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亲血栓性靶向超声造影剂增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的实验研究
目的探讨亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂体内增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的效果.方法采用三氯化铁(FeCl3)溶液诱发20只健康新西兰大白兔腹主动脉非梗阻性新鲜血栓形成;经耳缘静脉团注0.04 ml/kg的白蛋白靶向超声造影剂进行声学造影;采用目测观察和视频灰阶分析技术,评价血栓显像的增强效果.结果造影后目测观察,亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂对腹主动脉新鲜血栓增强显影达10 min以上,灰阶值为(98.463±6.3)dB,与造影前0 s[灰阶值(18.741±2.86) dB]比较相差非常显著(P＜0.001);普通白蛋白造影剂造影后血栓超声显像效果改善不明显,但灰阶值升高,为(28.862±2.15)dB,与造影前0 s比较相差显著(P＜0.05),与靶向造影剂造影后灰阶值比较相差非常显著(P＜0.001).结论亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂可显著增强兔腹主动脉内新鲜血栓超声显像效果.
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抗VEGF抗体介导靶向超声造影剂的体外实验研究
目的 以抗血管内皮因子(VEGF)抗体为配体研制能与血管内皮细胞特异性结合的靶向脂质体超声造影剂并检测其体外寻靶能力.方法 以静电吸附法将抗VEGF抗体连接到脂质体造影剂微泡的表面;体外培养ECV304人血管内皮细胞,用免疫荧光法检测靶向造影剂与其体外结合能力,以普通造影剂为对照组.结果 所制备的靶向超声造影剂与普通微泡无显著差异;免疫荧光实验结果显示靶向造影剂能在体外与血管内皮细胞特异性结合.结论 携抗VEGF抗体的脂质体靶向造影剂能通过静电吸附法成功制备,且在体外能与血管内皮细胞特异性结合.
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免疫脂质体超声造影剂增强荷肝癌裸鼠肿瘤显像的实验研究
目的探讨人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂对荷肝癌裸鼠肿瘤的增强显像效果.方法采用人肝癌细胞株HHCC接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠模型;将靶向脂质体超声造影剂或普通脂质体超声造影剂经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,使用二次谐波显像模式观察并记录造影过程;采用目测观察和视频灰阶分析技术,以时间-强度曲线分析来定量评价肿瘤显像的增强效果.结果造影后目测观察,靶向造影剂对肿瘤有延迟增强显像效果,靶向造影剂组肿瘤的增强显影约在8 min达到峰值,峰值灰阶强度值为(39.545±10.099) dB;普通造影剂组肿瘤增强显影达峰值时间约为10 s,峰值灰阶强度值为(22.438±5.108) dB,与靶向造影剂造影后灰阶强度峰值比较相差显著(P＜0.01).结论人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂可以增强荷人肝癌裸鼠的肿瘤超声显像效果.
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含氟烷人血白蛋白靶向超声造影剂的制备研究
目的 为靶向超声造影剂的制备进行基础实验研究.方法 将含氟烷人血白蛋白超声造影剂与ICAM-1抗体混合,加入0.1 %戊二醛,4 ℃孵育2 h,促使抗体与微泡外壳充分交联.普通光镜评估靶向微泡的大小、形态.免疫荧光法进行靶向微泡的鉴定.结果 普通光镜下可见携ICAM-1抗体的靶向微泡大小、形态与普通白蛋白微泡对照无明显改变.荧光显微镜证实微泡与ICAM-1抗体整合成功.结论 戊二醛交联法适用于白蛋白靶向超声造影剂的制备,方法简便,成本低,重复性好.
