首页 > 文献资料
-
胆红素导致SD大鼠脑干神经元突触小体Ca2+过载
目的·探讨胆红素暴露对SD大鼠脑干神经元突触小体游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法·采用出生后7~14 d的SD大鼠40只,随机分成3组,分别为对照组、胆红素组(浓度分别为0.1、1、10 μmol/L)以及胆红素+甘氨酸熊脱氧胆酸(GUDCA)干预组.用蔗糖密度梯度离心法提纯脑干神经元突触小体;采用光学显微镜及透射电子显微镜验证突触小体活性,以OG-BAPTA作为钙离子荧光探针,共聚焦激光扫描显微镜下观察不同条件下突触小体荧光强度的实时变化.结果· 获得了具有活性的SD大鼠脑干神经元突触小体.在对照组中随着观察时间的推移,突触小体荧光强度缓慢升高;胆红素组表现更为强烈、与暴露时间及浓度相关的升高(主体内、主体间效应检验,P<0.05);单纯给予GUDCA并未改变实验体系中的荧光强度升高趋势(与对照组比较, P=0.656),但GUDCA干预降低了胆红素暴露所致荧光强度的升高程度,尤其是较高浓度(10 μmol/L)胆红素,差异具有统计学意义(P=0.000).结论·胆红素能使突触小体发生钙超载,并与暴露浓度、时间呈正相关;GUDCA对胆红素所致的突触小体钙超载具有抑制作用,可能通过该途径拮抗胆红素神经毒性.
-
机械牵张对人气道黏膜上皮细胞黏蛋白5AC表达的影响及其信号通路机制研究
目的 观察机械牵张对人气道黏膜上皮细胞黏蛋白(MUC)表达的影响,并对其信号转导机制进行初步探讨.方法 采用多功能小型生物撞击机构建体外培养的人气道黏膜上皮细胞牵张模型,分别给予丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的三条主要通路抑制剂:JNK抑制剂(SP600125)、p38蛋白激酶抑制剂(SB203580)及ERK1/2抑制剂(U0126)(浓度均为30μmol/L),并设未进行机械牵张的对照组和单纯机械牵张组.采用流式细胞仪检测牵张前后胞内游离Ca<'2+>荧光强度的变化,激光共聚焦显微镜观察胞内游离Ca<'2+>"的分布情况,并分别采用RT-PCR和ELISA方法 检测MUC5AC mRNA表达和蛋白分泌量.结果 牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞胞内ca<'2+>浓度、MUC5AC mRNA和蛋白表达(均P<0.01).U0126和SB203580能抑制牵张所致MUC5AC mRNA和蛋白表达增加(均P<0.01).结论 机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞黏蛋白表达,其机制可能与胞内Ca<'2+>浓度的升高以及ERK1/2、p38 MAPK信号通路有关.
-
尼莫地平治疗增龄性记忆障碍双盲对照研究
目的 观察尼莫地平治疗增龄性记忆障碍的临床疗效及其可能的作用机制.方法 选择增龄性记忆障碍患者60例,随机均分为对照组和用药组,对照组仅口服安慰剂,用药组口服尼莫地平30 mg/次,每日3次.在用药前和用药后6周应用韦氏记忆量表(WMS)测定认知记忆功能的变化,抽取外周血测定单个核细胞及血小板内钙离子浓度和血浆总抗氧化能力(TAC).结果 用药后6周,用药组WMS各指标评分显著高于用药前及对照组(P值均＜0.05).用药组和对照组在用药前的血浆TAC水平分别为(2.5±1.4)和(2.4±1.5)U/mL,均显著低于正常成年人的(10.4±1.3)U/mL(P值均＜0.05),用药后6周用药组血浆TAC水平为(6.5±2.4)U/mL,显著高于用药前及对照组的(2.2±1.4)U/mL(P值均＜0.05).两组用药前单个核细胞及血小板内钙离子基础静息水平显著低于正常成年人(P值均＜0.05),当测定过程中给予的细胞外液中含钙时,两组钙离子水平显著升高,用药后6周用药组钙离子水平显著低于用药前及对照组(P值均＜0.05).结论 应用尼莫地平治疗增龄性记忆障碍能改善记忆功能,其可能是通过降低钙超载及恢复血浆抗氧化能力而起作用.
