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染料木黄酮的抗巨噬细胞泡沫化效应及其分子机制研究
目的 研究染料木黄酮对动脉粥样硬化过程中巨噬细胞泡沫化的抑制作用,并探讨其抗泡沫化的分子作用机制.方法 采用体外ox-LDL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生泡沫化,通过油红O染色观察细胞内脂质聚集程度判定细胞的泡沫化程度以及药物效应；利用报告基因细胞检测方法评价染料木黄酮对代谢性核受体过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR和肝X受体LXR的转录调控功能的激动作用；利用实时定量PCR检测染料木黄酮对巨噬细胞中ox-LDL摄取以及胆固醇逆转运相关基因的mRNA水平.结果 ox-LDL处理的空白组小鼠RAW264.7单核巨噬细胞内聚积大量的脂质,而经过10 ug/ml染料木黄酮处理后的RAW264.7细胞内脂滴量明显减少,细胞泡沫化程度被大幅度降低.瞬时转染的细胞报告基因的转录激活效应研究结果说明,染料木黄酮对核受体PPAR和LXR均有较高的转录激活效应,其EC50值分别为3.5～9.2 μg/ml和1.6 ～ 3.3 μg/ml.定量PCR研究结果显示,染料木黄酮可以有效地使巨噬细胞中的胆固醇逆转运基因LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCGl、和SR-B1的表达上调,而作为主要摄取ox-LDL受体的CD36基因的表达无明显变化.结论 染料木黄酮可以有效抑制动脉粥样硬化过程中巨噬细胞的泡沫化,而该作用机制可能是通过激活PPAR和LXR通路,上调胆固醇逆转运蛋白的ABCA1、ABCG1、LXRα、LXRβ、SR-B1基因的表达,增强了巨噬细胞的胆固醇外排,从而防止动脉粥样硬化的发生和发展.
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EGCG和染料木黄酮在肿瘤细胞信号传导中的作用
表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin3-gallate,EGCG)和染料木黄酮是两种天然的食物组份,具有多种抗癌功效,其抑制肿瘤发生的途径一直备受关注.两者均可抑制特异的酪氨酸激酶(RTKs)及其相应的下游信号通路RAS/MAPK和PI3K/AKT途径,从而发挥其抗肿瘤作用.近年来,两者在临床研究方面也有较大的开展,但需相关的临床实验研究来确定其佳剂量、方案、毒性和临床效率,以便达到临床的优化治疗.
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Genistein与5-FU联合对人肝癌细胞MHCC97-L的抗增殖作用
目的:探讨Genistein与5-FU联合对人肝癌MHCC97-L细胞凋亡的诱导作用.方法:采用MTT法、倒置显微镜、Hoechst 33342荧光染色技术研究Genistein、5-FU、Genistein与5-FU联合3组药物不同浓度作用于体外培养的人肝癌MHCC97-L细胞后生长抑制及诱导凋亡的形态学变化.结果:Genistein、5-FU单用及联用可抑制肝癌MHCC97-L细胞的增殖,其抑制率与药物剂量和作用时间呈依赖关系；48h单用时的IC50(Genistein)为174.17 μmol/L,IC50(5-FU)为40.02 μmol/L; 48 h联用时的IC50(Genistein)为66.03 μmol/L、IC50(5-FU)为16.51 μmol/L;倒置显微镜结果显示,药物组细胞密度均明显下降,贴壁细胞出现皱缩、变圆、胞浆混浊及“空泡”现象,尤以联用药物组变化为明显；荧光染色结果显示,药物组部分细胞核呈现致密亮蓝色荧光的为凋亡细胞,凋亡指数Genistein组为17.55％,5-FU组为15.63％,联用组为30.38％.结论:两种药物单独使用均可对人肝癌MHCC97-L细胞的生长具有明显抑制作用,联合用药时,Genistein可以增强5-FU的疗效,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.
