2002～2003年中国社区呼吸道感染常见病原菌的耐药性监测

目的调查2002～2003年中国社区呼吸道感染常见病原菌的耐药性.方法收集2002年4月～2003年4月全国5个地区5家医院社区呼吸道感染患者中分离的779株肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡它莫拉菌、A群β溶血链球菌及苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA);同时收集北京市两家幼儿园儿童鼻咽携带的185株肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及卡它莫拉菌.琼脂稀释法测定头孢丙烯等10种抗生素的低抑菌浓度(MICs).结果全国5个地区,青霉素中介的肺炎链球菌(PISP)为23.9%,青霉素耐药(PRSP)为22.7%.PISP发生率从高至低依次为杭州(44.1%)、武汉(26.2%)、沈阳(21.5%)、上海(20.8%)、北京(18.5%)、北京幼儿园(12.7%);而PRSP的排序则为北京幼儿园(34.9%)、上海(31.9%)、武汉(27.9%)、杭州(22.1%)、沈阳(13.8%)、北京(8.6%).肺炎链球菌对左氧氟沙星的敏感率为96.3%.9.5%的流感嗜血杆菌和87.4%的卡它莫拉菌产生β内酰胺酶,这两种菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢曲松、阿奇霉素、左氧氟沙星的敏感率在96.4%～100%之间.肺炎链球菌、A群β溶血链球菌、MSSA对阿奇霉素耐药率高于60%.头孢丙烯对PISP、A群β溶血链球菌、MSSA的MICs比头孢克洛低4～16倍.结论呼吸道病原菌特别是肺炎链球菌的耐药性在增加,革兰阳性球菌对大环内酯类的高耐药性值得关注,头孢丙烯对呼吸道病原菌的抗菌活性优于头孢克洛.

过氧化物酶体增殖活化受体γ对支气管哮喘豚鼠气道炎症的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖活化受体γ (PPAR-γ)和PPAR-γ配体激动剂罗格列酮对支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠气道炎症的影响及机制.方法 35只豚鼠按随机数字表法分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(DXM)组(C组)、罗格列酮组(D组)、罗格列酮 + 1/2 DXM用量组(E组),每组各7只.并测定各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数及分类,观察各组豚鼠支气管肺组织病理的改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测豚鼠肺组织中PPAR-γ、还氧化酶2(COX-2) 等的表达. 结果 D组豚鼠BALF中的嗜酸粒细胞数为0.050±0.020,B组为0.110±0.020,两组比较差异有显著性(t=5.61,P<0.001),D组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数分别为(15.5±3.9)×108/L、0.069±0.020, B组分别为(19.9±4.3)×108/L、0.076±0.020,两组比较差异无显著性(t值分别=2.02、0.66,P均>0.05); D组豚鼠气道壁厚度为(22.0±5.0)μm,B组为(28.0±5.0)μm,两组比较差异有显著性(t=2.61,P<0.05),但D组黏膜及黏膜下层厚度[(12.2±2.9)μm]与B组[(14.9±3.3)μm]比较差异无显著性(t=1.63,P>0.05);D组PPAR-γ mRNA的表达水平为19.5±3.0,分别与B组(18.1±3.1)和A组(15.6±2.9)比较, 差异无显著性(t分别为0.92、0.49,P均>0.05); B组COX-2 mRNA的表达水平为49±7,与D组(39±6)比较差异有显著性(t=2.77,P<0.05).结论罗格列酮通过激活PPAR-γ的活性减少哮喘豚鼠气道中的嗜酸粒细胞数、减轻气道壁增厚效应和抑制哮喘豚鼠支气管肺组织中COX-2的表达.PPAR-γ抗炎效应与其激动剂和(或)糖皮质激素的使用有关.

