药物生物技术杂志
Chinese Journal Of Pharmaceutical Biotechnology 약물생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-8915
- 国内刊号： 32-1488/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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肝癌抗原肽SLIVHLNEV免疫原性研究
肿瘤细胞抗原肽SLIVHLNEV可以与MHC-I类分子结合,由T细胞表位识别,激活细胞毒性T细胞(CTL),为肝癌免疫治疗开辟了新领域.文章通过软件DNAstar-protean与Syfpeithi分析,确定抗原肽的抗原表位.然后抗原肽刺激树突细胞,通过检测CD80,CD86的表达,观察抗原肽诱导树突细胞成熟的情况.将负载抗原肽的树突细胞与T细胞的混合淋巴细胞反应(MLR),MTT检测T细胞增殖的情况,确定佳抗原肽浓度与佳刺效比.以佳抗原肽浓度与佳刺效比刺激T淋巴细胞分化,测定T细胞表面CD8、CD4表达情况.结果表明抗原肽SLIVHLNEV不含B淋巴细胞抗原表位,而为HLA_A*02∶01型T淋巴细胞表位抗原,并可以刺激H2-Db表位,经树突细胞(APC)递呈,刺激T细胞分化为CTL,发挥细胞免疫作用.
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姜黄素二癸酸酯的制备及长效性研究
制备姜黄素二癸酸酯,并对其药理长效性进行研究.姜黄素与癸酰氯发生酯化后形成姜黄素二癸酸酯(Curcumin didecanoate,CDD),将CDD或姜黄素注射到小鼠和大鼠体内,测定小鼠和大鼠血浆中姜黄素含量,检测时量效应;利用5-HTP诱导甩头实验,检测CDD的抗抑郁作用的长效性.结果显示一次性注射CDD(184 mg/kg),小鼠及大鼠的姜黄素有效血药浓度可以持续至少14 d.与姜黄素相比,CDD具有明显的长效特点;5-HTP诱导甩头实验,显示其具有抗抑郁作用.
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基于AAV-ITR的基因表达微载体
常用的基因治疗表达载体有病毒表达载体和质粒表达载体,这两类传统基因治疗载体含有大量病毒或细菌DNA序列,会引发人体较严重的免疫反应、细胞炎症、细胞毒性副作用、以及基因表达沉默化,是基因治疗应用于人类疾病治疗的一大障碍.项目构建了一种新型的、基于腺相关病毒(AAV)倒置末端重复序列(ITR)的基因表达单链微载体(AAV-ITR mini vector),并用GFP基因作为报告基因.通过热变性的方法制备单链DNA,然后将带有GFP的质粒、双链DNA载体、AAV-ITR基因表达微载体转入真核表达细胞,采用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测等较为简单的方法来检测其表达效率.实验结果显示,AAV-ITR基因表达微载体在293T细胞中具有较高的转染、表达效率,并且具有类似AAV病毒载体的特性.该研究结果将有助于进一步研发类似于AAV病毒载体的安全、无免疫原性的人造基因治疗载体.
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肌肉型乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞中的表达
建立肌肉型乙酰胆碱受体(胎儿型α1β1δγ和成年型α1β1δε)在非洲爪蟾卵母细胞中的表达模型,用于以这两种受体为靶点的药物筛选.将肌肉型乙酰胆碱受体的各个亚基基因在体外转录获得各自的cRNA,显微注射到非洲爪蟾卵母细胞中,利用双电极电压钳技术检测其表达情况,并确定不同浓度的乙酰胆碱对胎儿型α1β1δγ和成年型α1β1δε受体电流表达情况的影响.在卵母细胞中成功表达两种肌肉型乙酰胆碱受体;当乙酰胆碱浓度为1 μmol/L时,α1β1δγ和α1β1δ￡受体电流很小,不能用于后续的检测试验,当浓度为5μmol/L时,完全激活α1β1δγ受体的开放电流达到大6025 nA,当浓度为20μmol/L时,完全激活α1β1δε受体的开放电流达到大2 742 nA,只注射ddH2O的对照组细胞则没有任何电流产生.该受体模型的成功建立,为筛选作用于肌肉型乙酰胆碱受体的药物提供了实验模型.