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能量多普勒显像定量评价兔肾炎症组织靶向造影实验研究
目的 用能量多普勒显像(PDI)定量评价兔缺血再灌注损伤肾靶向造影效果.方法 将自制活性白细胞靶向造影剂和普通造影剂对兔缺血再灌注损伤肾行超声造影,采集造影前及造影后15 min PDI图,用国产DFY型超声图像定量分析诊断仪对肾彩色与总面积比(CP/TP值)及彩色强度(CI值)进行定量分析,并与肾组织髓过氧化物酶活性作相关性分析.结果 造影后15 min,靶向组CP/TP值及CI值显著大于普通组(P均＜0 .001),且与反映肾组织炎症程度的髓过氧化物酶活性有良好相关性(P＜0.05,r ＝0.842和r＝0.823).结论 PDI可定量评价兔缺血再灌注损伤肾靶向造影的增强效果.
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靶向超声造影剂对卵巢癌新生血管的评价
目的 应用携血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)单抗的靶向超声造影剂(MBt),探讨靶向造影剂对裸鼠卵巢癌移植瘤新生血管的应用价值.方法 裸鼠卵巢癌SKOV3细胞株皮下移植瘤模型的建立;采用“生物素亲和素桥连接法”制备MBt;荷瘤鼠分别注射MBt与普通超声造影剂(MBc)行超声造影检查并分析各组时间强度曲线(TIC)相关参数;免疫组化检测肿瘤组织新生血管VEGFR2的表达.结果 成功制备携VEGFR2单抗的MBt;MBt组峰值强度较MBc组高(P＜0.01),MBt组持续时间较MBc更长(P＜0.01);免疫组化示肿瘤组织内新生血管内皮VEGFR2高度表达.结论 携VEGFR2单抗MBt能够与裸鼠卵巢癌移植瘤新生血管内皮特异性结合并实现靶向分子超声显像,对卵巢癌新生血管形成的评估提供了新方法.
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携Gelsolin单抗靶向相变型超声造影剂的制备及体外靶向实验
目的 制备一种以凝溶胶蛋白(GSN)为靶点的包裹液态氟碳的纳米级PLGA高分子造影剂(GSN-PLGA-PFP),并评价其体外热致相变、靶向及显影能力.方法 采用双乳化法及碳二亚胺法制备靶向相变型高分子超声造影剂.检测此造影剂的一般性质;显微镜加热板法进行热致相变;激光共聚焦显微镜体外观察GSN-PLGA-PFP被小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移Hca-F细胞摄取的情况,初步评价其寻靶能力;体外低强度聚焦超声(LIFU)仪辐照后观察其超声显影效果.结果 GSN-PLGA-PFP的平均粒径为(328.59±3.82) nm,造影剂表面平均Zeta电位为(-10.36±1.34)mV,造影剂表面GSN单抗连接率高达98.31％,且于43.5℃时纳米粒开始发生相变;体外摄取实验显示Hca-F细胞可较多地摄取GSN-PLGA-PFP,体外行LIFU辐照后可观察到显影效果明显增强.结论 自制携Gelsolin单抗包载PFP的PLGA造影剂热致相变效果明显,可与Hca-F细胞特异度结合且体外显影效果较好.
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靶向造影剂对卵巢癌血管生成拟态的超声评价
目的 探讨携带抗金属基质蛋白酶2 (MMP2)单克隆抗体的靶向超声造影剂(MBt)对裸鼠卵巢癌移植瘤血管生成拟态(VM)的应用价值.方法 以生物素-链霉素桥连法构建MBt,免疫荧光法体外检测造影剂与抗体的链接情况;建立小鼠卵巢癌SKOV3细胞株模型,分别注射MBt和普通超声造影剂(MBc)进行超声造影检查.分析各组的时间-强度曲线(TIC)相关参数,并行肿瘤组织血管生成拟态MMP2免疫组化的检测.结果 成功制备携抗MMP2单抗的MBt;造影结果表明MBt组较MBc组达峰时间提前、持续时间更长(P＜0.01),两组峰值强度之间的差异无统计学意义(P＞0.05),MBt组峰值强度有二次高峰现象出现;免疫组化证明肿瘤组织血管生成拟态中MMP2高表达.结论 携MMP2靶向造影剂在体内能与特异度表达MMP2受体的血管拟态特异度结合,能较好地评估卵巢癌血管拟态状况.