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Genistein-磁性纳米微粒对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响
目的:探讨Genistein-磁性纳米微粒(Genistein-magnetic-nanoparticles.GEN-M-NPs)对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响.方法:利用化学共沉淀法制备GEN-M-NPs,透射电镜观察纳米微粒的形态,高效液相法测定包封率.以胃癌细胞株SGC-7901为实验对象,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察GEN-M-NPs和Genistein对其增殖活性的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变情况.结果:GEN-M-NPs呈球形,粒径约105 nm,分布均匀.包封率约为10.3%.GEN-M-NPs对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).与单药Genistein作用组相比,GEN-M-NPs具有缓释性(86.04%vs 67.11%.P＜0.05).流式细胞仪检测不同浓度GEN-M-NPs作用72 h后的细胞凋亡率分别是5.62%±2.04%(10 μmol/L)、13.46%±2.02%(20 μmol/L)、26.40%±3.84%(40μmol/L)、37.34%±4.68%(80 μmol/L)、49.43%±8.29%(100 μmol/L).阴性对照组的凋亡率为2.60%±1.34%.DNA凝胶电泳结果显示40 μmol/L组作用24 h可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带.结论:GEN-M-NPs在体外能有效地抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,与Genistein相比,有缓释性.
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金雀异黄素对糖尿病大鼠糖脂代谢及肾脏的影响
目的探讨金雀异黄素(又称染料木黄酮,genistein,Gen)对糖尿病(DM)大鼠血糖、胰岛素敏感性、血脂、肾功能等代谢指标以及肾脏病理的影响.方法雄性SD大鼠45只,分为正常对照组(10只,普通饲料自由饮食)、DM组(4周组,9只;8周组,8只;普通饲料自由饮食)、DM+Gen组(4周组,10只;8周组,8只;普通饲料自由饮食+Gen 30 mg·kg-1·d-1).DM组及DM+Gen组均按60 mg/kg的剂量腹腔内注射STZ建立DM模型.于实验4周、8周末禁食12 h,处死部分大鼠取动脉血检测FBG、FIns、血脂及BUN、Cr;取肾脏制作组织切片行HE染色.结果DM 8周大鼠FBG、ISI、TC、TG、BUN、Cr分别为35.2±1.8 mmol/L、-5.83±0.20、2.50±0.61 mmol/L、1.26±0.30 mmol/L、18.4±0.7 mmol/L、70.2±7.8μmol/L,相应DM+Gen 8周组的结果分别为18.8±3.4 mmol/L、-5.27±0.47、1.43±0.19 mmol/L、1.11±0.34 mmol/L、10.0±1.7 mmol/L、51.7±4.5μmol/L.Gen可减轻肾小球肥大、肾小管扩张. 结论Gen可改善DM大鼠的糖脂代谢紊乱,减轻肾脏组织病理变化,改善肾功能,延缓糖尿病肾病的进展.
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染料木黄酮对支气管哮喘患者核因子κB和肿瘤坏死因子α的影响
支气管哮喘(简称哮喘)急性发作时患者体内产生活性氧过多导致氧化应激,核因子κB(NF-κB)表达增强致前炎因子释放.异黄酮类抗氧化剂染料木黄酮(5,7,4-三羟基异黄酮)可抑制多种细胞产生活性氧自由基.我们的研究旨在探讨染料木黄酮对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响.