-
五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响
目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响.方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较.结果1 μmol/L Aβ25～35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P＜0.05);1 μmol/L Aβ25～35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P＜0.05),但较单纯Aβ25～35作用后明显下降(P＜0.05).结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用.
-
马尾松花粉多糖硫酸酯化前后对小鼠脾细胞钙离子浓度的影响
研究马尾松花粉多糖硫酸酯化前后对小鼠脾细胞内游离钙离子的影响及作用机理.应用氯磺酸-吡啶法将马尾松花粉多糖进行硫酸化修饰,采用钙离子荧光探针Fura 2 -am测定修饰前后的两种多糖对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度.马尾松花粉多糖经硫酸酯化后可显著提高脾细胞内钙离子浓度,而酯化前作用不明显.特异性L型钙通道阻滞剂维拉帕米可部分抑制酯化多糖促钙离子浓度升高的作用.在外钙为零时,酯化多糖仍可小幅度提高脾细胞钙离子浓度.马尾松花粉多糖经硫酸化修饰后可通过引发外钙内流和内钙释放两条通路提高脾细胞钙离子浓度.
关键词： 多糖硫酸酯 脾细胞 游离钙离子 钙离子莹光探针Fura 2-AM -
胆囊结石胆汁中胆汁酸量及其比例与Ca2+浓度变化相互关系的研究
目的:研究胆囊结石组胆囊胆汁中的胆汁酸量及其各种胆汁酸比例与游离Ca2+浓度变化相互关系.方法:采用高效液相色谱分析100例胆囊结石组和对照组的50例胆囊胆汁中胆汁酸量及胆汁酸比例;GHBA比色法测定总钙,钙选择电极法测定游离Ca2+.结果:胆囊结石组胆汁酸总量显著降低(P<0.05),三羟/二羟比值较对照组显著升高(P<0.05),G/T比值较对照组显著降低(P<0.01),胆囊结石组胆囊胆汁的游离Ca2+浓度较对照组显著升高(P<0.05).结论:胆囊胆汁中总胆汁酸的减少和胆汁酸比例的改变与胆汁中Ca2+浓度显著高是胆囊结石形成的一个重要原因.
-
八肽胆囊收缩素及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠脑内[Ca2+]i和CaM活性的影响
目的 观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠皮质、海马、纹状体神经细胞内[Ca2+]i和CaM活性的影响.方法 剂量递增法(10~50 mg·kg-1)连续5 d皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型,并给予腹腔注射纳洛酮(5 mg·kg-1)催促戒断,采用流式细胞术检测大鼠皮质、海马、纹状体[Ca2+]i 和CaM活性的变化.结果 (1)与盐水对照组相比,吗啡依赖组大鼠皮质、海马、纹状体内[Ca2+]i 和CaM活性均明显升高;纳洛酮催促戒断后[Ca2+]i 和CaM活性较吗啡依赖组均明显降低;(2)CCK-8及CCK-1受体拮抗剂L-364,718、CCK-2受体拮抗剂LY-288,513均使吗啡戒断大鼠海马和纹状体内[Ca2+]i和CaM活性明显升高,但皮质内[Ca2+]i 和 CaM活性无明显变化.结论 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠戒断反应的作用可能与其对相关脑区神经细胞内[Ca2+]i和CaM活性的调节有关.
-
山茶花总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的 研究山茶花总黄酮(TFC)对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 按pulsinelli方法制成全脑缺血模型,大鼠全脑缺血30 min后再灌注40min.记录脑缺血前、缺血30 min及再灌注40 min后的脑电图(EEG),取脑组织,采用荧光指示剂Fura-2定量测定大鼠前脑皮层组织细胞内游离钙离子浓度,测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量.结果 TFC可促进缺血后EEG波幅的恢复,降低缺血再灌后细胞内游离钙离子浓度的升高,抑制SOD、GSH-Px和LDH活力的下降,降低NOS的活力和脑组织中MDA、NO的含量.结论 TFC对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与其抗自由基、抑制钙超载和NO生成有关.
