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用抗原特异性树突状细胞激活的淋巴细胞治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤
本研究探讨负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞(dendritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killers,CIK)共培养后,治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤患者的临床免疫学疗效、毒副反应.选择9例复发难治性非霍奇金氏淋巴瘤患者,分离外周血单个核细胞,贴壁细胞体外经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤细胞裂解物,悬浮淋巴细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单克隆抗体、IL-1α体外诱导产生CIK细胞.7天后将负载抗原的DC与CIK共培养,12天后回输体内.利用流式细胞术、T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)的检测及ELISA双抗夹心法检测过继免疫生物治疗前后各项免疫指标的变化,并观察临床疗效.结果表明:经细胞治疗后患者外周淋巴细胞Ag-NOR的IS值明显增高,呈上升趋势;CIK细胞培养后可见CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞较培养前显著增H(p＜0.01),负载肿瘤抗原的DC致敏后CD3+CD8+和CD3+CD56+的表达较之单纯的CIK进一步明显提高(p＜0.01);将负载自身肿瘤抗原的DC与CIK共培养后,上清液中IFN-γ、IL-12的水平显著高于单独CIK对照组(p＜0.05).5例患者通过影像学复查显示肿瘤较治疗前明显缩小;除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应.结论:负载自身抗原的DC-CIK细胞的具有特异性杀伤淋巴瘤细胞的能力;外周淋巴细胞Ag-NOR的IS值明显增高,分泌细胞因子水平高于单纯CIK细胞,临床治疗效果令人满意.
关键词： 非霍奇金淋巴瘤 树突状细胞 细胞因子诱导杀伤细胞 肿瘤裂解物 免疫治疗 -
负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞联合杀伤细胞对肝癌患者术后免疫功能的影响
我们就原发性肝癌术后早期采用DC联合CIK细胞对原发性肝癌术后患者免疫功能干预作用进行研究.材料与方法一、研究对象自2007年4月至2010年6月,根据巴塞罗那肝癌研究组(BCLC)分期评估16例原发性肝癌术后患者中A3期3例,A4期6例,B期7例,采用负载自体肿瘤细胞裂解物的树突状细胞( dentritic cell,DC)疫苗联合杀伤细胞(cytokine induced killer,OK)的免疫治疗.16例肝癌患者中男10例,女6例,年龄29～ 70岁,中位年龄57岁.
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关键词：
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树突状细胞诱导肺癌特异性免疫应答治疗裸鼠移植瘤的实验研究
目的 利用树突状细胞递呈肿瘤抗原的能力诱导出肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用其治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤.方法 外周血单个核细胞体外经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导产生树突状细胞,负载A549肺癌细胞裂解物诱导自体CTL,经细胞毒试验和EUSA测定CTL杀伤活性和细胞因子的分泌.同时制备荷瘤裸鼠模型,不同分组裸鼠一次或多次皮下注射CTL.结果 A549冻融抗原能促进CTL增殖,可诱导产生CTL对A549细胞的特异杀伤,在效靶比为40∶1时杀伤率可达79.6%;一次接种后荷瘤裸鼠肿瘤生长减缓,多次接种肿瘤明显缩小且生存时间较对照组显著延长,具有明显的保护作用.结论 树突状细胞能有效递呈肺癌冻融抗原,诱导产生具有一定治疗功效的抗肿瘤特异性CTL,提示临床应用以树突状细胞为基础的肺癌疫苗免疫治疗具有广阔前景.
关键词： 肺肿瘤 人肺腺癌细胞A549 树突状细胞 肿瘤裂解物 裸鼠 -
IL-18基因修饰增强肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应
目的:观察经肿瘤细胞裂解物致敏的白细胞介素18(IL-18)基因修饰的树突状细胞(DC)体内诱导的抗肿瘤免疫应答反应.方法:体外培养的小鼠骨髓树突状细胞经IL-18重组腺病毒感染后(IL18-DC),再经Hepal-6肝癌细胞裂解物冲击致敏后通过皮下注射用于荷瘤小鼠的治疗.用ELISA检测细胞因子,4 h51Cr释放法检测NK细胞活性及CTL杀伤活性.结果:致敏IL18-DC组体内诱导NK细胞活性与未致敏IL18-DC组无明显差别(P＞0.05),但明显高于致敏DC组和DC组(均P＜0.01);致敏IL18-DC组体内诱导特异性CTL杀伤活性明显高于IL18-DC组、致敏DC组和DC组(均P＜0.01);致敏IL18-DC组免疫治疗作用明显优于未致敏IL18-DC组、致敏DC组和DC组(均P＜0.01).结论:肿瘤细胞裂解物致敏的IL-18基因修饰的DC疫苗进行体内免疫治疗,能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应,为DC介导的肿瘤基因治疗开辟了新的途径.
