药物生物技术杂志
Chinese Journal Of Pharmaceutical Biotechnology 약물생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-8915
- 国内刊号： 32-1488/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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洗涤红细胞制备工艺的研究
探讨洗涤红细胞制备方法,改进制备工艺,提高产品的制备效率和质量.采用全血和悬浮红细胞各20袋为原料,每袋为2个单位,分别用开放式和四联盐水袋两种方法制备,比较两种不同原料用两种不同方法制备的结果.结果:以全血和悬浮红细胞为原料制备洗涤红细胞,血浆蛋白清除率和残留量存在显著差异(P＜0.01),以开放式和四联盐水袋两种方法制备洗涤红细胞,制备时间有显著差异(P＜0.01).以悬浮红细胞为原料,采用四联盐水袋制备为更佳,值得推广.
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双酶法生物合成L-苯基乙酰基甲醇的研究
双酶偶联体系越来越受到人们重视,广泛应用于医药、食品等领域,是实现高效生物合成的重要方法.本文利用乳酸氧化酶(Lactate Oxidase,LOD)和丙酮酸脱羧酶(Pyruvatedecarboxylase,PDC)偶联构建双酶体系,催化乳酸钠和苯甲醛合成L-苯基乙酰基甲醇( L-Phenylacetylcarbinol,L-PAC),后者是合成L-麻黄素的重要中间体.转化反应的佳温度为34℃,pH6.8,转化时间6h,苯甲醛用量160 mmol/L,乳酸钠用量330 mmol/L,葡萄糖用量3 g/100 mL,L-PAC产量达到8.79 g/L.在L-PAC的制备过程中,以廉价的乳酸钠代替丙酮酸大大降低了生产成本,缩短了反应时间,简化了操作步骤,有利于工业生产.双酶偶联体系为生物合成L-PAC提供了一个新的思路和新方法.
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RGD修饰多肽EDSM-Y的克隆、表达、纯化和初步活性研究
固相合成多肽EDSM-Y在体内外具有良好的抗血管生成和抗肿瘤的活性,该研究希望通过基因工程重组手段获得目的蛋白EDSM-Y,为进一步研究开发奠定基础.PCR扩增得到目的基因,连接人原核表达载体；以IPTG诱导实现外源基因表达,SDS-PAGE和Western Blot验证；摸索发酵表达纯化条件,分离目的蛋白；细胞增殖实验检测EDSM-Y的活性.成功构建了pET-23a(+)-EDSM-Y重组表达载体,但目的蛋白表达量较低.后将EDSM-Y克隆入pET-32a(+)重组表达载体进行融合表达,改变表达载体后目的蛋白表达量显著增加.目的蛋白经过先后两次亲和层析,纯度分别可到达60％和85％,活性实验表明EDSM-Y对血管内皮细胞具有增殖抑制作用.通过基因工程重组能获得具有抑制细胞增殖活性的抗肿瘤多肽EDSM-Y.
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sFGFR3的原核表达及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用
成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类高效的细胞分裂、成形促进剂,以及血管生成的诱导物.FGF信号通路是与癌症的发生和发展紧密相关的.可溶性成纤维细胞生长因子受体(sFGFRs)能够与FGFs相结合,从而阻断它们的信号.为了研究sFGFR3对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,作者利用从人类胎盘组织中提取的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR),扩增了FGFR3Ⅲc的胞外域(sFGFR3).克隆了sFGFR3片段并将其插入到pET3c载体中,然后在大肠杆菌BL21( DE3)中以包涵体的形式进行表达.通过凝胶层析和肝素亲和层析,分离和纯化了成功重折叠的蛋白.sFGFR3的重折叠率为10.2％,纯化后的蛋白其纯度高达95％.3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)处理后的细胞扩增分析结果显示,sFGFR3能够有效抑制乳腺癌细胞BT549的增殖,且其抑制不具有剂量依赖性.
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新型顺铂给药系统的制备及其生物活性评价
以生物发酵法获得的γ-聚谷氨酸经酸降解后得到小分子γ-聚谷氨酸(γ-PGA),柠檬酸(CA)通过酯化反应修饰其侧链羧基制备γ-聚谷氨酸-柠檬酸(γ-PGA-CA),再将顺铂(CDDP)与γ-PGA-CA上的羧基相结合制备得载药复合物γ-PGA-CA-CDDP,凝胶色谱法测定分子量,OPDA法测定载药量及有效结合率,透析法结合HPLC研究其对顺铂的缓释效果,MTT法检测复合物的体外抗肿瘤活性,采用新鲜兔血检测载体材料及复合物的溶血性.实验结果表明:成功获得γ-PGA-CA及γ-PGA-CA-CDDP,该复合物相对分子质量约为66k,有效结合率达65％,载药率达16％～20％,48h时顺铂的累计释放率达到50％,MTT检测显示该复合物对肿瘤细胞具有良好的抑制效果,相对于游离顺铂具有较低的毒性,且无溶血性.因此,γ-PGA-CA可作为药物载体,γ-PGA-CA-CDDP具有潜在的临床应用价值.
