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microRNA-22在特发性肺动脉高压发病机制中的作用
目的 研究血浆microRNA-22 (miR-22)在特发性肺动脉高压(IPAH)诊断中的价值及发病机制中的作用.方法 应用real-time PCR方法检测IPAH患者及匹配健康人血浆miR-22表达水平,结合生物信息学方法分析miR-22靶基因MYCBP,并采用eGFP报告基因对靶基因进行实验验证.结果 IPAH患者血浆miR-22表达水平明显降低(P＜0.01),ROC曲线下面积(AUC)为0.744；生物信息学分析及eGFP报告基因验证,MYCBP是miR-22的靶基因之一.结论 血浆miR-22在IPAH患者表达明显下调,可作为IPAH诊断分子标志物,miR-22通过靶基因MYCBP激活c-Myc信号通路,促进细胞增殖相关基因转录,是导致IPAH患者肺动脉中膜平滑肌增殖及肺血管重构的可能机制之一.
关键词： 特发性肺动脉高压 microRNA-22 分子标志物 Myc结合蛋白 -
外周血microRNA-22水平在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的表达变化及临床诊断意义
目的：探讨microRNA-22在冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者外周血中的变化水平及其临床价值，同时分析其与氧化应激的关系。方法纳入于本院就诊的具有心血管疾病风险并考虑为冠心病的患者96例作为研究对象，其中男59例，女37例，年龄（62±8）岁。根据影像学检查结果，将研究对象分为冠心病组及非冠心病组。采集研究对象血浆标本，实时荧光定量PCR（quantitative real-time，PCR）检测microRNA-22水平。Diacron-活性氧代谢产物检测试剂盒检测血浆活性氧代谢产物（reactive oxygen metabolites，ROM）水平。分析microRNA-22与冠心病发病、临床表现以及病情复杂程度（SYNATAX评分）的关系。结果冠心病组患者血浆中的microRNA-22高于非冠心病组，且差异具有显著性（P＜0.05）。临床表现为ST段抬高型心肌梗死的患者血浆microRNA-22水平高于其他表现的患者（P＜0.05）。冠心病病变较复杂（高SYNATAX评分）的患者microRNA-22水平较高（P＜0.05）。冠心病组患者的血浆ROM高于非冠心病组，差异具有显著性（P＜0.05）。冠心病患者血浆microRNA-22与ROM水平成正比（r=0.641，P＜0.05）。高血浆microRNA-22水平是冠心病发病的危险因素（OR=2.98，95%CI：1.82～4.87，P＜0.05），受试工作者曲线提示血浆microRNA-22诊断冠心病的曲线下面积为0.714。结论外周血microRNA-22在冠心病中存在高表达，可用于评估冠心病的病情及发病风险，具有临床诊断价值，同时冠心病患者的外周血microRNA-22与氧化应激水平有关。
关键词： 冠状动脉粥样硬化性心脏病 microRNA-22 诊断 氧化应激 -
1,25-(OH)2D3抑制人卵巢癌细胞SKOV-3增殖与调控microRNA-22的表达有关
目的 通过观察1,25-(OH)2D3对SKOV-3细胞增殖和microRNA-22和microRNA-21表达的影响,探讨microRNAs在1,25-(OH)2D3抗肿瘤增殖中的作用.方法 以不同浓度1,25-(OH)2D3(10-9、10-8、10-7mol/L)处理SKOV-3细胞,CCK-8法检测细胞增殖率,real time RT-PCR分析microRNA-22和microRNA-21的表达,流式细胞仪分析细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 1,25-(OH)2D3对SKOV-3细胞增殖有明显的抑制作用,并且存在着时间剂量依赖关系(P＜0.01).1,25-(OH)2D3可以降低microRNA-22的表达水平(P＜0.05),但是不影响microRNA-21的表达.细胞周期分析显示,1,25-(OH)2D3可以诱导SKOV-3细胞阻滞于G0/G1,浓度越高阻滞越明显(P＜0.05).1,25-(OH)2D3促进SKOV-3细胞核内DNA断裂点增加,细胞凋亡增加(m0.05).结论 在SKOV-3细胞中,1,25-(OH)2D3可能是通过抑制microRNA-22,促进细胞凋亡,调节细胞周期,抑制细胞增殖,从而到达抑制肿瘤的作用.
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MicroRNA-22在乳腺癌中的作用及机制
MicroRNA (miRNA)为非编码的单链小RNA分子,具有高度保守性、时序性和组织特异性.MicroRNA-22(miR-22)参与了骨骼代谢、心肌细胞成熟与肥大、胚胎干细胞的分化等生理病理过程.在乳腺癌中,miR-22则具有抑癌基因与癌基因的双重功能.miRNA-22有可能作为乳腺癌诊断和预后的指标,也可作为靶点为乳腺癌患者提供新的治疗策略.