-
血浆PTH/PTHrP、钙离子浓度变化与胆囊胆固醇结石形成相关的研究
目的:进一步探讨了血浆中甲状旁腺激素(PTH)及其相关蛋白(PTHrP)、钙离子和胆汁中钙离子在胆囊胆固醇结石形成中的可能机制,为胆囊胆固醇结石防治提供理论根据和临床参考.方法:随机选择胆囊胆固醇结石患者45例为研究对象,同期同院随机选择健康体检人群35例,同期同院非胆囊结石患者(息肉组)30例.PTH采用ELISA检测,PTHrP采用RIA试剂盒(DSL-8100),血清中Ca2+和胆汁中Ca2+用自动生化分析仪检测,胆囊结石利用叶氏化学分析.结果:胆石组血清Ca2+较正常组明显增高(P＜0.05),其血清PTH比正常组PTH明显降低,PTHrP相应比正常组PTHrP明显增高(P＜0.05).胆石组胆汁Ca2+比息肉组胆汁中Ca2+明显增高(P＜0.05).结论:其各种浓度变化在胆囊胆固醇结石形成中存在相互影响,从而影响了胆汁代谢的异常,胆囊收缩功能的异常和胆汁中的成核因子三个基本环节发生共同致石作用.
关键词： 甲状旁腺激素 甲状旁腺激素相关蛋白 游离钙离子 钙超载 -
孕哺期镧暴露对大鼠子代海马神经元细胞内钙稳态及超微结构影响
[目的]探讨孕哺期镧暴露所致仔代发育期的神经毒性机制.[方法]成年雌性Wister大鼠受孕后至仔鼠出生后21 d.用不同浓度氯化镧(LaCl3)水染毒,仔鼠断乳后处死.取海马检测海马神经元细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度.[结果]大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i浓度(nmol/L),2.5 g/L氯化镧水组为(234.566±19.596),5.0 g/L氯化镧水组为(327.294士34.547),10.0 g/L氯化镧水组为(446.258±29.325),蒸馏水对照组为(159.396士15.235),3个实验组均高于对照组,中剂量组高于低剂量组,高剂量组高于中剂量组.差异均有统计学意义(P
-
小儿腹痛有新说
一提起小儿腹痛,人们大多会想到肠痉挛、蛔虫症.然而,随着医学科学的不断进步,对小儿腹痛又有新说--缺钙 小儿体内的钙约99%沉积在骨骼和牙齿中,只有1%存在于软组织和细胞外液内.这部分钙数量虽少,作用却很大,它可帮助血液凝固,加强细胞间的结合,维持神经、肌肉正常的兴奋性.如果血液中游离钙离子减少,神经、肌肉的兴奋性就会增高.这时肠道平滑肌只要受到轻微刺激,就会发生强烈痉挛,引起腹痛,持续数分钟及数小时缓解.腹痛小儿会哭闹不止,缓解后恢复如常.
-
汉防己甲素对成纤维细胞游离Ca2+浓度影响的机制探讨
目的探讨汉防己甲素(Tet)对成纤维细胞内游离Ca2+浓度影响的机制.方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF),应用Fura-2/AM荧光法,观察Tet对HLF游离Ca2+浓度的影响;同时应用比色法,测定细胞培养液一氧化氮(NO)水平;研究Tet对HLF游离Ca2+浓度的影响与NO间的关系.结果与正常对照组比较,Tet能明显降低HLF游离Ca2+浓度,同时明显升高细胞培养液NO水平.结论Tet对成纤维细胞的钙拮抗作用与其增加NO合成、释放有关.
-
牵张应变作用下人牙周膜细胞形态及钙离子浓度变化的实验研究
目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLcs)形态及游离Ca2+浓度的变化.方法:通过原代和传代培养获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载,并加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行Ca2+浓度的检测.应用SPSS 13.0软件对数据进行方差分析.结果:细胞内游离Ca2+浓度随牵张应变时间的延长逐渐升高,至60 min时达到该组的峰值(P<0.01);以后随加载时间的延长逐渐下降,120min时降至对照组水平(P>0.05).结论:牵张应变可以引起细胞形态的改变和细胞内游离Ca2+浓度的变化.
