防脑梗死复发提供依据.
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原发性肝脏黏液样型脂肪肉瘤一例
患者女,38岁.主因上腹间歇性胀痛20 d入院.体检:一般情况好,皮肤无黄染,腹平软,肝肿大至肋下2 cm,质中,轻压痛,浅表淋巴结无肿大.实验室检查:白蛋白与球蛋白之比1.3,总胆红素0.8μmol/L,直接胆红素0.2μmol/L,酶联免疫吸附分析法测乙肝表面抗原阴性,化学发光免疫法测甲胎蛋白(AFP)阴性.
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不同方式滥用海洛因依赖者HAV、HBV和HCV感染情况分析
目的:了解滥用海洛因方式对HAV、HBV及HCV感染率的影响.方法:采用放射免疫分析法和酶联免疫吸附分析法对386例海洛因依赖者的血清进行检测,并对检测数据进行统计分析.结果:肌肉注射+静脉注射、烫吸+肌肉注射、烫吸+静脉注射和烫吸4种方式滥用海洛因的HAV的感染率均为0,含静脉注射滥用方式导致的HBV、HCV感染率显著高于不含静脉注射滥用方式的,烫吸+肌肉注射与烫吸两种滥用方式者中HBV和HCV的感染率差异无显著性.结论:静脉注射海洛因会导致HBV、HCV感染率增高.
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妊娠期高血压疾病患者血清白细胞介素-18和胎盘生长因子水平变化及意义
目的:探讨妊娠期高血压疾病患者血清白细胞介素-18和胎盘生长因子水平变化及意义.方法:采用酶联免疫吸附分析法测定实验组60例妊娠高血压疾病患者(妊娠期高血压20例,轻度子痫前期20例,重度子痫前期20例)和正常晚期妊娠孕妇(对照组)35例血清IL-18及sFlt-1水平并进行比较,绘制ROC曲线观察其对妊娠期高血压疾病的诊断价值.结果:实验组患者血清IL-18及sFlt-1水平明显高于对照组|同时,轻度子痫前期、重度子痫前期患者的血清IL-18及sFlt-1水平明显高于妊娠期高血压患者;重度子痫前期患者的血清IL-18及sFlt-1水平明显高于轻度子痫前期患者;ROC曲线分析血清IL-18及sFlt-1的诊断特性好.结论:妊娠期高血压疾病患者血清IL-18及sFlt-1的水平变化在一定程度上反应病情的轻重,可做为联合诊断和病情评估的重要指标.
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呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究
目的 表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础.方法 逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白.将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA.通过100份标本,应用"金标法"对所建立的方法 进行验证.结果 成功获得F基因中F.片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大表达蛋白.确定了间接夹心ELISA的佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG佳质量浓度为3.2μg/mL,样品佳反应时间为37℃70min,酶标兔抗鼠IgG佳工作浓度为1:6000.与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%~8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%~8.3%,均小于10.0%,表明该方法 有良好的重复性.结论 构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果.
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克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究
目的:将自制克伦特罗(CL)单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线.方法:用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELISA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线.将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化.结果:经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2.90×1010 mol/L,抗体效价高达106.单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0.005%.建立的标准曲线R2=0.9812,低检测限为1.0 ng/ml.结论:建立了间接竞争ELISA检测CL的标准曲线.自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高.为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础.
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应用聚合酶链反应技术快速诊断小儿单纯疱疹病毒脑炎38例分析
我科自1994年3月至1998年5月应用聚合酶链反应(PCR)技术检测脑脊液单纯疱疹病毒DNA,辅助诊断38例小儿单纯疱疹病毒脑炎.患儿均附合单纯疱疹病毒脑炎的诊断标准.男23例,女15例.年龄4岁~7岁4例,~9岁8例,~11岁11例,~14岁15例.患儿均有发热,头痛32例,恶心、呕吐24例,有脑膜刺激征24例,意识障碍9例,精神症状12例,偏瘫3例,偏侧肢体肌阵挛2例.18例有口唇皮肤疱疹病史.30例血白细胞计数增高或中性粒细胞增高.38例脑脊液压力均增高,细胞数(10~200)×106/L28例,(200~600)×106/L 6例,以单核细胞为主,其余4例细胞数正常.蛋白质均有不同程度增高,糖和氯化物正常.脑电图检查26例,均有不同的变化.我们应用酶联免疫吸附分析法作血和脑脊液单纯疱疹病毒抗体测定,阳性12例(占31.6%);应用PCR技术检测脑脊液单纯疱疹病毒DNA,阳性31例(占81.6%),两种方法阳性率比较,P<0.01,差异有非常显著意义.小儿单纯疱疹病毒脑炎起病急,病情重,预后与治疗是否及时及疾病严重程度有关.我们取脑脊液应用PCR技术诊断单纯疱疹病毒脑炎,具快速、简便和特异性强的优点.