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染料木黄酮对糖尿病大鼠骨微结构的影响及其机制初探
目的探讨糖尿病大鼠股骨头骨质疏松倾向变化及染料木黄酮的保护作用。方法选取清洁级4月龄成年雄性SD大鼠60只，体重（200±20）g，按随机数字表法分为3组：正常对照组（CON组）、糖尿病组（DM组）、染料木黄酮干预组（Gen组），每组20只。对DM组和Gen组予链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg左下腹腔内注射，建立速发型STZ糖尿病大鼠模型，72 h后取尾血检测血糖，凡血糖≥167 mmol/L即为糖尿病建模成功。两组均完全成模。Gen组予染料木黄酮30 mg·kg?1·d?1，1次/d，CON组注射等体积的枸橼酸缓冲液，均腹腔注射，15周后观察各组股骨头软骨下区以及FⅧ因子免疫组化表达情况。墨汁灌注行微血管相对面积(MVD)测定，分析原位杂交进行的血管内皮生长因子（VEGF） mRNA表达强度。采用小显著差异法检验及方差分析进行统计学分析。结果（1）光镜下CON组骨小梁粗厚、有完整的成骨细胞区，DM组骨小梁稀疏细薄、细胞核固缩，Gen组骨小梁排列较紧密。（2）与正常对照组比较，DM组成骨细胞减少[（13.2±1.3）比(22.4±2.5)个]，微血管相对面积增大[（8.7±0.7）%比（4.7±0.6）%]，FⅧ因子表达灰度值（137±5比164±5）及VEGF mRNA下降（186±5比213±4），出现骨质疏松倾向。（3）与DM组比较，Gen组骨质疏松倾向及微血管病变改善，成骨细胞增多[（19.2±1.9）个]、微血管单位面积降低[（5.6±0.5）%]，FⅧ因子表达灰度值[（159±7）]及VEGF mRNA表达（200±2）上升，三组间差别具有统计学意义（F=39.191~58.815，均P<0.01）。结论糖尿病早期出现骨质疏松倾向变化，染料木黄酮对糖尿病骨微结构具有保护作用。
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染料木黄酮对糖尿病股骨头生长板早闭及骨质疏松的影响
目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)对糖尿病大鼠股骨头生长板退化及骨质疏松的保护作用.方法 建立速发型链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为正常组(CON)、糖尿病组(DM)、Gen干预组(Gen).每天1次,灌胃给药(4.0 mg/kg),每组20只.15 w后光镜下作组织病理学分析及组织计量学测定;利用Van Gieson胶原纤维染色法观察胶原纤维沉积变化;ELISA测定血清蛋白聚糖和生化检测各组股骨头组织匀浆的醛糖还原酶(AR)活性.结果 CON组骨小梁粗厚、有完整的成骨细胞区.DM组骨小梁稀疏细薄、细胞核固缩;生长板厚度、生长板细胞柱密度均明显小于对照组(P＜0.01);生长板钙化区胶原纤维明显增多;AR活性增大(P＜0.01);蛋白聚糖含量明显增加(P＜0.01).Gen组骨小梁排列较紧密;生长板较DM组厚、生长板细胞柱密度大(P＜0.01).AR活性降低(P＜0.01),蛋白聚糖下调(P＜0.01).结论 染料木黄酮可减轻糖尿病生长板的萎缩退化和骨质疏松变化,防止生长板过早闭合.
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染料木黄酮对去势大鼠骨组织形态计量学参数的影响
目的研究染料木黄酮对去势大鼠股骨远端形态计量学参数的影响,为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据.方法雌性Wistar大鼠47只,按体重随机分为6组:假手术组、去势对照组、去势+雌激素组(20 μg/kg体重)、去势+染料木黄酮组(染料木黄桐剂量分别为25、50、100mg/kg体重).饲养3个月后处死,测定股骨形态计量学参数.结果去势组与假手术组比较,骨小梁体积、平均骨小梁板密度和厚度减少,平均骨小梁板间隙和类骨质宽度增加,矿化延迟时间和类骨质成熟时间延长,且差异均具有显著性(P＜0.05).染料木黄酮各组与去势组比较,骨小梁体积和平均骨小梁板厚度增加,平均骨小梁板间隙变窄,矿化延迟时间和类骨质成熟时间缩短,且差异均有显著性(P＜0.05).结论染料木黄酮有促进骨形成,减少切除卵巢后骨量丢失的作用.