缺氧诱导因子1α调控血管内皮生长因子对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用

目的研究大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺血管壁缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的动态变化.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、缺氧3、7、14和21 d组,每组8只,测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI);原位杂交和免疫组化检测HIF-1α,VEGF基因表达.结果缺氧7 d后,mPAP开始上升[(18.41±0.37) mm Hg],与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),缺氧14 d达高水平并维持于此水平.肺血管重塑,RVHI改变在缺氧14 d后出现.HIF-1α蛋白在对照组表达不明显,各缺氧组肺血管内膜均为阳性;在中膜,HIF-1α蛋白缺氧3 d始增高(0.178±0.017),与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),缺氧7 d达高峰(0.221±0.021,P＜0.05),14 d和21 d下降;HIF-1α mRNA对照组,缺氧3 d和7 d组均不明显,缺氧14 d增高(0.203±0.024,P＜0.05),并维持于高水平.VEGF蛋白在缺氧7 d增高(0.074±0.022,P＜0.05),14 d达高峰(0.147±0.017,P＜0.05)并持续于高水平;VEGF mRNA对照组和缺氧3 d组不明显,缺氧7 d增高达高峰(0.138±0.010,P＜0.05),之后持续于高水平.VEGF mRNA于中膜和内膜、VEGF蛋白于内膜明显.相关分析表明,HIF-1α mRNA、VEGF、mPAP与血管重塑均相关(P＜0.01).HIF-1α蛋白(内膜)与VEGF mRNA、VEGF蛋白均呈正相关(P均＜0.01).结论 HIF-1α和VEGF均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用.HIF-1α蛋白可能以转录激活的形式上调VEGF基因,导致HPH的发生和发展.

四种结核分枝杆菌特异性抗原的克隆表达与血清鉴定

目的克隆结核分枝杆菌14 000、37 000、ESAT-6与mtb81抗原基因,于原核表达系统进行表达并纯化,测定抗原性与特异性.方法利用聚合酶链反应(PCR)自结核分枝杆菌基因组DNA扩增14 000、38 000、ESAT-6与mtb81抗原基因,经测序鉴定后克隆于pGEX 4T-1表达载体,转化于大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,利用亲和层析纯化表达产物,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其抗原性与特异性.结果携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性与特异性.其中38 000、14 000、ESAT-6及mtb81抗原的阳性检出率分别为54%、60%、44%及36%.4种抗原联用阳性检出率可达86%.结论 14 000、38 000、ESAT-6与mtb81重组抗原具备良好的抗原性与特异性,有望应用于结核分枝杆菌的临床诊断.

雷公藤红素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症的实验研究

目的观察雷公藤红素对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的抑制作用并探讨其作用机制.方法 30只BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、雷公藤红素治疗组(C组).B组及C组以10%卵蛋白(OVA)滴鼻复制哮喘模型,C组予以腹腔注射雷公藤红素(1 mg/kg)干预,观察肺组织病理学、支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中嗜酸粒细胞数目及肺组织干细胞因子(SCF)蛋白表达的变化.在体外实验中, 建立 C57B6 小鼠骨髓来源的肥大细胞与成纤维细胞系 NIH3T3 的共培养体系,并予雷公藤红素(2 μmol/L)干预,同时以单独培养的肥大细胞和NIH3T3细胞作对照;分别通过荧光测定法、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组化染色检测各组上清液组胺、嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)含量及NIH3T3细胞中SCF的表达.结果病理组织学显示,C组较B组小鼠肺组织炎性细胞浸润减少,C组BALF中的嗜酸粒细胞数为(0.56±0.03)×106/L,与B组[(1.25±0.40)×106/L ] 比较差异有显著性(P＜0.05);C组小鼠肺组织中SCF蛋白表达强度为 0.74±0.20, 与B组(2.50±0.19)比较差异有显著性(P＜0.01).体外共培养体系中,上清液组胺、eotaxin含量及NIH3T3细胞的SCF蛋白阳性表达率分别为(3.83±0.41)ng/ml、(5.79±0.40)ng/ml、(95±3)%;经雷公藤红素干预后,分别为(2.88±0.35)ng/ml、 (4.24±0.29)ng/ml、(17±5)%,与共培养体系比较,三者差异均有显著性 (P<0.01).结论雷公藤红素可减轻哮喘小鼠气道炎症反应,其机制可能是通过下调成纤维细胞产生SCF,抑制肥大细胞产生组胺和eotaxin.

