蚓激酶的临床应用进展

综述了蚓激酶的近期临床应用进展,多用于心脑血管疾病;由于蚓激酶可改善血液流变学,降低血小板聚集率,故还可用于与血液流变学改变相关的疾病中,如美尼尔病、突发性耳聋等.

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因工程疫苗的研究进展

在乙肝病毒(HBV)的结构蛋白中,与疫苗有关的主要是HBsAg.HBsAg基因已在不同的生物体系中获得成功的表达,其基因工程疫苗的研究也取得了长足的进展,酵母重组乙肝疫苗和CHO细胞重组乙肝疫苗已逐步取代血源性乙肝疫苗而被广泛使用.

重组肿瘤坏死因子在小鼠体内的分布和代谢

用125I标记重组的肿瘤坏死因子(rTNFα),作小鼠体内示踪实验,观察其体内分布、代谢和排泄过程.小鼠药代动力学研究结果表明,iv后消除相半衰期约7h,AUC与剂量呈线性关系.im后生物利用度为29%,峰浓度出现于给药后2h.分布实验测定iv后各时间每克湿组织中所含rTNFα的浓度,在给药后,骨髓中浓度与血浆中相等且并行下降,脾、肺、肾中的浓度与血液中相近,0.5h前以肝内浓度高,但胃中浓度在给药后2～8h达高峰,为血浆中浓度的5倍,远高于其它组织,小肠中浓度也随后略有升高,但低于胃,高于其他组织.血浆电泳发现有2个主要放射峰,一为原形药物,另一为分子量较大的代谢产物.该代谢物占的比例在15min时为29%,到4h升至63%,而原形药物从15 min时的39%降至23%.血中低分子代谢产物很少,但在尿样中75%以上为低分子量代谢产物.小鼠静注rTNFα后,24h尿粪总排出为给药剂量的87%.

LZ-8基因在大肠杆菌中的表达

根据Murasugi等人发表的LZ-8基因的DNA序列,设计了两条引物,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ-8基因(356bp).利用此基因及pET-3d质粒,构建了该基因的原核表达载体质粒,进一步将其转化进大肠杆菌HB101菌株中获得了表达该基因的基因工程菌株,并对IPTG诱导后的LZ-8蛋白进行了初步的SDSPAGE分析.

含芳香酰基的磷脂酰胆碱的酶促水解

3种含芳香酰基的磷脂酰胆碱(PC)被磷脂酶A2(PLA2)和磷脂酶D(PLD)水解以制备相应的溶血磷脂和磷脂酸.两个酰基均为芳香酰基的PC能被Naja mossambica mossambica PLA2水解,但不能被猪胰PLA2水解;花生PLD、Streptomyces chromofuscus PLD能水解仅含一个芳香酰基(sn-1或sn-2位)的PC,但不能水解含两个芳香酰基的PC.这些结果表明酶的来源和酰基的结构对甘油磷脂的酶促水解反应有很大的影响.

青蒿素类化合物及其转化产物体外活性筛选方法的探讨

寻找一种青蒿素类化合物新型、快速的体外活性筛选方法.针对青蒿素类化合物抗疟活性的作用机制为产生活性氧的特点,采用比色法和化学发光法分析比较了该类化合物活性氧的释放量.在pH10.2条件下用比色法测得的各化合物所释放的活性氧量无明显差别,在pH7.4条件下该类化合物不能产生活性氧.化合物和氯化血红素结合后可放出活性氧,用化学发光法测得化合物释放的活性氧量有明显区别.结果表明用化学发光法测定该类化合物与hemin结合后活性氧释放量是一种与该类药物体内活性机制相一致的活性分析新方法.

麦芽根在核酸水解中的应用研究

研究麦芽根中酸性磷酸单酯酶,5'-磷酸二酯酶及核酸水解酶的酶学特性,以5'核苷酸和核酸水解率为指标,初步确定了核糖核酸(RNA)在麦芽根作用下水解为单核苷酸的适条件:温度、PH值、时间及RNA与麦芽根用量比等.

人胎盘TRAIL基因的克隆和在大肠杆菌中的表达

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了可溶性TRAIL(凋亡素配体2)基因片段.序列分析表明该基因序列与国外发表的可溶性TRAIL基因片段的序列完全相同.将该基因片段插入到含T7启动子的质粒pET-28c(+)上,构建表达质粒pET-28c(+)TRAIL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得表达菌株BL-pET-28c(+)TRAIL.表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导表达4h后,产生大量的重组人TRAIL蛋白,SDS-PAGE扫描计算机灰度分析表明,表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白的40%以上.

抗血小板多肽在大肠杆菌中的克隆和表达

设计合成了两条编码KGDX(赖-甘-天冬-X)的寡核苷酸链,长度为36个碱基对,两端分别为BamHI酶和XcoI酶切位点.将该基因插入原核高效表达载体PGEX-4T-1的tac启动子下游,获得重组质粒PGEX-4T-1KGDX,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达.GST-KGDX融合蛋白具有可溶性,产量为35mg/L培养基,表达量占菌体总蛋白48.02%.破碎菌体上清经谷胱甘肽-琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为95%的重组蛋白.125I7E3竞争拮抗实验结果表明,GST无GPⅡb/Ⅲa结合作用,GST-KGD融合蛋白能代替7E3竞争性地与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合,从而抑制血小板聚集.其IC50值为40μmol/L.

衣藻鞭毛重组——一种简便的细胞毒药物检测系统

建立了一种新的细胞毒药物的简便、经济的检测系统,即原生动物-衣藻的鞭毛重组系统.测试了10种不同的抗肿瘤药物(细胞毒和非细胞毒的药物)对衣藻鞭毛重组的影响.衣藻鞭毛的重组对作用于微管的装配或抑制管蛋白合成的细胞毒药物十分敏感,并有很好的药效-剂量关系.而用准弹性光散射仪测量衣藻的运动速度,从另一个角度反映了衣藻鞭毛重组的程度与药物的细胞毒作用的联系.可以为揭示药物作用机理提供重要信息.

灰树花液体深层培养多糖组份的分析鉴定研究

研究了液体深层培养的灰树花多糖组份和结构.应用气相色谱分析测得灰树花胞外多糖(HPT1)和灰树花胞内多糖(HPT2)的组份均含有葡萄糖(Glu)、甘露糖(Man)和木糖(Xyl);其摩尔比HPT1为1.00∶0.27∶0.11,HPT2为1.00∶0.35∶0.26.运用隧道扫描显微镜(STM)对多糖进行了结构的扫描研究,结果表明:HPT2可以清楚地看出主链上带有环状侧链,HPT1不清楚,其大小和结构与HPT2均有很大的差异.

细胞稀释工艺转化甾体11β-羟基的研究

以相等溶氧速率系数KLa为基础将甾体11β-羟基细胞稀释转化工艺由250 ml摇瓶放大到2 L、10L发酵罐.通过对通风量、接种量、种龄等发酵参数的研究,确定了细胞稀释转化工艺条件.在10 L发酵罐上,转化工艺为二级工艺,发酵温度28℃,二级种子接种量15%,罐压0.04～0.05 MPa,搅拌转速180～200 r/nin,通风量7 L/min,稀释比1:1,转化周期24 h,氢化可的松转化率74%～77%.测定了转化过程中底物和主产物β体的含量变化.

文摘与文题

蛋白质组学研究相关技术及其在生物医学研究中的应用

蛋白质组学是以生物体系整体蛋白质为研究对象的新的研究领域,重点介绍了蛋白质组学研究常用技术方法及其在生物医学研究应用方面的进展.