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五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响
背景:华中五味子酮有强的抗氧化活性,可高效清除羟自由基和超氧阴离子,对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用.神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成,与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关.目的:探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经于细胞诱导分化成神经细胞的过程中对.Tau蛋白磷酸化的作用.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-07/2008-10在郑州大学医学实验中心完成.材料:自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只,五味子酮由河南省中医研究院药物所提供.方法:剪取新生APP转摹因小鼠尾尖,常规提取DNA,采用PCR法检测动物是否携带有APP基因,APP转基因阳性鼠记为"APP+",APP转基因阴性鼠记为"APP-".分别取APP+鼠和APP-鼠海马部位脑组织,体外分离培养神经干细胞,并将纯化的神经干细胞向神经细胞方向诱导分化.将从APP+鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP+细胞对照组,将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组.五味子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50 μmol/L的五味子酮溶液,余2组加入相同容积的PBS,培养24h.主要观察指标:免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP+、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平.结果:与APP+细胞对照组比较,五味子酮组细胞荧光强度减轻,Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低,且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显.APP-细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低.结论:在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中,五味于酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平,减轻神经元损伤,但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平.
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五味子酮衍生物的合成与抗氧化活性研究
目的 设计合成五味子酮衍生物,并测试其体内抗氧化活性.方法 采用酰化等方法合成了10个五味子酮衍生物,其中7个为首次报道,同时测试合成的化合物对小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)的影响,分析构效关系.结果 化合物2、3、5和8可明显提高SOD的活力,其中化合物2、3、5的作用明显优于五味子酮.结论 五味子酮衍生物具有良好的抗氧化活性.构效关系表明,五味子酮结构中1位的羰基和2位,3位的甲基不影响五味子酮的抗氧化活性.
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五味子酮对β淀粉样蛋白所致神经元应激损伤的保护作用
目的: 研究人工合成的β淀粉样蛋白β-AP25-35对原代培养的大鼠海马神经元内活性氧的影响以及五味子酮的保护作用.方法:原代培养7～9 d的大鼠海马神经元随机分为β-AP25-35处理组、五味子酮干预组和空白对照组3组,分别给予β-AP25-35(1 μmol/L)、β-AP25-35(1 μmol/L)+五味子酮(100 μmol/L)或仅予Neuro-basal+B27培养基.继续培养48 h后,测定并计算各组细胞内活性氧.结果:各组神经元内活性氧的含量为:β-AP25-35处理组(44.58±3.86) U/ml, 五味子酮干预组(15.70±2.13) U/ml, 空白对照组(5.46±1.58) U/ml.β-AP25-35处理组、五味子酮干预组两组神经元内活性氧的含量与空白对照组比较,均有明显升高(P＜0.01),β-AP25-35处理组活性氧含量又明显高于五味子酮干预组(P＜0.01).结论:β-AP25-35可以引起原代培养的大鼠海马神经元内的活性氧增加,五味子酮对此有部分阻断作用,对神经元有一定程度的保护作用.
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五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响
目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响.方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较.结果1 μmol/L Aβ25～35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P＜0.05);1 μmol/L Aβ25～35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P＜0.05),但较单纯Aβ25～35作用后明显下降(P＜0.05).结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用.
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五味子酮保护大鼠皮层神经元对抗氯胺酮损伤的实验研究
目的 研究五味子酮是否具有保护神经元免受氯胺酮损伤的作用.方法 原代培养的神经元分别加入不同浓度的氯胺酮、五味子酮后培养24 h,观察神经元形态特征和检测神经元存活率.结果 神经元经不同浓度氯胺酮处理后胞体立体感消失,颜色变暗,细胞轮廓不清,较高浓度氯胺酮组神经元轴突断裂,部分死亡.与对照组比较随着氯胺酮剂量的增加神经元存活率逐渐下降(P<0.05).20 μmol/L氯胺酮分别加入30、50、70 μmol/L五味子酮处理组神经元存活率明显高于20 μmol/L氯胺酮组(P<0.05),且70 μmol/L五味子酮组神经元存活率高于其他两组(P<0.05).结论 氯胺酮具有损伤体外培养神经元的作用且成剂量依赖性,五味子酮具有保护神经元免受氯胺酮损伤的作用.