钠-氢交换蛋白1反义表达载体对人肺腺癌细胞钠-氢交换蛋白1基因表达的影响及其意义

目的探讨Na+/H+交换蛋白1(NHE-1)反义表达载体(pNHE-1)对人肺癌细胞NHE-1基因的抑制作用及生物学效应.方法实验细胞分为3组, A549- pNHE-1组(反义组)、A549空载体组(空载体组)、A549对照组(A549组).采用阳离子脂质体使pNHE-1转染人肺腺癌A549细胞株.采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定3组细胞的NHE-1 mRNA表达水平;用荧光法测定3组细胞内pH(pHi)值;了解转染细胞增殖生长状况;用细胞凋亡原位检测法检测3组细胞凋亡率.结果在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段,证明转染成功.半定量RT-PCR法证实反义组细胞的NHE-1 mRNA表达水平(0.42±0.06)显著低于A549组(0.71±0.08,P＜0.01)和空载体组(0.69±0.16,P＜0.01).A549组细胞在培养12、24和48 h后pHi值分别为7.150±0.004、7.140±0.007和7.120±0.008,反义组pHi值分别为6.990±0.005、6.840±0.005和6.750±0.005,两组差异均有极显著性(P<0.01).A549组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为3.20、3.28和4.97 d,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A549组及空载体组(P＜0.01).反义组细胞凋亡率为(24.50±3.62)%,显著高于A549组的(1.50±0.55)%和空载体组的(2.20±0.75)%(均P＜0.01).结论 pNHE-1可成功转染到A549细胞基因组中,并可抑制转染细胞NHE-1 mRNA的表达,通过降低Na+/H+交换活性,使肿瘤细胞pHi明显降低、细胞增殖生长速度明显减慢、凋亡率显著增高.

肾移植受者卡氏肺囊虫肺炎的肺泡损伤

目的通过观察肾移植后卡氏肺囊虫肺炎(PCP)患者的肺泡超微结构改变,探讨其与病原学的关系.方法对可疑PCP的肾移植受者,进行支气管肺泡灌洗(BAL)和(或)经支气管肺组织活检(TBLB),以发现卡氏肺囊虫为确诊依据,通过光镜和电镜下的观察,结合其临床特点,分析病原体与宿主肺泡病理反应的关系.结果确诊PCP 23例,发病距肾移植时间平均5.6个月,发病至就诊时间平均5.5 d;临床以发热、呼吸困难为主要症状,胸部CT表现为两肺弥漫性肺间质及肺泡改变.通过BAL检查发现卡氏肺囊虫者18例,通过TBLB电镜检查发现卡氏肺囊虫者14例,虫体以滋养体与包囊两种形式存在.肺组织光、电镜检查:可见Ⅰ型上皮细胞变性、Ⅱ型细胞增生、Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞脱落、上皮细胞脱落后其下的基底膜暴露于肺泡腔等;肺间质及肺泡内出现少量炎症细胞;肺泡腔内见少量蛋白样物质渗出,部分可见空泡样细胞及泡沫样组织;肺间质中可见不同程度胶原纤维增生,肺泡间隔增宽.结论肾移植后PCP患者存在明显的肺泡损伤,以肺泡内渗出、炎症细胞浸润、上皮细胞受损及间质纤维组织增生为特征,为其发病的主要病理基础.