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维拉帕米对HeLa细胞12C6+离子辐射敏感性的影响
利用重离子加速器国家重点实验室提供的12C6+束流照射人宫颈瘤(HeLa)细胞,测量辐射结束后细胞克隆率绘制细胞存活曲线.使用10 μg/mL的维拉帕米处理细胞作为一组对照,检测维拉帕米对于HeLa细胞辐射敏感性的影响.利用Fluo-3 AM钙离子荧光探针配合流式细胞仪检测重离子照射后的胞内游离钙(IECa2)水平.实验结果表明0～5Gy范围内重离子辐射剂量与HeLa细胞存活率负相关,照射结束后胞质游离钙浓度有一定程度的上升.而维拉帕米能显著降低HeLa细胞经重离子辐射后的存活及增殖能力,且胞质游离钙浓度处于较低水平.造成这种现象的原因可能是维拉帕米能降低细胞对非致死性DNA损伤的修复能力.
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水通道蛋白AqpZ在大肠杆菌中的表达及纯化
利用麦芽糖结合蛋白( Maltose binding protein,MBP)/多聚组氨酸和肠激酶组成的强亲水性双标签表达系统用于水通道蛋白Aquaporin Z(AqpZ)在大肠杆菌中的表达.通过PCR方法人工在AqpZ的3′端添加8个组氨酸标签后,定向克隆到载体pMAL-c5e中成功构建了双标签融合表达载体pMAL-c5e-AqpZ-HIS.通过IPTG诱导,融合蛋白MBP-AqpZ-HIS在Rosetta( DE3)宿主中以可溶形式表达,其上清表达量约为160 mg/L.表达产物在肠激酶作用下,融合蛋白的MBP标签被完全切除,经过一步的亲和层析获得高纯度的AqpZ-HIS.每升培养液可以获得约10mg AqpZ-HIS纯蛋白.纯化得到的AqpZ-HIS在SDS-PAGE上的行为表明了AqpZ-HIS以4聚体形式存在.通过对色氨酸荧光光谱的研究推断出AqpZ-HIS也形成了正确的3级结构.因此,该表达系统为在大肠杆菌中表达水通道蛋白开辟了新的途径.
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应用ELISA法检测门冬酰胺酶中残余大肠杆菌菌体蛋白含量的研究
采用Cygnus公司“大肠杆菌菌体残留蛋白检测试剂盒”检测门冬酰胺酶中残余宿主菌菌体蛋白含量,建立门冬酰胺酶中宿主菌菌体蛋白残留检测方法并进行了相关方法验证.验证结果表明:宿主菌菌体蛋白浓度在0～ 100 ng/mL范围内呈良好的线性关系,线性相关系数大于0.99,不同实验人员测得的精密度RSD均小于5％,平均回收率为94.34％.通过对8批门冬酰胺酶样品的检测,测得门冬酰胺酶中的残余宿主菌体蛋白含量均小于550×10-6.该方法具有快速,操作安全简便等优点,灵敏度高,重现性好,可用于门冬酰胺酶的宿主菌体蛋白的残留检测.
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齐拉西酮与利培酮治疗女性首发精神分裂症的对照研究
探讨齐拉西酮与利培酮对女性首发精神分裂症患者的疗效和对体质量、糖脂代谢、血清泌乳素、血清雌二醇、血清胰岛素及QTc间期的影响.将80例女性首发精神分裂症患者随机分为齐拉西酮组和利培酮组,每组40例,疗程8w.于基线、治疗第4w末和8 w末分别用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定疗效.对患者血糖、血脂、泌乳素、雌二醇、胰岛素、体质量进行测定,并做心电图检查,比较QTc间期变化.在治疗第4w末和8 w末,两组PANSS量表各因子分和总分较基线均有显著下降(P＜0.01),齐拉西酮组阴性症状分下降更显著(P＜0.05).两组糖脂代谢和体质量的对照中,利培酮组除体质量和甘油三酯与基线相比有统计学意义(P＜0.05),两组其他各项较基线均无显著差异.两组对泌乳素、雌二醇、胰岛素的影响较基线均有显著差异(P＜0.05),其中利培酮组对泌乳素和胰岛素影响较齐拉西酮组更显著(P＜0.05).齐拉西酮组QTc间期与基线相比差异无统计学意义(P＞0.05),利培酮组则与基线相比存在显著的缩短(P＜0.05).齐拉西酮和利培酮治疗女性首发精神分裂症疗效均显著,齐拉西酮对阴性症状效果更突出,且齐拉西酮较利培酮对代谢和内分泌方面的影响更小,相对更安全.