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短葶山麦冬皂苷C的细胞内分布研究
制备纯化短葶山麦冬皂苷C(DT-13)单克隆抗体,选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人宫颈癌细胞(HeLa)为研究对象,通过MTT法筛选给药浓度,以细胞免疫荧光定位法探索DT-13在细胞内的作用分布和蓄积情况及其特点.结果显示,在对细胞无显著毒性作用的DT-13浓度下,DT-13能迅速透过细胞膜进入胞浆,逐渐进入细胞核并长时间蓄积.DT-13(5.0 μmol/L)在给药30 min前主要分布于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞的胞浆,给药12 h后主要蓄积于细胞核内且持续时间可达24 h.而对人宫颈癌细胞(HeLa),与HUVEC细胞相比,DT-13(2.5 μmol/L)能更快进入并蓄积于细胞核.提示DT-13可能通过作用于细胞核而发挥其主要的生物活性.该方法能直观、可靠、便捷地观察DT-13在细胞内的定位及动态变化,为中药皂苷类活性成分的药效及作用机理研究提供新的技术方法.
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肿瘤细胞裂解物疫苗与其修饰的树突状细胞联合抗A20鼠淋巴瘤的作用
将A20淋巴瘤细胞,反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物的抗原肽,以来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407-426,M)的两段串联重复序列M2小肽为佐剂,通过双功能偶联试剂戊二醛偶联制备肿瘤细胞疫苗A20-M2,偶联产物在体外修饰未成熟的DC,通过检测负载肿瘤细胞抗原的DC细胞分泌的细胞因子以及抗原来确定被修饰DC细胞的成熟度,获得成熟DC即获得DC疫苗.用A20-M2与DC两种疫苗联合给药治疗小鼠,实验结果显示,激发的免疫应答对于A20肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低(P＜0.01),通过ELISA法,从小鼠血清中检测到高滴度抗细胞裂解物类抗体,淋巴细胞增殖试验显示疫苗联合给药后能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖反应.A20-M2能够有效的刺激DC细胞成熟,A20-M2与成熟DC细胞联合给药能够有效的抑制小鼠A20淋巴瘤的生长.
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硫酸氨基葡萄糖氯化钾对IL-1β诱导的兔软骨细胞的作用
采用原代培养的兔关节软骨细胞,检测硫酸氨基葡萄糖氯化钾对IL-1β诱导造成的炎性反应的保护作用.加入0.2,2,20 μmol/L硫酸氨基葡萄糖氯化钾及10 ng/mL IL-1β 48 h后,测定蛋白聚糖酶(Aggrecanase-1,-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达量的变化.结果表明,硫酸氨基葡萄糖氯化钾对于兔软骨细胞无明显增殖和细胞毒作用.对于IL-1β诱导的软骨细胞,硫酸氨基葡萄糖氯化钾可抑制其聚蛋白聚糖酶Aggrecanase mRNA表达量,并可抑制NO释放以及iNOS mRNA表达,与IL-1β模型组相比有极显著差异.硫酸氨基葡萄糖氯化钾保护骨性关节炎的机制与可显著抑制由白介素类炎性因子导致的炎性反应相关.
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枯草芽孢杆菌发酵产物CLPs抗肿瘤活性研究
由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵并分离纯化得到环脂肽(CLPs),研究其对肿瘤细胞MCF-7和正常细胞HELF的细胞毒作用,探索CLPs对LDH释放的影响,并用流式细胞仪检测CLPs对MCF-7细胞凋亡的影响.采用MTT法检测CLPs对肿瘤细胞和正常细胞的细胞毒性,LDH试剂盒检测对LDH释放的影响,Annexin-V/PI染色观察CLPs对肿瘤细胞凋亡的影响.CLPs对肿瘤细胞MCF-7有细胞毒性,CLPs作用24 h时抑制率可达88％,CLPs对正常HELF细胞无细胞毒性;CLPs导致MCF-7细胞LDH释放,CLPs质量浓度100 μg/mL,作用24h时,LDH释放率由5.10％增加到31.67％,CLPs对HELF细胞LDH没有影响;CLPs能导致MCF-7细胞发生凋亡.CLPs能选择性作用于MCF-7细胞,增加MCF-7细胞LDH释放,并导致MCF-7细胞发生凋亡.