-
丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶基因表达及细胞内游离钙离子浓度的影响
目的 通过研究丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠肥厚心肌一氧化氮(NO)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达和细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]I)的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立压力超负荷左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为手术对照组(B组)、丹参酮低剂量组[C组,10 mg/(kg·d),腹腔注射]、丹参酮高剂量组[D组,20 mg/(kg·d),腹腔注射]及缬沙坦组[E组,10 mg/(kg·d),灌胃],另有8只SD大鼠作为假手术组(A组).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI), 采用苏木精-伊红染色法测量心肌纤维直径(MFD),硝酸还原法测定心肌组织NO的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测eNOS 的mRNA和蛋白表达水平,利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞[Ca2+]I浓度的变化.结果 ①B、C、D组的血压显著高于A、E组(均P<0.01),C、D组与B组间血压的差异无显著性意义(均P>0.05).②C、D、E组LVMI、MFD均高于A组(均P<0.05),显著低于B组(均P<0.01).③C、D、E组的NO含量明显高于B组(均P<0.01),但仍低于A组(均P<0.05).④B组eNOS蛋白和mRNA表达水平明显低于其他各组(均P<0.01);E组eNOS蛋白和mRNA表达水平显著低于A、C、D组(均P<0.05);C、D组eNOS蛋白和mRNA表达水平与A组比较,差异无显著性意义(均P>0.05).⑤B组细胞内[Ca2+]i明显高于其他各组(均P<0.01);E组和C组[Ca2+]i仍高于A、D组(均P<0.05);D组[Ca2+]i与A组比较,差异无显著性意义(P>0.05).结论 丹参酮ⅡA对心肌肥厚的抑制作用是非血压依从性的,丹参酮ⅡA通过降低心肌细胞[Ca2+]i浓度,促进心肌局部NO的产生及eNOS基因表达,起到对高血压心肌肥厚的防治作用.
-
补肾益气活血方对宫内发育迟缓胎鼠脑细胞内游离钙离子浓度的影响
探讨补肾益气活血方对宫内发育迟缓(mteruterine growth retardation,IUGR)胎鼠脑细胞内游离钙离子浓度的影响.采用被动吸烟法建立缺血缺氧IUGR大鼠模型,将动物分成IUGR模型组(IUGR组),IUGR中药治疗组(中药组),IUGR L-argme治疗组(精氨酸组)和正常对照组(正常组).运用细胞内Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM检测各组中妊娠第18～21d胎鼠神经元突触体胞液游离钙离子浓度,并以胎鼠出生体重和脑重作疗效评价.结果IUGR组胎鼠体重和脑重较之正常组明显降低(P＜0.01),中药组和精氨酸组胎鼠体重和脑重较之IUGR组明显升高(P＜0.01),且中药组胎鼠体重和脑重已接近正常组(P＞0.05).自妊娠第18 d可见IUGR组胎鼠脑细胞内游离[Ca2+]i已开始升高,至分娩前(第21 d)为正常组值的3倍多,中药组与正常组[Ca2+]i相对稳定,而精氨酸组有轻微上升.说明补肾益气活血方能通过抑制钙离子超载而保护胎鼠脑细胞,其作用优于精氨酸.
-
脑脉Ⅱ号口服液减轻高血压脑出血大鼠神经细胞凋亡的作用及机制研究
目的 探讨中药复方制剂脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞凋亡的影响.方法 将85只大鼠随机分为假手术组、对照组和中药组.向双肾双夹肾血管性高血压大鼠右侧尾状核注入胶原酶诱导脑出血.注射后2 h开始,每天灌胃给予脑脉Ⅱ号口服液(8 ml/d)或等容积蒸馏水直至处死.注射后6、12、24、72、168 h取脑,用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用Fura-2/AM荧光标记法测定突触体内[Ca2+]i.结果 与假手术组比较,对照组细胞凋亡百分率在注射6 h后显著增加(P<0.01),72 h达到高峰,168 h后明显下降;突触体内[Ca2+],的变化规律与细胞凋亡百分率的变化规律类似.脑脉Ⅱ号口服液治疗后,中药组细胞凋亡百分率和突触体内[Ca2+].均显著低于对照组(P<0.05). 结论 脑脉Ⅱ号口服液能够降低高血压脑出血大鼠神经细胞凋亡发生率,其机制可能与抑制神经细胞内钙超载有关.