关键词： microRNA-22 乳腺癌 抑癌基因 癌基因 -
非小细胞肺癌患者血清miR-22和miR-126的检测及其临床意义
目的:探讨液体活检外周血清miR-22和miR-126的表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生和转移中的作用.方法:收集盐城市第六人民医院2013年5月至2015年5月期间确诊的127例NSCLC患者,设健康对照112例,采用qPCR检测患者血清中miR-22和miR-126的相对表达水平,Logistic回归分析法及ROC曲线分析miR-22和miR-126在NSCLC发展与转移预测中的敏感性及特异性.结果:病例组血清miR-22水平显著高于对照组,而血清miR-126水平低于对照组(均P＜0.05);与腺癌患者相比,鳞状细胞癌患者的血清miR-22水平显著升高(P＜0.05)、血清miR-126显著降低(P＜0.01);与Ⅰ+Ⅱ期患者相比,Ⅲ+Ⅳ期患者血清miR-22水平升高、miR-126水平相对降低(均P＜0.01);与未转移患者相比,转移患者血清miR-22水平升高,而血清miR-126水平降低(均P＜0.01);有家族遗传史的患者与没有家族遗传史的患者相比,血清miR-22水平升高但miR-126水平降低(均P＜0.01).血清miR-22与miR-126水平对NSCLC预测的特异性与敏感性分别为99.11％和84.30％、82.68％和96.40％.血清miR-22与miR-126水平对NSCLC转移的特异性与敏感性分别为59.74％和96.00％、84.00％和62.30％.结论:在NSCLC患者血清中,miR-22呈高表达而miR-26呈低表达,液体活检miR-22和miR-126可作为预测NSCLC的发生及转移的一个生物学指标.
关键词： 非小细胞肺癌 microRNA-22 MicroRNA-126 血清 液体活检 -
microRNA-22真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系SKOV-3中的稳定表达
为了解决microRNA模拟物半衰期较短,无法达到长时间研究的问题,实验构建了miR-22真核表达质粒并转染人卵巢癌细胞系SKOV-3,建立稳定表达miR-22的细胞模型,为研究miR-22在肿瘤发生发展过程中的作用提供有效的工具.首先设计并构建过表达miR-22的Psilencer4.1-miR-22重组质粒,经宿主菌扩增、酶切、测序鉴定后,重组质粒和阴性对照质粒分别转染卵巢癌细胞系SKOV-3,G418筛选建立稳定表达miR-22(实验组)和control-RNA(阴性对照组)的SKOV-3细胞系,用qRT-PCR验证所构建的细胞系中miR-22表达量的差异.后通过细胞划痕-修复实验和侵袭小室实验观察过表达miR-22对卵巢癌细胞迁移能力的影响.经宿主菌扩增、酶切、测序证实,成功构建miR-22真核表达质粒,插入的DNA片段与设计序列完全一致.与对照组相比,在建立的稳定表达miR-22的SKOV-3细胞中,miR-22 mRNA水平明显上调(P＜0.05),细胞的迁移能力也显著下降(P＜0.05).综上所述,成功构建了过表达Pre-miR-22的重组质粒,并获得了稳定表达miR-22的SKOV-3细胞系.
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MicroRNA-22和microRNA-1825在幼年系统性红斑狼疮诊断和鉴别诊断中的作用
目的 探索microRNA (miR)-22和miR-1825在幼年系统性红斑狼疮(JSLE)诊断及鉴别诊断中的应用价值.方法 选取2013年6月至2014年5月首都儿科研究所附属儿童医院收治的JSLE患儿为研究组,选取同期收治的全身型幼年特发性关节炎(sJIA)、肾病综合征(NS)、川崎病(KD)、过敏性紫癜(HSP)患儿为病例对照组,选取健康体检儿童为健康对照组.采用实时荧光定量-PCR方法检测研究组患者、病例对照组患者和健康对照组儿童血浆中miR-22和miR-1825表达水平,分析3组间miR-22和miR-1825表达水平的差异.受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miR-22和miR-1825作为诊断指标的灵敏度和特异度.用Targetscan、PicTar、miRanda 3个数据库预测miR-22和miR-1825靶基因,使用基因本体(GO)分析预测靶基因的分子功能、参与的生物学过程,京都基因与基因组百科全书通路(KEGG通路)分析预测靶基因参与的相关免疫学通路.结果 研究组JSLE患儿血浆miR-22和miR-1825表达水平均低于健康儿童,差异均有统计学意义(t=-3.076、-9.054,P＜0.01、0.000 1),亦低于病例对照组sJIA、NS、KD、HSP患儿表达水平(t=-4.410、-4.477、-4.494、-2.971,P均＜0.000 1;t=-9.043、-6.045、-10.416、-8.712,P均＜0.000 1),病例对照组患儿血浆miR-22和miR-1825 miRNA的表达水平与健康对照组儿童比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).miR-22健康对照组和研究组ROC曲线下面积为0.777,miR-1825健康对照组和研究组ROC曲线下面积为1.000.miR-22:JSLE患儿与sJIA、NS、KD、HSP患儿ROC曲线下面积为0.731 ～1.000;miR-1825:JSLE患儿与sJIA、NS、KD、HSP患儿ROC曲线下面积为0.939 ～1.000.JSLE患儿外周血miR-22的表达水平与补体C3具有相关性(r =0.493,P=0.027).结论 血浆中miR-22和miR-1825表达水平对JSLE的诊断和鉴别诊断具有一定参考价值,miR-22可在一定程度上反映疾病活动性.