医务人员高暴露人群严重急性呼吸综合征隐性感染与工作强度和工种的相关性研究

目的了解密切接触严重急性呼吸综合征(SARS)患者的医护人员隐性感染的发生情况,及其与工作强度和工种之间的关系.方法对北京中日友好医院密切接触SARS患者的1 127名医务人员和92名对照者的血清进行冠状病毒抗体(IgG 、IgM)酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测.并调查抗体阳性者周围密切接触者313名的临床表现.结果 1 127名SARS病区工作的医务人员:男287名,女840名;年龄21～55岁,平均年龄(34±9)岁.对照组和医务人员上岗前所测冠状病毒抗体均为阴性,上岗后冠状病毒抗体阳性者共29名,阳性率2.57%(29/1 127).特异性抗体的阳性率与工种和病区的关系结果提示:抗体阳性的护士21名,抗体阳性率占护士上岗人数的3.46%(21/607);医师、医技人员6名,阳性率占其上岗人数的1.41%(6/426);督导2名,阳性率占其上岗人数的2.86%(2/70).ICU病区的130名工作人员中抗体阳性者10名,阳性率为7.69%(10/130),占29名抗体阳性者的34.5%(10/29);其他病区人员19名,占65.5%(19/29).29名抗体阳性医务人员的周围密切接触者313名,无一名发病或有临床症状.结论密切接触SARS患者的医护人员有隐性感染的发生,隐性感染者从流行病学意义上讲可能不具有传染性.ICU病区医务人员、护理工作者隐性感染的发生率较其他医务人员高.

卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究

目的在卡介苗中建立基因敲除技术.方法通过分别设计两对引物,将靶基因[DNA结合蛋白1(MDP1)基因]通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增得到2个片段,分别插入pKO质粒中,构建得到基因敲除质粒pKO-MDP1,电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换,筛选出敲除菌株,并测其生长曲线.结果通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的、并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株,对敲除菌株与原代菌株每12 h测定其菌液的600 nm处吸光度(A600)值,连续16 d.两者的生长速度曲线呈现"S"形,两者之间的生长速度未见明显差别.结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体,MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一,但不是惟一的因素.

258例严重急性呼吸综合征康复期患者肺功能与影像学动态随访与分析

目的通过对严重急性呼吸综合征(SARS)康复期患者进行定期临床随访,动态观察肺功能和肺部影像学的变化,了解SARS疾病的特点及预后.方法 258例SARS患者康复后2个月内先后2次以上进行SARS冠状病毒特异性IgG 抗体、肺功能和肺部影像学检查,并就发病期间的治疗情况进行回顾性分析.结果 258例中有208例SARS冠状病毒特异性IgG抗体为阳性(80.6%),53例合并有肺一氧化碳弥散量(DLCO)异常.IgG抗体阳性并DLCO异常的SARS康复者与DLCO正常的SARS康复者和IgG抗体阴性的康复者比较,发热病程较长,应用糖皮质激素剂量、接受氧疗比例和无创通气比例均较高.51例DLCO异常的康复者动态肺功能复查结果,有41例(80.4%)患者DLCO得到改善.51例中有40例肺部影像学检查有肺纤维化改变,1个月后再次复查有22例(55%)有好转.结论 SARS康复者肺纤维化改变多发生在病情较重者,并在康复后一定时期内能够部分自行吸收,而肺部影像学改善要慢于肺弥散功能.

非小细胞肺癌中p14ARF杂合性缺失的研究

p14ARF基因是新近发现的候选抑癌基因,在肿瘤发生发展过程中具有重要作用.我们应用免疫组织化学和聚合酶链反应-聚丙烯酰胺电泳(PCR-PAGE)方法,对非小细胞肺癌(NSCLC)中p14ARF基因的杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)和蛋白表达情况进行了研究.

检测胸腔积液与血清组织多肽特异性抗原比值的意义

肺癌和肺结核是引起胸腔积液的两大病因,在原发病灶不清楚的情况下,胸腔积液良恶性的鉴别对病因诊断具有指导作用,目前除细胞学和常规检查外,鉴别肺癌胸腔积液和结核性胸腔积液的方法较少.我们测定了非小细胞肺癌(NSCLC)和结核性胸腔积液患者血清和胸腔积液中组织多肽特异性抗原(TPS)的水平,以探讨胸腔积液与血清TPS比值在鉴别两种胸腔积液中的价值.