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重组人白介素21的原核表达与体外活性研究的优化
为了构建重组人白介素21(rhIL-21)原核稳定表达和体外活性检测系统,采用Overlap-PCR法合成目的基因;经双酶切整合至pET28,化学转化法转入大肠杆菌BL21(DE3)构建pET-28a-rhIL-21 BL21 (DE3)原核表达系统;胞内表达的包涵体经镍亲和层析色谱柱纯化后,尿素缓冲液梯度透析复性,终溶于PBS缓冲液;双抗体夹心法ELISA、Western blotting检测复性蛋白的生物活性;细胞增殖抑制试验(MTT法)研究rhIL-21对Jurkat细胞株和HuT102细胞株的作用.实验成功建立了rhIL-21表达纯化与活性评价体系,为进一步研究IL-21的促免疫性疾病发展和抗肿瘤活性奠定了基础.
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灵杆菌脂多糖的微波辅助提取研究
研究采用微波辅助法提取灵杆菌脂多糖的工艺.在比较灵杆菌脂多糖的传统提取方法与微波辅助提取法的基础上,采用单因素试验分别考察微波处理时间、微波处理功率、固液比、浸提时间对灵杆菌脂多糖提取效果的影响,并通过L9(34)正交试验,优化微波辅助提取BP-LPS的工艺参数.结果表明,微波辅助提取灵杆菌脂多糖的佳工艺条件为:提取固液比1∶30,微波处理3 min,功率250 W,浸提60 min.在此条件下,灵杆菌脂多糖提取量高达13.413 mg/g,相比传统提取方法提高99.4％,证明微波辅助提取是一种简便、高效的提取方法.
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酿酒酵母发酵制备RNA的研究
核糖核酸(RNA)是一类重要的生物大分子,在基因表达和蛋白质生物合成中起关键作用,其降解产物核苷酸可用于食品和医药中间体.目前,通常以解脂假丝酵母作为RNA的高产菌株,缺点是其属于致病菌.大量应用于食品工业的酿酒酵母虽然无致病性,但其RNA含量仅为细胞干重的3.0％左右.该研究采用硫酸二乙酯(DES)化学诱变,利用氯化钾敏感性筛选,以期提高酿酒酵母CGMCC NO.2448产RNA的含量.实验从100株突变株中筛选出一株高RNA含量、生长良好的酿酒酵母Y78,细胞质量浓度和RNA质量分数分别为4.5 g/L和5.02％.分批发酵时,在对数生长期,突变株Y78的RNA质量分数高于原始菌株,8h达到大为5.18％,是原始菌株RNA质量分数4.16％的1.25倍.相比原始菌株,Y78对葡萄糖的利用未见明显差异.以0.3,0.4,0.5,0.6h-1的稀释率流加培养基进行连续培养,RNA质量分数高达到6.04％,相比出发菌株,RNA质量分数提高了50.2％.由此表明通过化学处理及发酵工艺优化,提高酿酒酵母中RNA的含量,有利于工业生产RNA.
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一株海洋放线菌次级代谢产物抗真菌活性的研究
随着真菌感染的发病率及抗药性的逐年上升,筛选新的抗真菌活性物质已成为临床治疗系统性真菌感染的迫切需要.以双层琼脂扩散法测定抗真菌活性,研究10株海洋放线菌的发酵液及其菌体甲醇提取液对白色念珠菌的抑制作用.结果筛选到一株胞内含有抗真菌活性物质的海洋放线菌Actinomycete A9,经10 L发酵罐发酵,将菌体甲醇提取物及发酵液乙酸乙酯萃取液浓缩合并,利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析Sephadex LH-20等分离纯化手段,终获得1 mg浅黄色针状晶体的单一化合物,纯度为99.9％.同时,以ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖为模型,发现Actinomycete A9经硅胶柱层析分离后的抗真菌组分(10 μg/mL)能够抑制ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖,表明海洋放线菌Actinomycete A9的胞内活性物质具有抗真菌及免疫抑制活性,为后续研究奠定了基础.
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硫酸糖肽制备工艺研究
硫酸糖肽作为一种细胞保护因子,能显著抑制胃蛋白酶活性,适用于治疗胃、十二指肠溃疡和胃炎.文章在氯磺酸-吡啶法硫酸酯化多糖的基础上,通过优化酯化条件,建立了硫酸糖肽制备方法及检测方法,实验以肠多糖为原料,采用氯磺酸与吡啶(体积比为1∶5)反应制备酯化试剂,在70℃下,酯化反应5h,再通过有机溶媒和透析等提纯方法制得硫酸糖肽,产品经电泳鉴定分析、硫含量等指标测定,均达到现有的硫酸糖肽标准品的质量指标.