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microRNA-22与肝癌细胞侵袭的相关性
目的 探讨microRNA-22(miR-22)对肝癌细胞侵袭的表达量的变化及意义.方法 通过培养不同迁移和侵袭能力肝癌细胞系MHCC97L和HCCLM9细胞以及正常肝细胞系LO2细胞,比较miR-22表达量的差异.选取miR-22表达量相对较低的肝癌细胞系HCCLM9,向其转染miR-22抑制剂(inhibitor)和模拟物(mimics),对比转染前后HCCLM9细胞系迁移能力的改变.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测miR-22的表达量.采用划痕实验检测细胞迁移能力的改变.结果 与正常肝细胞系LO2细胞相比较,肝癌细胞系内miR-22表达量显著降低(P<0.05);且具有高侵袭能力的HCCLM9细胞相比低侵袭能力的MHCC97L细胞的miR-22表达量更低(P<0.05).向高侵袭能力的HCCLM9细胞转染miR-22 inhibitor后,细胞内miR-22表达量显著下降(P<0.001),细胞迁移能力显著增强(P<0.001);而转染miR-22 mimics之后,细胞内miR-22表达量显著升高(P<0.001),细胞迁移能力则显著减弱(P<0.001).结论 miR-22可抑制肝癌细胞迁移和侵袭能力,进而抑制肝癌的转移.
关键词： microRNA-22 肝癌 侵袭 细胞迁移 -
高表达microRNA-22改善小鼠心肌梗死后心功能
目的 观察高表达microRNA-22对小鼠心肌梗死后心功能的保护作用及机制.方法 构建小鼠心肌梗死模型,用携带microRNA-22的腺病毒载体转染至心肌梗死周围区域,观察高表达microRNA-22对小鼠心肌梗死后心功能的保护作用.采用超声心动图检测心功能,力竭游泳检测运动能力,HE及Masson染色检测心肌微结构及纤维化,Western blot检测PTEN蛋白表达情况.结果 高表达microRNA-22组小鼠左心室射血分数(LVEF)(49.38％±2.51％比42.29％±2.74％,P＜0.05)及短轴缩短率(FS)(24.24％±0.64％比22.59％±0.73％,P＜0.05)较空载腺病毒组升高,心脏收缩功能维持较好;高表达microRNA-22组力竭运动时间较空栽腺病毒组延长(8.13± 1.01min比7.02± 1.32 main,P＜0.05),小鼠整体运动能力改善;高表达microRNA-22组小鼠HE染色示心肌结构维持较好,Masson染色示心肌纤维化程度较轻;高表达microRNA-22组心肌梗死周围区域内microRNA-22表达增加(6.66±2.01比1.22±0.07,P＜0.05),PTEN蛋白表达下降(0.63±0.19比2.23±0.44,P＜0.05).结论 小鼠心肌梗死后在体高表达microRNA-22改善心脏收缩功能及运动能力,改善心肌微结构,减轻心肌纤维化.
关键词： microRNA-22 心肌梗死 心功能 心室重构 -
高表达microRNA-22对缺氧心肌细胞的保护作用及机制
目的 观察高表达microRNA-22对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用及机制.方法 用携带microRNA-22的腺病毒载体和空载体转染体外缺氧条件下培养的原代心肌细胞,检测高表达microRNA-22后心肌细胞生物学特性的改变.采用MTT检测细胞活力,EdU检测细胞DNA合成能力,Caspase-3检测细胞凋亡情况.结果 表达microRNA-22的腺病毒载体成功转染原代心肌细胞,流式细胞仪检测绿色荧光蛋白阳性细胞比例＞95％,高表达microRNA-22从蛋白水平显著下调PTEN表达.与空载腺病毒组相比,高表达microRNA-22组细胞核增殖明显增加,细胞生长更快,细胞活力增加,细胞凋亡减少.结论 体外高表达microRNA-22能保护缺氧条件下的心肌细胞.
关键词： microRNA-22 心肌细胞 细胞特性 -
MicroRNA-22在骨肉瘤顺铂化疗耐药中的功能与机制研究
目的 研究miRNA-22在骨肉瘤顺铂耐药中的作用及对自噬调控的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测方法进行检测骨肉瘤细胞及正常细胞中miRNA-22表达水平.用定量观察光镜细胞检测MG-63细胞自噬.用划痕法检测细胞迁移和侵袭能力.结果 相对于正常细胞,miRNA-22在骨肉瘤细胞中的表达显著下调.在MG-63细胞株过表达miRNA-22可显著抑制细胞增殖,过表达的miRNA-22抑制肿瘤细胞迁移和侵袭.miRNA-22的过度表达导致自噬的抑制.结论 相比正常细胞,过表达的miRNA-22通过抑制自噬限制骨肉瘤细胞的增殖和转移.
关键词： 骨肉瘤 microRNA-22 自噬