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枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础.从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析.该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定.将该载体转化人大肠杆菌BL21中,通过SDSPAGE电泳检测guaB基因的表达效果.克隆的guaB基因长度为1510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99％,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因.穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带.SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显.论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达.
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探索一种新型生物发酵途径生产乙醇
在质粒pUC19中插入菊欧氏杆菌pehX启动子,并与全合成的运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc),乙醇脱氢酶基因(adhB)串联,构建pUC1 9-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆,转化大肠杆菌DH5α,经气相色谱检测,在大肠杆菌中乙醇的表达量达到o.85％.菊欧氏杆菌富含多种纤维素酶,与一些仅可利用基本糖类作为碳源的大肠杆菌等相比,其可以利用纤维素作为碳源.本实验设计将pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆转化至菊欧氏杆菌,尝试用氯化钙、电击等转化方法,但均没有获得转化子.提示需要寻找新的转化方法或者将pdc和adhB基因整合到菊欧氏杆菌的基因组中以使其能产生乙醇.
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RNAProbeDesigner:mRNA探针特异性序列搜索方法
mRNA不仅是生物体内蛋白质合成的“图纸”,还参与生命活动的很多调节过程.随着分子影像技术的发展,mRNA探针在医药领域的应用越来越广泛.探针的特异性是衡量探针效果的重要指标.本文基于BLAST的序列搜索方法,根据目标mRNA中的每个片段与细胞中其他RNA的相似程度,筛选可用于特异性识别mRNA的寡核苷酸片段,并将该方法编写为一套自动化的mRNA探针特异性序列的搜索程序——RNAProbeDesigner.选取4种蛋白的mRNA对该程序进行测试,结果显示,该程序搜索出的片段中,有部分结果在以往的文献中已被报道用于相应探针的设计,从而证明了该方法的可靠性.
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microRNA-22真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系SKOV-3中的稳定表达
为了解决microRNA模拟物半衰期较短,无法达到长时间研究的问题,实验构建了miR-22真核表达质粒并转染人卵巢癌细胞系SKOV-3,建立稳定表达miR-22的细胞模型,为研究miR-22在肿瘤发生发展过程中的作用提供有效的工具.首先设计并构建过表达miR-22的Psilencer4.1-miR-22重组质粒,经宿主菌扩增、酶切、测序鉴定后,重组质粒和阴性对照质粒分别转染卵巢癌细胞系SKOV-3,G418筛选建立稳定表达miR-22(实验组)和control-RNA(阴性对照组)的SKOV-3细胞系,用qRT-PCR验证所构建的细胞系中miR-22表达量的差异.后通过细胞划痕-修复实验和侵袭小室实验观察过表达miR-22对卵巢癌细胞迁移能力的影响.经宿主菌扩增、酶切、测序证实,成功构建miR-22真核表达质粒,插入的DNA片段与设计序列完全一致.与对照组相比,在建立的稳定表达miR-22的SKOV-3细胞中,miR-22 mRNA水平明显上调(P＜0.05),细胞的迁移能力也显著下降(P＜0.05).综上所述,成功构建了过表达Pre-miR-22的重组质粒,并获得了稳定表达miR-22的SKOV-3细胞系.
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肿瘤细胞裂解物抗小鼠B16F10黑色素瘤的作用研究
反复冻融B16F10肿瘤细胞制备裂解物,以白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)为载体,OK432和来源于结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426( mHSP70407-426,M)的两段串联重复序列M2为佐剂,制备了肿瘤细胞疫苗B16F10-DT-M2-OK432(BDTMOK),探讨其能否抑制小鼠B16黑色素瘤,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨.以制备的BDTMOK免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答.通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗B16肿瘤细胞裂解物(B16 tumor cell lysate,B16TCL)类抗体.淋巴细胞增殖实验的结果显示,BDTMOK的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖.预防结合治疗性实验的结果显示,BDTMOK激发的免疫应答对于B16肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,皮下注射BDTMOK可以延长皮下移植瘤发生的潜伏期(P＜0.05),并且平均瘤重显著降低(P＜0.05)；抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P＜0.01).疫苗BDTMOK能有效的抑制小鼠B16黑色素瘤的生长.