-
星形胶质细胞来源微粒对脐静脉内皮细胞游离钙离子的影响
目的 探讨星形胶质细胞来源的微粒对脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 取新生24h内SD大鼠,体外原代培养脑星形胶质细胞,加入钙离子超载剂A23187处理后分步离心法提取星形胶质细胞来源微粒并鉴定;将体外常规培养的脐静脉内皮细胞分为对照组、尼膜同组及低、中、高浓度微粒处理组,尼膜同组细胞加入10μL尼膜同(0.2 mg/mL)预处理10 min,后4组细胞分别加入1×108、0.5×108、1×108、2×108个/mL微粒,对照组加入等量培养基,继续孵育10min后负载钙离子荧光探针Fluo3-AM,分别应用激光共聚焦显微镜、流式细胞术观察脐静脉内皮细胞内游离钙离子的荧光强度. 结果 原代培养星形胶质细胞稳定可靠,分步离心法可提取其来源微粒;激光共聚焦显微镜观察显示对照组细胞内荧光强度低,微粒刺激后细胞内荧光强度升高,且随着微粒浓度的升高,细胞内荧光强度也逐渐升高,加入尼膜同提前孵育可适度降低细胞内荧光强度,但仍高于对照组;流式细胞术检测显示:与对照组、尼膜同组比较,中、高浓度微粒处理组细胞内游离钙离子的荧光强度增加,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 星形胶质细胞来源的微粒可促进脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度升高,尼膜同可阻断其钙内流作用.
-
中等强度冲击波负压暴露对豚鼠耳蜗毛细胞游离钙浓度的影响
目的:观察实验性冲击波负压(BUP)暴露对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.方法:在激光共聚焦显微镜下,用钙敏荧光探针Fluo-3作为指示剂,观察豚鼠暴露中等强度实验性BUP后耳蜗外毛细胞[Ca2+]i的变化.结果:中等强度BUP暴露后8 h,至暴露后24 h和3 d稍有回落,但仍高于正常对照组.上述这些变化与听性脑干反应阈值的升高是一致的.结论:豚鼠暴露中等强度性BUP可引起耳蜗外毛细胞内[Ca2+]i的明显增高,且可能是听功能损害的主要原因之一.
-
Iloprost在实验性颅脑损伤中的保护作用
目的:研究Iloprost对大鼠创伤性脑损伤后神经记忆行为及突触体内[Ca2+]液度与脑含水量的影响.方法:液压冲击致伤装置制作大鼠脑创伤模型,爬杆回避箱测定动物的神经记忆行为,干湿重法测定脑组织含水量,Fura-2/AM荧光标记法测定突触体内[Ca2+]i,并采用Iloprost进行治疗,研究其对神经记忆行为、[Ca2+]i及脑水肿的影响.结果:创伤后动物会发生神经记忆行为的改变、脑组织水含量的增加及钙超载,Iloprost治疗后能改善动物的神经记忆行为,使[Ca2+]i明显下降,脑水肿明显减轻.结论:细胞内钙通道开放、钙离子超载在创伤性脑水肿的发生发展中起了重要作用,Iloprost对创伤性脑水肿有治疗和脑保护作用.
-
脊髓电压依赖性钙通道在病理性痛中的作用
胞内钙离子浓度的升高在神经系统的很多过程中都发挥重要的作用,例如递质在突触部位的释放,神经元兴奋性的调节以及突触可塑性和基因转录等过程.胞内钙离子浓度的升高主要有三条途径:其一,通过激活电压依赖性钙通道(Voltage-dependent calcium channels,VDCC,亦称Voltage-gated calcium channels,VGCC)使胞外钙离子进入细胞内;其二,通过激活通透钙离子的离子门控型受体如NMDA受体等,使胞外钙离子进入细胞内;其三,是通过激活细胞内内织网上的三磷酸肌醇(IP3)受体或ryanodine受体使胞内钙库中的游离钙离子进入胞浆内.