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动脉血栓靶向超声显像的体内实验研究
目的探讨白蛋白血栓靶向超声造影剂体内增强动脉血栓超声显像的效果.方法采用FeCl3溶液诱发30只健康新西兰大白兔腹主动脉非梗阻性新鲜血栓形成;经耳缘静脉团注0.04 ml/kg的白蛋白超声造影剂进行超声造影,分为靶向组(20只)和非靶向组(10只);采用视觉观察评价血栓显像增强效果.结果 29只(29/30)兔模型建立成功;造影后视觉观察,靶向组18例达到2级增强效果,1例为1级增强效果,1例死亡;非靶向组仅2例达到1级增强效果,两组比较差异显著(P<0.01).结论白蛋白血栓靶向超声造影剂可显著增强兔腹主动脉内新鲜血栓超声显像效果.
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靶向超声造影显像研究现状与进展
现代医学影像学已从传统的解剖结构成像,逐步发展进入了功能成像与分子显像时代,分子影像学的概念早是由 Weissleder 等[1]提出,即应用影像学方法,对活体状态在细胞和分子水平的生物过程进行定性和定量研究.其目的是通过各种成像工具,对体内的重要分子,特别是对一些疾病的产生、发展有重要作用的分子及传导途径进行成像,以便对疾病进行早期诊断和治疗.传统的分子影像技术包括 MRI、SPECT/PET、光学成像等.超声分子影像学是应用超声影像学方法,通过靶向超声造影剂与体内特异性配体结合,观察靶组织在组织、细胞及亚细胞水平的成像,以此达到在体反映病变组织在分子基础上的变化[2,3].随着对超声造影剂尤其是纳米造影剂研究的深入,靶向超声造影在疾病诊断中的作用越来越受到重视.
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关键词：
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肝靶向性聚集超声分子显像的实验研究
去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是哺乳动物肝实质细胞特有的高效内吞受体,肝细胞表面ASGPR的量与肝功能状态明显相关,在肝细胞损害时,其表面的ASGPR会相应减少[1],该指标可以直接反映肝的储备功能.实验中针对ASGPR这一受体,将靶向纳米脂质微囊液态氟烷超声造影剂团注入正常大鼠体内,观察该靶向超声造影剂对正常大鼠的肝特异性显影,为超声造影在体评价肝功能提供实验依据.
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靶向超声造影剂的修饰与生物连接技术
靶向超声分子成像的出现使超声成像进入一个新的发展阶段,它是以靶向超声造影剂作为示踪剂,通脱造影剂与靶组织异表达分子的有效结合,采用对比超声产生靶组织分子水平显影的一种新型超声成像技术.
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靶向超声造影剂在肿瘤分子显像中的研究进展
靶向超声造影剂可与肿瘤新生血管内皮细胞或肿瘤组织细胞特异性表达的生物分子相结合,实现肿瘤分子显像,从而提高超声诊断的准确性与敏感性,为肿瘤的早期诊断与治疗以及研究肿瘤细胞发生、发展及凋亡的在体活动规律开辟了新领域.
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平行板流动腔在靶向超声造影剂研究中的进展
近年来,靶向超声分子成像的发展十分迅猛,靶向超声造影剂在靶组织中的特异聚积程度是实现超声分子成像的关键,决定这种特异聚积程度的重要因素是靶向超声造影剂的靶向黏附效能.在评价靶向超声造影剂黏附效能的众多技术和方法中,新兴的平行板流动腔技术展示了其特有的优势,并被认为是体外评价靶向超声造影剂黏附效能有用的方法,本文就平行板流动腔在靶向超声造影剂研究中的进展作一概述.