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14-3-3基因在大鼠肝再生过程中的表达变化及意义
14-3-3蛋白是一组高度保守的酸性蛋白家族,参与调节细胞代谢,蛋白转运,信号转导,凋亡以及细胞周期等重要生理过程.为进一步研究14-3-3蛋白在大鼠肝再生过程中的作用,建立了大鼠2/3肝切除模型,利用荧光实时定量RT-PCR技术检测了14-3-3基因不同亚型在大鼠肝再生过程中的表达变化规律.结果表明,与SH组相比,14-3-3 β和ξ在肝脏部分切除后的第120 h出现一个明显的表达峰,mRNA水平分别比SH组提高了2.1和8.7倍.14-3-3γ,θ,σ和η的表达高峰出现在肝脏部分切除后168 h,与SH组相比,14-3-3 γ,θ,σ和η的mRNA水平分别提高了21.3,2.4,1.3和1.6倍.14-3-3￡的mRNA表达量在肝脏部分切除后12,24和48 h分别上升至SH组的2.6,2.4和1.7倍,至切除后第72 h,14-3-3 ε mRNA量恢复至SH对照组的水平.上述结果表明,14-3-3 ε可能促进肝细胞的增殖,而14-3-3σ,η,β,ξ,γ和θ可能参与肝再生终止的调节.
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PEG化rhG-CSF的修饰位点识别研究
研究聚乙二醇(PEG)修饰的重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)上PEG的偶联位点识别方法.采用聚乙二醇单甲醚琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC 5k)修饰rhG-CSF,利用凝胶过滤法对PEG-rhG-CSF进行分离;采用质谱分析结合胰蛋白酶和糜蛋白酶降解法以及氨基酸组成分析法等技术,研究PEG-rhG-CSF上PEG偶联位点识别方法.胰蛋白酶降解法结合质谱分析结果表明PEG-rhG-CSF酶解产物中N末端多肽T1PLGPASSLPQSFLLK16的残留量为4％,多肽C17LEQVR21的残留量为96％,表明96％的修饰位点发生在N末端的苏氨酸上,4％的修饰位点发生在16位的赖氨酸上,实验采用糜蛋白酶降解法和氨基酸组成分析法进一步测定了PEG修饰位点以及不同修饰位点的比例,与基于胰酶降解和质谱分析法获得的偶联位点结果一致.结论:采用多种方法对PEG-rhG-CSF上PEG偶联位点进行了识别.胰蛋白酶降解法无需对不同修饰位点的PEG-rhG-CSF进行分离,通过多肽含量变化可获得识别修饰位点及比例,HPLC分析过程中多肽分离度对定量结果有影响.胰蛋白酶降解法结合糜蛋白酶降解法直接获得PEG偶联位点信息,但糜蛋白酶降解位点较多,影响方法的通用性.反相色谱法或基于氨基酸组成分析的方法操作过程简单,但准确度较低.
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人白介素24(IL-24)的表达与纯化及其初步活性评价
原核表达IL-24蛋白并获取高纯度目的蛋白.选择大肠杆菌作为宿主菌,将已构建的重组表达质粒pET21a(+)/IL-24转化人大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得重组表达IL-24的工程菌.通过对工程菌进行5L发酵罐高密度发酵培养,获取目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定.目的蛋白通过阴、阳离子交换层析联用进行纯化.高密度发酵后单位体积目的蛋白的表达量高达l 800 mg/L.经阴、阳离子交换层析联用纯化后的回收率达20％,纯度达到95％.获得高纯度IL-24,为进一步研究其生物学活性及临床价值奠定了基础.
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核酸适配体在肿瘤诊断与治疗中的研究进展
核酸适配体(aptamer)又称核酸适配子,是利用指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichrnent,SELEX)通过随机寡核苷酸文库与靶物质结合,经过多轮的筛选和扩增,得到的单链DNA或RNA,具有高亲和力,能特异性地结合靶物质.由于核酸适配体具有靶标分子范围广,自身分子质量小,对靶物质有高亲和力、特异性等特点,得到了研究者的广泛关注,逐渐应用于分析化学、蛋白质组学等学科,涉及到的技术手段有生物传感器、生物芯片等.适配体作为一种新型的药物分子在肿瘤领域应用研究也逐渐增多,在肿瘤诊断和治疗上起到了重要的作用.文章总结了近年来肿瘤相关因子的核酸适配体在肿瘤诊断与治疗中的研究情况.