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染料木黄酮通过促进VEGF表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制
目的 观察染料木黄酮(Genistein Gen)通过促进VEGF表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制.方法 建立绝经大鼠模型,6月龄雌性大鼠40只,随机分为对照组,假手术组、去势组、Gen干预6周组、Gen干预12周组.光镜下观察各组股骨头结构,分析大鼠股骨头空缺骨陷窝数的变化.ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF),观察VEGFmRNA原位杂交表达强度并分析.结果 与对照组相比,去势组骨密度值下降,Tb.Th明显下降(P＜0.05).干预10周组骨密度值明显升高,Tb.Th明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).糖尿病大鼠股骨头随病程发展骨小梁变稀薄.Gen对去卵巢大鼠血清中VEGF的表达无影响.VEGF mRNA在骨髓腔血管内皮细胞表达上升(P＜0.05).结论 Gen可促进血管内皮细胞增殖,促进血管形成,改善去势大鼠骨质疏松抗骨质疏松倾向.
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染料木黄酮对成骨细胞内游离钙、钙调素水平及ALP、ATP酶的影响
目的 研究不同浓度的染料木黄酮(genistein,GEN)对体外培养大鼠成骨细胞游离钙、钙调素、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、ATP酶的影响.方法 采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的染料木黄酮(10-8 mol/L,10-7 mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L),以妊马雌酮(商品名:倍美力)(10-8 mol/L,10-7 mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L)作为阳性对照组,用PNPP(对硝基苯磷酸盐)法测定ALP活性、放射生物法测定钙调素水平、激光扫描共聚焦显微镜测定细胞游离钙、比色法测定ATP酶活性.结果 染料木黄酮对成骨细胞钙调素、ALP、Ca2+-ATP、细胞内游离钙水平的影响呈正相关性,并与其剂量成正相关性,但这些作用均低于雌激素水平(P＜0.01).结论 染料木黄酮能增加成骨细胞ALP、Ca2+-ATP活性和钙调素水平、钙离子震荡波,并与其浓度有关,作用与雌激素相似.
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染料木黄酮对成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因表达的影响
目的 研究不同浓度的染料木黄酮(genistein,GEN)对体外培养大鼠成骨细胞C-fos、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及骨钙蛋白(osteocalcin)基因表达的影响.方法 采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的染料木黄酮(10-8 mol·L-1、10-7 mol·L-1、10-6 mol·L-1、10-5 mol·L-1),以妊马雌酮(商品名:倍美力)(10-8 mol·L-1、10-7 mol·L-1、10-6 mol·L-1、10-5 mol·L-1)作为阳性对照组,提取总RNA,RT-PCR半定量分析其表达.结果 染料木黄酮对成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因水平的影响呈正相关性,并与其剂量成正相关性,但这些作用均低于雌激素水平(P＜0.05).结论 染料木黄酮能诱导成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因的表达,并与其浓度有关,作用与雌激素相似.
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CD-TK双自杀基因系统联合染料木黄酮对鼠前列腺癌的治疗作用
CD-TK双自杀基因包含单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因,能将丙氧鸟苷(GCV)及5-氟胞嘧啶(5-Fc)等无毒的前体药物转化成毒性药物,抑制RNA及DNA合成,从而导致肿瘤细胞的凋亡,研究表明二者协同可以显著增强对肿瘤细胞的杀伤作用[1].而染料木黄酮具有弱雌激素作用,能够显著抑制前列腺癌(PCa)细胞的生长[2].我们通过实验研究探讨染料木黄酮和CD-TK双自杀基因联合应用对PCa的治疗作用,现报告如下.
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quercetin抑制肝癌增长过程中Fas基因表达变化
目的 探讨三磷酸肌醇(IP3)和Fas基因表达变化在quercetin治疗裸鼠移植人肝癌中的作用.方法 以裸鼠移植人肝癌为研究对象,对照组腹腔注入含0.04%DMSO的RPMI1640培养基0.05 ml/g,Quercetin治疗组腹腔注入quercetin 1 mg·kg-1·d-1,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织Fas mRNA表达,Western blotting分析肝癌组织Fas蛋白表达.结果 治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(15.8±10.1)mm3 vs (52.3±26.5)mm3,t=3.853,P=0.003);重量(44.8±10.4)mg vs(91.3±31.4)mg,t=3.391,P=0.004],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)pmol/mg protein vs(35.3±6.6)pmol/mg protein,t=8.322,P=0.000],Fas mRNA表达显著高于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)0.52±0.13 vs 0.36±0.09,t=2.433,P=0.038],Fas蛋白表达显著高于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.72±0.27 vs 1.08±0.15,t=5.056,P=0.000].结论 Quercetin能减少IP3生成,上调肝癌组织Fas基因表达,抑制裸鼠移植人肝癌增长.
