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人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物负载树突状细胞对体外免疫应答的影响
目的:研究人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物对体外免疫应答反应的影响.方法:体外诱导培养人脐血树突状细胞(DC).人卵巢癌细胞SKOV3分别用光动力学方法(激光照射)及冻融的方法制备细胞裂解物,与DC共培养48 h,RPMI1640与DC培养作为阴性对照,采用流式细胞仪检测DC免疫表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR的改变,用ELISA方法检测培养上清IL-12含量的改变.体外培养T细胞,用负载裂解物的DC诱导生成细胞毒性T细胞(CTL),MTT法检测CTL对人卵巢癌细胞的杀伤效应.结果:在体外,人卵巢癌细胞光动力学裂解物较冻融裂解物更能促进DC的成熟,表现为DC细胞表型中共刺激分子CDS0、CD86上调,分泌更多的IL-12,能诱导CTL产生更强的特异性肿瘤细胞杀伤效应.结论:人卵巢癌细胞的光动力学细胞裂解物较冻融细胞裂解物在体外更能促进IX:成熟,并引发CTL的特异性肿瘤杀伤效应,因此,具有更强的肿瘤疫苗样作用.
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负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞联合杀伤细胞对肝癌患者术后免疫功能的影响
我们就原发性肝癌术后早期采用DC联合CIK细胞对原发性肝癌术后患者免疫功能干预作用进行研究.材料与方法一、研究对象自2007年4月至2010年6月,根据巴塞罗那肝癌研究组(BCLC)分期评估16例原发性肝癌术后患者中A3期3例,A4期6例,B期7例,采用负载自体肿瘤细胞裂解物的树突状细胞( dentritic cell,DC)疫苗联合杀伤细胞(cytokine induced killer,OK)的免疫治疗.16例肝癌患者中男10例,女6例,年龄29～ 70岁,中位年龄57岁.
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肿瘤细胞裂解物联合化脓性链球菌裂解物的抗肿瘤作用
目的:研究化脓性链球菌裂解物与肿瘤细胞裂解物联用,抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长.方法:自行制备了化脓性链球菌裂解物制剂,通过体外及动物实验测定其抗肿瘤效应.以BALB/c小鼠EMT6乳腺癌为模型,观察了链球菌制剂联合肿瘤细胞裂解物对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响.结果:自行制备的化脓性链球菌在体外可以刺激小鼠脾细胞的增殖,且能抑制多种肿瘤细胞(EMT6、B16、A549)的增殖,二者联用对每只荷瘤小鼠的肿瘤体积都有较强的抑制作用(P＜0.05).结论:化脓性链球菌裂解物与肿瘤细胞裂解物联用可以抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长.
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肿瘤细胞裂解物疫苗与其修饰的树突状细胞联合抗A20鼠淋巴瘤的作用
将A20淋巴瘤细胞,反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物的抗原肽,以来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407-426,M)的两段串联重复序列M2小肽为佐剂,通过双功能偶联试剂戊二醛偶联制备肿瘤细胞疫苗A20-M2,偶联产物在体外修饰未成熟的DC,通过检测负载肿瘤细胞抗原的DC细胞分泌的细胞因子以及抗原来确定被修饰DC细胞的成熟度,获得成熟DC即获得DC疫苗.用A20-M2与DC两种疫苗联合给药治疗小鼠,实验结果显示,激发的免疫应答对于A20肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低(P＜0.01),通过ELISA法,从小鼠血清中检测到高滴度抗细胞裂解物类抗体,淋巴细胞增殖试验显示疫苗联合给药后能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖反应.A20-M2能够有效的刺激DC细胞成熟,A20-M2与成熟DC细胞联合给药能够有效的抑制小鼠A20淋巴瘤的生长.
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三阴性乳腺癌TCL诱导THP-1细胞活化及分化的研究
目的:研究三阴性乳腺癌细胞裂解物(TCL)对单核细胞活化和分化所产生的影响,以及裂解物诱导单核细胞分化的机制.方法:选取三阴性乳腺癌细胞系HCC1937制备细胞裂解物,以人单核细胞系THP-1作为研究对象.将HCC1937细胞裂解物作用于THP-1细胞,检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-12的分泌情况,并确定促进细胞因子分泌的佳裂解物剂量和时间点.流式检测HCC1937细胞裂解物作用的THP-1细胞形态及细胞表面CD68表达的改变,并利用Q-PCR的方法检测裂解物作用后THP-1细胞中促分化关键因子转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)和PU.1蛋白的表达情况.结果:HCC1937细胞裂解物活化的THP-1细胞,大量合成分泌TNF-α、IL-12(P<0.05).THP-1细胞在裂解物作用后细胞体积、颗粒度等会发生增大,细胞表面CD68表达上调(P<0.05),上述表现符合巨噬细胞的特征.与此同时,作用后THP-1细胞中C/EBPα表达出现上调(P<0.05),而PU.1表达出现下调(P<0.05).结论:三阴性乳腺癌HCC1937细胞裂解物活化人单核细胞THP-1,并通过促进分化因子C/EBPα的表达和抑制PU.1的表达诱导THP-1向巨噬细胞分化
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肺癌细胞裂解物对树突状细胞的免疫抑制作用
目的：研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞（ DC）的免疫抑制作用。方法：反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物，骨髓冲洗提取C57／BL6小鼠DC，GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC，ELISA检测肿瘤细胞裂解物（ TCL）中透明质酸（ HA）含量，ELISA检测DC 培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果：经检测， Lewis 肺癌细胞 TCL 中含有HA，其含量为42 mg／ml。将这种TCL作用于C57／BL6小鼠DC，同对照组相比，DC的IL-12分泌水平显著下降（P＜0．01），而IL-10的分泌水平显著提高（P＜0．01），这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后，DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平（P＞0．05）。结论：Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质，肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC，从而抑制DC的免疫活性。
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MHSP65-TCL抗黑色素瘤疫苗对免疫细胞活性的影响
目的：研究B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤的治疗作用，以及该疫苗在疾病治疗过程中对免疫细胞活性的影响。方法利用反复冻融的方法裂解B16黑色素瘤细胞制备肿瘤细胞裂解物（TCL），将TCL同结核分支杆菌热休克蛋白65（MHSP65）联用制备MHSP65-TCL。于不同时间点，给B16黑色素瘤荷瘤小鼠免疫MHSP65-TCL疫苗，观察该疫苗抑制黑色素细细胞瘤的情况。与此同时，为了验证MHSP65-TCL中的TCL对免疫细胞活性的影响，我们将TCL于体外作用于小鼠脾细胞，然后流式检测脾细胞CD69表达、脾细胞凋亡以及细胞培养上清液中IL-10和IFN-γ的表达情况。结果通过小鼠体内抑瘤实验发现，B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗在小鼠体内产生了抑制黑色素细胞瘤的作用。通过体外细胞实验发现， MHSP65-TCL中的TCL可以显著刺激体外培养的小鼠脾细胞的活化。除此之外，与这种细胞活化作用相反的，发现TCL还可以诱导一部分体外培养的小鼠脾细胞发生凋亡，并促进脾细胞分泌IL-10，同时抑制IFN-γ的分泌。结论 B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤具有抑制作用。这种抑制作用主要是通过活化免疫细胞产生的。MHSP65-TCL的主要成分TCL对免疫细胞还有抑制作用。这可能同TCL中存在的一些免疫细胞抑制物质有关。这些物质的明确以及去除将有助于提高MHSP65-TCL疫苗的抗肿瘤效力。