关键词： 白细胞介素18 树突状细胞 He阳1-6肝癌细胞 肿瘤裂解物 基因疗法 -
冻融抗原冲击致敏的树突状细胞诱导产生肺癌特异性免疫应答的实验研究
目的:利用树突状细胞递呈肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对肺癌细胞的杀伤活性.方法:外周血单个核细胞体外经GM-CSF和IL-4诱导产生树突状细胞,负载A549肺癌细胞裂解物的同时加入新型热休克蛋白(Hsp70L1),不同分组分别诱导自体CTLs产生.用细胞毒试验和ELISA测定CTLs杀伤活性和细胞因子的分泌.结果:A549冻融抗原致敏的DCs增加CTLs增殖,上调CTLs中CD3+和CD8+T细胞群及Th1型细胞因子的分泌;诱导的CTLs对A549细胞产生特异性杀伤;在加入Hsp70L1后效果更加明显.结论:DCs能有效呈递肺癌冻融抗原.诱导产生抗原特异性CTLs,加入免疫佐剂热休克蛋白后CTLs杀伤活性进一步增强.提示DCs在肺癌疫苗和过继免疫治疗中具有广阔的应用前景.
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树突状细胞的肿瘤个体化治疗
肿瘤免疫治疗这一概念是基于机体的免疫系统在对抗肿瘤时的调节与反应.有效的免疫治疗的主要的优点在于相对较少的副作用,针对肿瘤细胞的靶向特异性,并且能产生对抗肿瘤特异性抗原的长期记忆[1].树突状细胞在肿瘤特异性免疫反应的诱导和调节中起到重要的作用,这些细胞具有独特的激活抗肿瘤T、B淋巴细胞的功能,并且还能激活自然杀伤细胞[1] .在过去的十年间这一功能被广泛地认识到了且研发出了以树突状细胞为基础的肿瘤免疫疗法.大量实验已经证实通过接种载有肿瘤抗原的树突状细胞疫苗可以产生对抗肿瘤的免疫力[2] .然而,在肿瘤病人中有效地临床反应是有限的且尚未发现它与肿瘤特异性T细胞的诱导有直接的联系.
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胃癌肿瘤裂解物修饰的树突状细胞体外诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞
目的利用树突状细胞呈递肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对胃癌细胞的杀伤活性.方法胃细胞癌患者外周血来源的有核细胞体外经GM-CSF和IL-4诱导产生树突状细胞,负载肿瘤裂解物后诱导自体CTLs产生.用细胞毒试验检测CTLs杀伤活性,和用ELISA测定细胞因子的分泌.结果胃癌患者自体来源的DC裂解物能诱导产生的CTLs对自体胃癌细胞具有高杀伤率,可达83%;致敏的DC组中IL-12与TNF-α的浓度(1161±239 pg/ml,1044±312 pg/ml)显著高于未致敏的DC组(P<0.05).结论 DC能呈递胃癌裂解物,诱导产生抗原特异性CTLs.