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Genistein与5-FU诱导肝癌细胞凋亡协同作用机制研究
目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)与氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)诱导人肝癌MHCC97 L细胞凋亡的协同作用及机制.方法 Gen与5-FU单用和联用处理MHCC97-L细胞48 h,以培养液处理该细胞作为对照.MTT法检测2种药物加药顺序不同对细胞生长的影响,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bax/Bcl 2蛋白表达的变化.结果 对照组、Gen组、5 FU组、先加Gen联用组、先加5-FU联用组和同时加药组对MHCC97-L细胞生长抑制率分别为(0±5.60)％、(9.73±2.01)％、(15.97±1.75)％、(27.13±2.20)％、(31.52±2.75)％和(29.29±2.82)％,Gen与5-FU单药组可明显抑制MHCC97 L细胞增殖(P＜0.001),但两药间无明显交互效应(P＞0.05),加药顺序不同对药效无明显影响,P＞0.05.各药物组均发生细胞凋亡及细胞坏死的形态学变化,Gen组的细胞改变多为凋亡,5-FU组和联用组的细胞改变多为坏死.Gen组、5-FU组和联用组细胞凋亡率分别为(12.03±2.02)％、(8.55±3.25)％和(14.17±0.69)％,均较对照组(2.05±1.16)％高,P值均＜0.05;联用组的高,Gen组次之,5-FU组低,联用组明显高于5-FU组(P=0.009),但联用组与Gen组、Gen组与5 FU组之间差异无统计学意义,P＞0.05.Gen组、5-FU组和联用组Bax/Bcl-2蛋白表达分别为6.65±0.56、1.77±0.20和1.33±0.05,均较对照组0.339±0.004高,P值均＜0.05;联用组上调Bax/Bcl-2作用低于Gen组(P＜0.001),而联用组与5 FU组之间差异无统计学意义(P＞0.05),Gen组上调Bax/Bcl-2作用强,Gen组与5-FU组差异有统计学意义,P＜0.001.结论 Gen能明显增强5-FU诱导MHCC97-L细胞凋亡的作用;同时加药可作为Gen与5-FU联用首选的加药方式之一;Gen诱导MHCC97-L细胞凋亡可能与上调Bax/Bcl-2有关.
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微RNA-3178和三羟异黄酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231化疗敏感性的影响
目的 探讨微RNA(miRNA)-3178和三羟异黄酮(genistein,Gen)在三阴性乳腺癌化疗敏感性中的作用.方法 (1)分别用不同浓度的单药多柔比星(DOX,0.125、0.250、0.500μmol/L)、紫杉醇(PTX,0.20、0.40、0.80μmol/L)或联合Gen(2.5μmol/L)处理MDA-MB-231细胞后,用MTT法检测细胞生长情况,并计算药物的IC50;(2)采用小分子干扰RNA(siRNA)干扰技术,将miRNA-3178小干扰片段瞬时转染MDA-MB-231细胞(miRNA-3178 siRNA组),以转染无义siRNA的细胞作为阴性对照组,再用real-time PCR法检测干扰结果,并分别用不同浓度DOX或PTX处理miRNA-3178 siRNA组及阴性对照组细胞,检测2组细胞间化疗药物敏感性的差异;(3)分别用0.250μmol/L DOX、0.40μmol/L PTX及2.5μmol/L Gen处理MDA-MB-231细胞,再用real-time PCR法检测所有处理组与未处理组细胞miRNA-3178表达量的差异.2组细胞间生长抑制率及miRNA-3178表达量的比较采用t检验,多组细胞间miRNA-3178表达量的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法.