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TGA、TMA酶联免疫吸附分析法的建立
甲状腺球蛋白抗体(TGA)与甲状腺微粒体抗体(TMA)的检测,多用于Hashimoto病和Craves病的诊断,是临床诊断的重要指标之一.测定血清中的TGA、TMA有多种方法,决定方法灵敏度的关键是抗原的纯度.本文采用双重层柱分离提纯TGAg,通过超速离心和高压液相色谱(HPLC)获取纯品TMAg,在此基础上建立了高灵敏度的TGA和TMA酶联免疫吸附分析法(ELISA).
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ELISA法研究聚乙二醇化重组人生长激素小鼠体内的药动学
建立了双抗夹心ELISA法检测小鼠血清中聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-GH)的浓度.结果表明,PEG-GH和重组人生长激素(rhGH)浓度均在1~150ng/ml范围内呈良好的线性关系.PEG-GH以静脉注射与皮下注射两种途径给药,所得t1/2β分别为静注rhGH的34.8倍和39.8倍,清除率明显下降.表明PEG-GH具有长效作用.
关键词: 聚乙二醇化重组人生长激素 药物动力学 酶联免疫吸附分析法 -
人房水中β-微量蛋白的测定
目的测定人房水中β-微量蛋白(β-tp)的含量.方法制备抗β-tp的抗体,用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定124例白内障(124眼)、15例青光眼(15眼)及8例视网膜剥离(8眼)患者房水中的β-tp浓度.结果白内障患者房水中β-tp浓度(1.08±0.75)×10-2ng/L.其中,男性为(1.12±0.78)×10-2 ng/L,女性为(1.07±0.76)×10-2 ng/L,≥60岁者(1.09±0.75)×10-2 ng/L,<60岁者(1.27±0.82)×10-2 ng/L.青光眼患者房水中β-tp浓度为(0.67±0.21)×10-2ng/L,视网膜剥离患者为(0.90±0.30)×10-2ng/L.结论房水中β-tp浓度不受性别及年龄的影响,青光眼与老年性白内障患者房水内β-tp的浓度无明显差别.
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雌二醇不同测定方法结果的校正
放射免疫分析法(RIA)、化学发光法(CIA)、酶联免疫吸附分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和电化学发光法(ECL)等是目前临床上常用的标记免疫检测方法,在实际应用中各有千秋[1].然而对同一个被测物,用不同方法测得的结果不尽相同,有的甚至成倍相差,对临床判断正常范围与治疗随访造成困难.本文以雌二醇(E2)为例,选用不同的方法测定,分析上述不同方法测定结果的差异,探讨其相关性,以其用一种方法测得的结果推算另一方法的结果,增加临床应用时各方法测定结果间的可比性,为临床诊疗提供方便.
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使用酶联免疫反应加速仪与传统方法对乙肝表面抗原检测的比较
采用酶联免疫反应加速仪与传统水浴箱两种仪器在使用相同诊断试剂条件下,分别对标准品血清、阴性血清、阳性对照血清、502份随即抽样血清,使用酶联免疫吸附分析法进行乙肝HBsAg检测,并进行对比试验,判断两种仪器检测结果的线性、特异性和重现性.