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负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK治疗晚期肾癌的临床观察--附10例报告
背景与目的:肾癌的主要治疗手段是手术,但晚期肾癌术后复发率高,加上肾癌对化疗和放疗不敏感,因此,晚期肾癌预后不佳,需要寻找新的更有效的治疗方法.本研究通过负载自体肿瘤细胞裂解物的树突细胞(dendritic cells,DC)疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)治疗10例晚期肾癌,观察近期的临床疗效,免疫学反应及副作用.方法:分离患者外周血单核细胞,体外经GM-CSF和IL-4诱导产生DC细胞,并负载自体肿瘤细胞裂解物;T淋巴细胞经IFN-γ、IL-2、CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK细胞.所有患者在切除原发病灶后,接受每周一次的皮内DC疫苗注射治疗,至少8次治疗;CIK细胞过继细胞免疫治疗,每2周一次,至少接受4次治疗.临床疗效和免疫学反应分别通过影象学检查,外周血T淋巴细胞亚群改变和迟发性超敏(delayed-type hypersensitivity,DTH)反应进行评估.结果:(1)4例有可评价病灶的患者中1例部分缓解(PR),2例疾病稳定(SD),1例进展(PD);6例没有可评价病灶的患者中1例PD,1例失访,另外4例未见疾病进展.随访时间6～20个月(中位时间11个月).(2)与治疗前比较,治疗2个月后患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD56+明显升高(P＜0.05).(3)包括PR患者在内的6例患者DTH反应呈现阳性.(4)除一过性的发热、畏寒外没有其它不良反应出现.结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK细胞治疗晚期肾癌有一定的近期临床疗效,能诱导出特异的抗肾癌免疫反应,并且有良好的耐受性.
关键词： 肾肿瘤 树突细胞 细胞因子诱导杀伤细胞 免疫治疗 肿瘤裂解物 -
负载宫颈癌肿瘤裂解物的树突状细胞诱导的淋巴细胞反应
目的:利用树突状细胞(dendritic cell,DC)递呈肿瘤抗原的生物学特性,观察DC负载宫颈肿瘤裂解物抗原后能否促进同种异体T淋巴细胞增殖,并且活化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL).方法:宫颈癌患者外周血单核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导产生DC,肿瘤裂解物和TNF-α共同促其成熟,与异体T淋巴细胞混合共育,以MTT法测定T细胞的增殖程度.结果:宫颈癌患者外周血来源DC无论负载肿瘤组织裂解物还是传代肿瘤细胞裂解物,均可促进异体T细胞大量增殖,二者间无显著差异(P＜0.05).结论:DC能递呈宫颈癌肿瘤抗原,诱导产生大量抗原特异性CTL,提示负载肿瘤裂解物的DC具有为宫颈癌患者进行特异性免疫治疗的临床应用前景.
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负载宫颈癌肿瘤裂解物的树突状细胞诱导的CTL杀伤效应
目的:利用树突状细胞(DC)递呈肿瘤抗原的生物学特性,提高细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对宫颈癌细胞的杀伤活性.方法:联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导培养宫颈癌患者外周血DC,以宫颈癌组织肿瘤相关抗原(TAA)激活DC,诱导异体T细胞增殖分化为CTL,以MTT法测定CTL增殖活性及其对宫颈癌Hela细胞株的特异性杀伤活性.结果:宫颈癌患者外周血来源DC负载宫颈癌肿瘤裂解物后,可促进CTL增殖,诱导产生的CTL对宫颈癌细胞具有高效而特异的杀伤率,且显著高于异种肿瘤细胞(P<0.05).结论:DC能递呈宫颈癌肿瘤抗原,诱导产生抗原特异和高效的CTL,提示负载肿瘤裂解物的DC,具有为宫颈癌患者进行特异性免疫治疗的临床应用前景.
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个性化癌症疫苗及其佐剂
个性化肿瘤(癌症)疫苗(personalized cancer vaccines,PCVs)包括新抗原癌症(肿瘤)疫苗(neoantigen cancer vaccines,NCVs)和肿瘤裂解物疫苗(tumor lysate vaccines,TLVs).NCVs以新表位为抗原.新表位是新抗原中可以激活肿瘤特异性T细胞的免疫活性肽.新抗原是根据肿瘤细胞全基因组测序数据确定的肿瘤细胞特有的突变蛋白.TLVs以肿瘤患者的肿瘤裂解物为抗原.PCVs能激活肿瘤特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞,这些T细胞能在肿瘤患者体内抑制、杀伤肿瘤细胞,因而延长肿瘤患者的生存期.为了提高疫苗效力,PCVs必须和佐剂组成一定的剂型.可用于PCVs的佐剂有运载体、纳米颗粒、乳化剂、模式识别受体激动剂、免疫卡点抑制剂和能改变免疫抑制肿瘤微环境的制剂等.