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碳青霉烯耐药菌的耐药机制研究进展
碳青霉烯类抗生素自一出现就表现出较广的抗菌谱和较强的抗菌活性,由于其对β-内酰胺酶稳定,引起研究人员广泛的关注,至今对该化合物的研究已取得了很大的进展.文章主要从产β-内酰胺酶、膜通透性降低、主动外排泵的亢进以及作用靶位的改变等4个方面讨论了碳青霉烯类耐药菌的耐药机制.碳青霉烯类抗生素在临床上应用广泛,该类化合物的耐药细菌也越来越多.在复杂的耐药机制背景下,探索相关耐药机制将有助于加速发现更有效的化合物.
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分子标记技术在铁皮石斛中的应用
兰科石斛属植物铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),国家濒危珍惜中药材,具有卓越的药用价值.该文在系统的文献调研基础上,首次对分子标记技术在铁皮石斛中的应用进行了归纳与总结.据统计,自2000年以后,该植物中分子标记技术的应用报道主要集中于RAPD/SSR/ISSR/ETS/SNP等标记技术.上述技术在铁皮石斛种质鉴定和亲缘关系分析中有重要应用,对深入研究铁皮石斛有重要意义.通过文章的总结,期望使该技术能被更好地研究与利用.
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Nrf2在炎症相关疾病中的保护作用
Nrf2(Nuclear factor-erythroid 2-rdated factor-2)在细胞受到氧化物或亲电子攻击时会及时诱导抗氧化,Ⅱ相解毒酶和相关应激反应蛋白的产生,起到重要的细胞保护作用,是一个关键又重要的转录因子.近来研究表明Nrf2/ARE信号通路也参与抑制炎症相关疾病,如自身免疫疾病、风湿类关节炎、哮喘、肺气肿、胃炎、结肠炎和动脉粥样硬化等.扰乱Nrf2信号不仅会增加机体对氧化物,电子攻击的敏感性,还会加重炎症组织的损伤.在炎症介导的组织损伤早期,Nrf2/ARE的激活可能会抑制促炎介质的产生及表达,包括细胞因子,炎症趋化因子,细胞粘附因子,基质金属蛋白酶,环氧化酶2(COX-2),诱导性一氧化氮合酶(iNOS).与此同时,Nrf2介导的具有细胞保护能力的下游基因会参与调节先天免疫应答,同时抑制促炎基因的表达.该综述强调Nrf2在炎症相关疾病中的保护作用,侧重此转录因子对炎症信号的调节.
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环境非生物因子对植物次生代谢产物合成的影响
次生代谢产物是药物筛选中重要的先导化合物来源,天然来源的活性天然产物在药物研发中遇到的主要问题是“药源”,如何提高目标次生代谢产物的生物合成效率是天然产物研发中必然要考虑的问题.环境因子对植物基因的表达,尤其是次生代谢途径相关基因的表达具有重要的影响,从而影响次生代谢产物的合成与积累.该文概述了盐度、温度、紫外辐射和干旱等环境非生物因子对植物次生代谢产物生物合成的影响.通过研究环境因子与次生代谢产物合成的关系,试图为提高目标次生代谢产物含量提供新的研究途径.
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2型糖尿病治疗药物作用靶点的研究进展
糖尿病是一种受遗传和环境影响的多因素内分泌疾病,主要表现为以高血糖、高血脂和胰岛素抵抗为特征的代谢紊乱,其中90％～95％为2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病).2型糖尿病严重危害人类健康,发病机制较为复杂,与多种酶和受体失调有着密切关联,如葡萄糖代谢中的关键酶α-葡萄糖苷酶、醛糖还原酶、葡萄糖激酶等,胰岛素信号通路中的酶及转录因子如糖原合酶激酶-3、核转录因子-κB等,与胰岛素分泌相关的钙通道和ATP敏感性钾通道、与胰岛素增敏相关的过氧化物酶增殖体激活受体等.因此,对糖尿病相关治疗药物作用靶点的研究,已经成为医药界的研究热点.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 02 03 04 |