结果 (1)MTT结果显示:用0.125、0.250、0.500μmol/L DOX单药处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为16.7％±0.4％、25.9％±0.1％及44.9％±0.1％,联合2.5μmol/L Gen处理后细胞生长抑制率均显著增加,分别为29.8％±0.3％、45.3％±0.4％及68.5％±0.4％,组间比较,差异均有统计学意义(t=38.12、61.57、82.70,P均<0.001);用0.20、0.40、0.80μmol/L PTX单药处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为15.3％±0.3％、27.9％±0.5％及39.2％±0.1％,联合2.5μmol/L Gen处理后细胞生长抑制率也显著增加,分别为32.7％±0.7％、48.3％±0.1％及63.3％±0.2％,组间比较,差异也均有统计学意义(t=34.41、58.63、213.91,P均<0.001).DOX单独作用于细胞的IC50为1.230μmol/L,联合2.5μmol/L Gen后,IC50降低为0.440μmol/L;PTX单独作用于细胞的IC50为0.64μmol/L,联合2.5μmol/L Gen后,IC50降低为0.27μmol/L.(2)在不同浓度DOX(0.125、0.250、0.500μmol/L)或PTX(0.20、0.40、0.80μmol/L)的作用下,miRNA-3178 siRNA组MDA-MB-231细胞生长抑制率均明显低于其阴性对照组(转染无义siRNA)(12.3％±0.6％比16.7％±0.4％,21.2％±0.9％比25.9％±0.1％,27.2％±0.9％比44.9％±0.1％,t=8.99、7.33、27.34,P均<0.050;8.8％±0.5％比15.3％±0.3％,13.4％±1.1％比27.9％±0.5％,20.2％±0.9％比39.2％±0.1％,t=16.80、17.57、30.48,P均<0.001).(3)所有处理组及未处理组细胞间miRNA-3178表达量的差异具有统计学意义(F=66.57,P<0.001).组间两两比较显示,与未处理组相比,DOX(0.250μmol/L)及PTX(0.40μmol/L)处理组MDA-MB-231细胞miRNA-3178表达量无明显变化(P=0.611、0.235),而Gen(2.5μmol/L)可显著增加MDA-MB-231细胞miRNA-3178的表达量(11.10±0.33比5.77±0.21,P<0.010).结论 Gen和miRNA-3178可能增加三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231对PTX和DOX化疗的敏感性.
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染料木黄酮抑制多柔比星诱导的多药耐药膀胱肿瘤T24细胞增殖的实验研究
目的 建立膀胱肿瘤T24细胞多药耐药(MDR)模型并鉴定其耐药特性,观察染料木黄酮对多柔比星(ADM)诱导的多药耐药T24( T24/ADM)细胞增殖的影响.方法 体外培养膀胱肿瘤T24细胞,采用ADM浓度梯度诱导,培养出具有稳定MDR表型的T24/ADM耐药细胞株,光镜观察新建细胞株的形态学特点,MTT法检测多种药物对耐药细胞株的增殖活性以及染料木黄酮对T24/ADM细胞增殖的有效作用浓度.结果 用ADM诱导6个月后的T24/ADM细胞形态无明显改变；T24/ADM细胞对多种化疗药物的耐受能力均明显提高,与亲本细胞株T24相比,耐药细胞株T24/ADM对ADM的耐药指数达15.79,对5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺的耐药指数依次为4.68、3.81、5.53.用染料木黄酮作用于T24/ADM细胞后,对T24/ADM细胞的半数抑制浓度为40 μg/ml,质量浓度为20～ 100 μg/ml的染料木黄酮具有抑制T24/ADM细胞增殖的作用.结论 建立的T24/ADM细胞具有多药耐药性,达到实验要求.质量浓度为20～ 100 μg/ml的染料木黄酮可部分抑制人类膀胱肿瘤T24/ADM细胞的增殖.
