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肝特异性微小RNA-122在原发性肝癌中的应用研究进展
微小RNA(MicroRNAs,简称为miRNAs)是一类长度约19~25个核苷酸的非编码单链小分子RNA,通过与mRNA的3’端非编码区(3'untranslated region,3'UTR)结合而介导转录后调控,在细胞的增殖、分化、凋亡、个体的发育以及疾病的发生发展中发挥着重要的作用,具有高度保守性和内源性.研究表明,miRNAs在正常组织和肿瘤组织中的表达具有明显不同,且多数miRNA基因位于与肿瘤形成相关性脆弱基因位点,推测miRNA在肿瘤发生发展过程中可能起重要作用,检测组织和(或)体液中的miRNA分子表达的变化可作为肿瘤诊断和预后评价的判断指标,为肿瘤诊断和靶向治疗提供了新的思路[1].
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如何提高慢性乙型肝炎、肝硬化抗病毒治疗的效果
1 在慢性乙型肝炎(CHB)治疗的佳策略中应关注患者的免疫调控1.1 免疫机制在CHB发病过程中起重要作用患者感染HBV后,通过抗原递呈细胞激活病毒特异性细胞免疫,并且激活多种细胞因子抑制病毒复制,如急性自限性乙型肝炎(乙肝)患者乙肝特异性CD4、CD8细胞水平升高,而CHB患者的CD4、CD8细胞水平显著低于急性乙肝[1];又如2003年Lau等进行的研究表明,8例CHB患者通过骨髓移植传递HBV特异性免疫治疗后,6例患者获得HBsAg清除.
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体外生物人工肝支持系统的疗效
临床上,各种原因所致肝衰竭的治疗问题一直是亟待解决的问题,但内科对症状支持疗法的进步并未能明显降低肝衰竭的病死率.近年来,国外在体外生物人工肝支持系统(EBLSS)研究方面取得重大进展,这种人工肝支持系统以肝细胞为主要生物成分,具有生物合成、生物转化、解毒等多种肝特异性生物代谢功能,可全面替代患病肝脏的功能.EBLSS已在动物实验及临床应用中取得了较为满意的疗效,且未见明显的副反应,因而成为当前肝衰竭治疗的重要手段.随着研究的不断深入,EBLSS的适应证也在不断拓展.今后有关EBLSS的研究重点应是通过发展人源性肝细胞材料及改进反应装置设计而达到进一步提高支持效果的目的.
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肝特异性假病毒转运系统的构建
目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段.方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因.同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白.以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测.结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle).实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl.ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达.
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肝靶向性聚集超声分子显像的实验研究
去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是哺乳动物肝实质细胞特有的高效内吞受体,肝细胞表面ASGPR的量与肝功能状态明显相关,在肝细胞损害时,其表面的ASGPR会相应减少[1],该指标可以直接反映肝的储备功能.实验中针对ASGPR这一受体,将靶向纳米脂质微囊液态氟烷超声造影剂团注入正常大鼠体内,观察该靶向超声造影剂对正常大鼠的肝特异性显影,为超声造影在体评价肝功能提供实验依据.
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miR-122启动子序列的克隆及特异性分析
目的 miRNA- 122启动子序列的预测、克隆及特异性分析.方法 分别从肝癌细胞系Huh-7及HepG2中扩增出预测的miR-122启动子,并将其克隆至含荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)报告基因pGL4.17质粒上,用重组质粒转染Huh-7、HepG2及HeLa细胞,分析启动子的特性.结果 成功预测并克隆出miR-122的启动子序列.重组质粒转染细胞后,启动子能够启动Fluc的表达.用含启动子P1的重组载体pGL4.17-P1转染HeLa细胞后,用两种荧光素酶检测体系测得重组载体中荧光素酶的表达水平显著高于对照组(t =0.000 21,P<0.01及t=0.000 38,P<0.01).结论 Huh-7、HepG2细胞中miR-122表达差异与启动子序列缺失无关.而受miR-122启动子调节的报告基因在非肝细胞系(HeLa)中也表达,表明miR-122启动子不具有肝细胞特异性.
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晚期血吸虫病的乙型肝炎血清标记物和抗LSP的测定
晚期血吸虫病(晚血)患者存在免疫机能减低.但晚血患者是否容易携带乙型肝炎病毒(HBV)、抗肝特异性脂蛋白抗体(抗-LSP)的存在及其相互联系值得探索.本文对此进行了研究,现将研究结果报告如下.
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急慢性肝炎与抗-LSP关系的初步观察
为了解急慢性肝炎与肝脏自身免疫的关系,我们自1981年以来采用对流免疫电泳放射自显影法检测了本院收治的急慢性肝炎患者血清抗肝特异性膜脂蛋白抗体(抗-LSP),现报告如下.
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异基因造血干细胞移植术后HBsAg转阴5例
异基因骨髓/外周造血干细胞移植(Allo-BMT/PBSCT)后,受体经历了免疫功能极度抑制及免疫重建的过程,其体内携带的乙型肝炎病毒(HBV)的自然病程及相应的乙肝特异性免疫力随之发生变化.
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自体造血干细胞移植术后乙型肝炎病毒标记物的变化
自体骨髓/外周造血干细胞移植(auto-BMT/PBSCT)受者经历了免疫功能极度抑制及免疫重建的过程,体内携带的乙型肝炎病毒(HBV)的自然病程及相应的乙肝特异性免疫力可能随之发生变化.我们自1990年8月-2000年5月进行了9例HBV标记物阳性的Auto-BMT/PBSCT病例,现总结如下.