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固表解毒合剂对免疫抑制小鼠免疫功能的影响
为探讨固表解毒合剂对免疫系统功能的影响,用环磷酰胺造成免疫系统功能抑制的小鼠模型,用ELlSA法检测其血清IgG、IgM、IFN-γ和IL-2,观察固表解毒合剂对模型小鼠体液免疫和细胞免疫的影响.结果:低剂量固表解毒合剂可显著升高环磷酰胺造成的免疫功能抑制的小鼠血清IgG、IgM、IFN-γ和IL-2,说明固表解毒合剂对环磷酰胺造成的小鼠免疫功能抑制有明显的增强作用.
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固表解毒合剂对大鼠棉球肉芽肿形成的影响
探讨固表解毒合剂对大鼠棉球肉芽肿形成的影响.制备大鼠棉球肉芽肿模型,产生与炎症后期病理变化相似的肉芽增生,用固表解毒合剂进行干预.结果:不同剂量的固表解毒合剂均抑制肉芽肿的形成,降低血清中PGE2的水平,且呈量效相关趋势,高剂量组的作用强,但都弱于醋酸地塞米松;对血清中TNF-a和IL-1β有降低作用,低剂量组的作用强,对IL-1β的降低作用强于醋酸地塞米松.结论:固表解毒合剂对大鼠棉球肉芽肿的形成及其炎症病理反应有抑制作用.
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ELISA法和HPLC法检测粮油食品中黄曲霉毒素B1含量的比较研究
[目的]研究和评价ELISA和HPLC两种方法检测粮油食品中黄曲霉毒素B1之间的差异.[方法]用两种检测方法同时检测大量样品,并做加标回收试验.[结果]ELISA法和HPLC法相对误差平均值为5.25%.在AFB1浓度为0.5~12.5ppb时,ELISA法回收率为35.21%~155.13%,HPLC回收率为33.74%~75.70%.[结论] ELISA法比HPLC法操作简便,快捷,回收率较理想.
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结直肠癌患者血清组织基质金属蛋白酶抑制剂-1水平及其临床意义
目的 检测结直肠癌患者血清组织基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP -1)水平并探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对64例经病理证实的术前结直肠癌患者、40例结直肠良性病患者和40例健康体检者血清TIMP -1水平进行检测.结果 结直肠癌患者血清TIMP -1水平明显高于结直肠良性病患者和健康体检者(P<0.001);结直肠癌患者血清TIMP -1水平与性别、年龄、肿瘤大小及淋巴结转移不相关(P>0.05),与肿瘤分期、远处转移有关(P<0.05),肿瘤细胞分化程度低的患者血清TIMP -1水平高于细胞分化程度高的患者(P<0.05).结论 血清TIMP -1水平与结直肠癌的肿瘤分期、远处转移及分化程度有关,可能是一个判断结直肠癌预后的生物学指标.
关键词: 结直肠癌 组织基质金属蛋白酶抑制剂-1 血清 酶联免疫吸附分析法 -
CLIA和ELISA法检测乙肝HBeAg的比较
目的 评价化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎E抗原(HBeAg)的效果.方法 CLIA与ELISA法分别检测HBeAg质控品实测浓度及患者血HBeAg浓度,比较两种方法在检测HBeAg实验中的线性,精密度,相关性和回收率.结果 在检测HBeAg的精密度实验中,CLIA批内CV为1.92%,批间CV为3.68%;ELISA批内CV为11.74%,批间CV为15.41%;CLIA法精密度优于ELISA.相关性实验中,CLIA (Y)和ELISA(X)的相关性为Y=1.32X+8.23,相关系数R=0.991.CLIA和ELSIA平均回收率分别为98.80%和93.28%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CLIA具有灵敏度高、标准曲线剂量范围宽、自动化程度高、操作简便等优点,检测结果准确度优于ELISA,CLIA对于乙型肝炎早期预警和快速诊断具有重要意义.
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化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定癌胚抗原的应用
目的 通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血癌胚抗原(CEA)进行分析和探讨.方法 预先用ELISA对检测CEA的血清标品进行分组,然后根据浓度级别分组冉检测血清CEA的浓度.结果 ELISA和ICA联合检测血CEA,可大大节约非常昂贵的ICA试剂,又能快速发出检验报告.结论 该方法 无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益.