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染料木黄酮对喉癌Hep-2细胞系增殖和凋亡的影响
目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)对人鳞状细胞喉癌Hep-2细胞系增殖和凋亡的影响.方法 用CCK-8法检测不同浓度Gen对Hep-2细胞系增殖的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测Gen对Hep-2细胞系血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelialgrowth factor receptor-3,VEGFR-3) mRNA表达的影响;用流式细胞术检测Gen单独及联合VEGFR-3特异性阻滞剂MAZ51对Hep-2细胞系凋亡的影响;Western blot检测各组AKT蛋白表达及其磷酸化水平.结果 Gen可抑制Hep-2细胞系增殖,且抑制作用呈剂量依赖性;Gen能抑制Hep-2细胞系的VEGFR-3 mRNA表达,抑制率为32％;单用Gen和MAZ51均能诱导Hep-2细胞系凋亡,二者联合应用对Hep-2细胞系的凋亡诱导作用明显增强;Gen与MAZ51均能抑制AKT第308位苏氨酸(Thr308)及第473位丝氨酸(Ser473)磷酸化激活,使p-AKT-Thr308和p-AKT-Ser473减少,两种药物合用抑制率更高.结论 Gen可通过抑制VEGFR-3表达阻止AKT磷酸化激活,并发挥抑制喉癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗癌作用.
关键词： 染料木黄酮 血管内皮生长因子受体3 肿瘤 鳞状细胞 -
受体蛋白质酪氨酸激酶抑制剂影响兔晶状体上皮细胞增生的研究
目的研究受体蛋白质酪氨酸激酶(receptor protein-tyrosine kinase, RPTK)抑制剂染料木黄酮对兔晶状体上皮细胞增生和胞膜RTPK活性的影响,探讨使用染料木黄酮防治后发性白内障发生的机制.方法培养兔晶状体上皮细胞;测定5、10和15 mg/L 染料木黄酮作用晶状体上皮细胞3 d的氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷(tritiatde thymidine, 3H-TdR)掺入率,以无染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞作为对照组;应用Casnetllie改良法检测不同浓度染料木黄酮作用24 h后,兔晶状体上皮细胞膜RTPK活性的变化.结果 5、10和15 mg/L 染料木黄酮作用晶状体上皮细胞3 d的3H-TdR掺入率分别为630±137、489±166和314±98,与对照组比较差异均有显著意义(P<0.05),且细胞增生抑制率随浓度增加而升高;不同浓度染料木黄酮作用24 h后兔晶状体上皮细胞中RTPK的活性均明显下降,其中10和15 mg/L 染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞RTPK单位活性与无染料木黄酮作用者比较,差异均有显著意义(P<0.05).结论染料木黄酮在体外可通过抑制细胞膜RTPK的活性而抑制兔晶状体上皮细胞增生.
关键词： 晶体 上皮细胞 受体蛋白质酪氨酸激酶 染料木黄酮 -
染料木素对去卵巢大鼠颌骨代谢的改善作用
目的探讨染料木素对去势大鼠颌骨代谢及雌性生殖系统的作用.方法切除成年雌性大鼠双侧卵巢,造成绝经后骨质疏松的动物模型.双能X线法检测颌骨、股骨骨密度,生化法检测血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,ALP)、酸性磷酸酶(acid phosphatase ,ACP),放射免疫法检测骨代谢因子IL-1β、IL-6、转化生长因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、降钙素和骨钙素,探讨染料木素对去势大鼠颌骨代谢的作用;通过血清雌二醇含量和子宫重量的变化监测染料木素的雌激素样副作用.结果去势大鼠骨密度显著减少;血清ALP、ACP和IL-1β、骨钙素显著高于非去势组.口服染料木素后,大鼠骨密度显著增加;血清ALP、ACP、骨钙素显著增高,其中ALP和骨钙素的增加显著优于雌激素组,IL-1β和TNF-α显著降低;大鼠子宫重量系数显著低于雌激素组.结论染料木素能够通过抑制骨吸收和促进骨形成有效改善去势大鼠颌骨代谢,副作用弱于雌激素.染料木素在防治颌骨乃至全身骨质疏松方面具有开发前景.
关键词： 染料木黄酮 卵巢切除术 大鼠 Sprague-Dawley 骨质疏松