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雷斯青霉ATCC10490对补骨脂二氢黄酮甲醚转化的研究
研究了雷斯青霉(Penicillium raistrickii ATCC 10490对补骨脂二氢黄酮甲醚生物的微生物转化,通过硅胶柱分离等技术得到转化产物BC-PC-4的纯品.在细胞水平上分析了该转化产物的抗肿瘤活性,结果发现产物BC-PC-4对细胞MCF-7的抗肿瘤活性IC50值为9.31 μmol/L,较底物补骨脂二氢黄酮甲醚降低了7.04 μmol/L,且对正常细胞HUVEC有促进增殖的作用.
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免疫球蛋白结合结构域的研究进展
Z结构域,又叫免疫球蛋白结合结构域,是由金黄色葡萄球菌蛋白A( Staphylococal Protein A,SPA)中B结构域改构而成.SPA是从金黄色葡萄球菌的细胞壁中发现的能与多种哺乳动物的抗体相结合的天然蛋白,组成SPA的5个结构域中,以B结构域的抗体结合力及稳定性占绝对优势.将B结构域28～29位敏感性残基Asn-Gly定向诱变成为Asn-Ala后,得到的结构域被称为Z结构域,其稳定性更高,可耐受羟铵和溴化氢的处理.首尾相连的两个Z结构域,被命名为ZZ结构域,具有与SPA相类似的抗体结合容量以及更高的稳定性,可以耐受工业纯化中苛刻的环境.ZZ结构域以其独特的反3α螺旋结构、以及特有的抗体结合能力已广泛应用于外源蛋白的可溶表达及免疫检测、抗体纯化等领域.该文将对ZZ与抗体结合的机制研究以及它在各领域的应用研究进行综述.
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抗糖尿病肽类药物研究进展
糖尿病是以胰岛素相对或绝对不足为特征的代谢性疾病,严重危害人类健康,传统抗糖尿病药物各有缺点,从而催生了抗糖尿病肽类药物的面世.常见于文献报道的抗糖尿病肽有胰高血糖素样肽-1( Glucagonlike peptide-1,GLP-1)受体激动剂、基于胰淀素开发的抗糖尿病肽、动植物来源的抗糖尿病肽和抗糖尿病寡肽,其中前者又包括GLP-1衍生物和GLP-1类似物.该文对它们各自的优缺点,研发思路和药理效应作了综述.
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以整合素为靶点的抗肿瘤药物研究进展
整合素作为一类具有信号转导功能的细胞表面粘附分子,与肿瘤的发生、发展密切相关.整合素能与细胞内多种分子相互协调,从多方面影响肿瘤的增殖、侵袭和转移等过程.以整合素为靶点进行的抗肿瘤药物的研发及相应治疗方法的开发已成为当前肿瘤治疗的热点.该文从整合素抗体类药物,含RGD等与整合素高亲和力结合序列的药物以及其他整合素靶向药物3方面综述了近年来以整合素为靶点的抗肿瘤药物研究开发的新进展,并对整合素的靶向治疗进行了探讨.
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胎盘生长因子的生物活性及其与肿瘤相关作用研究进展
胎盘生长因子属于血管内皮生长因子家族,具有刺激血管内皮细胞生长,迁移和扩增的作用.研究发现PIGF是参与多种肿瘤血管生成的重要的促血管生成因子,文章就P1GF的生物活性和在抗癌研究方面的进展进行综述.
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叶酸靶向的肿瘤治疗研究进展
叶酸靶向的递药系统是一种新兴的治疗多种恶性肿瘤的方法.利用叶酸分子与肿瘤细胞表面叶酸受体的高亲和力,叶酸偶联的化合物能够将分子大小不同的复合物递送给病理细胞而不对正常组织造成伤害.目前,通过这种方法成功递送到叶酸受体高表达肿瘤细胞的复合物包括:蛋白毒素、化疗药物、免疫治疗剂、基因载体、反义寡核苷酸、小分子干扰RNA和纳米载体.该文综述了多种叶酸作为靶向配体治疗恶性肿瘤的方法.
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长春花吲哚萜类生物碱代谢途径研究进展
长春花(Catharanthus roseus(L.)G.Don.)含有130余种生物碱,既是抗癌药物长春碱和长春新碱的唯一植物来源,也是研究吲哚萜类生物碱代谢途径的模式植物.生成长春花生物碱的前体环烯醚萜主要来源于2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸途径(MEP),甲羟戊酸途径(MVA)可能在此过程中起辅助作用.吲哚生物碱代谢途径受茉莉酸甲酯正调控.文多灵途径过去被认为在长春花悬浮细胞中没有文多灵产生,而目前的研究发现文多灵在长春花C20hi细胞中可以微量合成.文章对近年来长春花吲哚生物碱代谢途径及部分关键酶研究进展进行了综述.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 02 03 04 |