肺癌组织中树突状细胞浸润的意义

目前已经清楚,由树突状细胞(dendritic cells,DCs)等抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APCs)所激活的T细胞介导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)反应,在机体抗肿瘤中起着主导作用[1].诸多研究表明,DCs作为体内功能强的一类专职APCs,与肿瘤的发生、发展及预后有着密切的关系.为此,我们观察了肺癌组织中DCs的浸润情况并探讨其在临床上的应用价值.

结核病易感性相关基因研究进展

结核病是单一感染因素引起死亡人数多的疾病.然而,在感染人群中仅十分之一发病,提示个体差异可能与结核病易感性相关.从20世纪70年代起,通过以家族研究为基础的连锁分析(linkage analysis)和以病例-对照研究为基础的相关分析(association analysis),取得了令人信服的证据,即个体对结核病易感性的差异部分是由宿主基因决定的.

重症监护病房肺部真菌感染的诊断与治疗

重症监护病房(ICU)患者占医院住院患者的8%～15%,与普通病房患者比较,发生院内感染的概率明显增加,并且增加致残率和病死率,造成巨大的经济负担.真菌感染发病率逐渐增加,占院内感染的10%～15%[1].存在真菌血症的患者50%以上直接死于感染或基础疾病.由于真菌感染症状的非特异性和临床表现的多变性,给诊断带来很大困难,肺部真菌感染的诊断更为困难,这方面的研究较少,何时开始抗真菌治疗亦存在很大分歧.我们就ICU中肺部真菌感染的诊断与治疗作一综述如下.

社区获得性铜绿假单胞菌肺炎二例

健康人患社区获得性铜绿假单胞菌肺炎(PCAP)少见,自1968年以来英文版文献仅有12例报道,此病预后差、病死率高[1].笔者经治2例,报道如下.

全国肺部感染·呼吸衰竭·SARS学术会议纪要(感染部分)

2003年10月9～14日在天津市召开了全国肺部感染·呼吸衰竭·SARS学术会议.与会代表达1 200余人.收到感染方面的论文217篇,专题报告16篇;SARS方面的论文84篇,专题报告4篇.并有多名国内外学者做了精彩的专题报告.

第十三届欧洲呼吸学会年会简介

第13届欧洲呼吸学会(ERS)年会于2003年9月27日～10月1日在奥地利首都维也纳召开,与会人数13 000名.大会收到论文超过5 000篇.以支气管哮喘(简称哮喘)及慢性阻塞性肺疾病(COPD)的研究为多.

第91例--疑似左前中纵隔肿块、心包积液、双侧胸腔积液

病历摘要患者男性,28岁,于2002年4月起无明显诱因出现左前上胸部持续性隐痛,伴局部皮肤瘙痒、色泽变深,无咳嗽、咳痰、咯血及发热.5月11日胸片示:主动脉弓左缘小片密度增高影,曾在多家医院抗炎治疗无效.8月19日因胸痛加剧、活动后心慌,再次摄胸片示:阴影明显增大,于当日因左纵隔旁肿块性质待查入院.患者既往身体健康,无基础性疾病史.大学毕业后近5年均在某大城市从事办公室工作,无特殊嗜好,否认不良生活习性史,也无特殊接触史.

深入开展肺部感染研究--访北京大学第三临床学院赵鸣武教授

上海市可曲性支气管镜应用情况调查

可曲性支气管镜包括纤维支气管镜(纤支镜)和电子支气管镜,是呼吸系统疾病介入诊断和治疗的重要工具[1].为进一步了解上海市可曲性支气管镜应用情况,我们于2002年2月～2002年4月通过信函方式,对全市三级、二级医院的情况进行了问卷调查.