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超声破坏促黄体生成激素释放激素靶向微泡联合紫杉醇对卵巢癌OVCAR3细胞株的影响
目的 探讨超声破坏卵巢癌靶向超声造影剂(ovarian cancer targeted ultrasound contrast agent,OCTUCA)即黏附促黄体生成激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)的脂质体微泡(LM)联合紫杉醇对人卵巢癌OVCAR3细胞株增殖、凋亡及细胞内药物浓度的影响.方法 在体外培养OVCAR3细胞株,经MTT比色法检测紫杉醇对OVCAR3体外治疗的有效浓度,然后分别用OCTUCA、紫杉醇、紫杉醇联合超声、超声破坏脂质体微泡联合紫杉醇及超声破坏OCTUCA联合紫杉醇进行处理,MTT检测细胞增殖抑制率、流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率、高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内紫杉醇浓度.结果 紫杉醇对OVCAR3体外治疗的有效浓度是10-6mol/L,超声破坏OCTUCA联合紫杉醇组细胞增殖抑制率及凋亡率均明显高于OCTUCA、紫杉醇、紫杉醇联合超声、超声破坏脂质体微泡联合紫杉处理组(P均<0.05),超声破坏OTUCA联合紫杉醇组细胞内药物浓度明显高于紫杉醇、紫杉醇联合超声、超声破坏脂质体微泡联合紫杉醇处理组(P<0.01).结论 超声破坏OCTUCA联合紫杉醇能使OVCAR3细胞内紫杉醇药物浓度增加,抑制其增殖,并诱导其凋亡.
关键词： 卵巢癌 靶向超声造影剂 促黄体生成激素释放激素 OVCAR3 -
肿瘤新生血管靶向超声造影剂的实验研究
目的 制备分别携带VEGF和CD34抗体以及同时携带2种抗体的靶向超声造影剂,并对其体外寻靶能力及免疫活性进行鉴定.方法 采用吸附法制造3种靶向超声造影剂,每种靶向超声造影剂又根据微泡与抗体的配比比例及pH值具体各分为6组,共18组(实验组).使用荧光免疫法,在体外鉴定每个实验组的寻靶能力及免疫活性.同时,设普通造影剂对照组、二抗代替一抗对照组.在电镜下计算靶向超声造影剂的结合率,并进行比较.结果 电镜及光镜下观察,靶向超声造影剂为圆形,大小及分布较均匀,无任何聚集现象.荧光显微镜下观察,MBv实验组、MBc实验组、MBB实验组与靶向超声微泡结合的内皮细胞胞浆表达为绿色,而未与靶向超声微泡结合的内皮细胞及其他实验组、普通造影剂对照组与二抗代替一抗对照组均未表达.电镜下观察,靶向超声微泡组部分内皮细胞与靶向微泡结合,MBv实验组的结合率为3.475 5％±0.139 2％,MBc实验组的结合率为3.544 4％±0.214 5％,MBB实验组的结合率为3.682％±0.1246％,各组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而其他实验组及对照组未见与微泡结合的内皮细胞.结论 自制的3种靶向超声造影剂在体外有寻靶能力及免疫活性,可用于动物肿瘤模型新生血管的体内特异性靶向显影的实验研究.
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前列腺癌PC3细胞靶向纳米微泡造影剂的制备及体外寻靶研究
目的 制备前列腺癌PC3细胞的纳米级靶向超声造影剂,观测其物理性质,并检测体外寻靶能力.方法 采用旋转蒸发法、机械震荡法制成普通纳米微泡和生物素化纳米微泡,通过生物素-亲和素法将生物素化抗6次跨膜前列腺上皮抗原(six transmembrane epithelial antigen of the prostate,STEAP-1)抗体与生物素化纳米微泡连接制成靶向前列腺癌PC3细胞的纳米微泡造影剂,并利用免疫荧光观察结合情况;观察及检测微泡的形态、分布、粒径及一周内粒径的变化情况;利用显微镜观察纳米靶向微泡对前列腺癌PC3细胞的体外靶向效果.结果 成功制备空白纳米造影剂及载STEAP-1抗体的靶向纳米微泡造影剂;两种超声纳米微泡呈圆形,分布均匀,无聚集;一周后两种微泡粒径的变化无显著性差异(P>0.05).体外寻靶实验中,靶向纳米微泡聚集在前列腺癌PC3细胞表面,预先用生物素化STEAP-1抗体处理的PC3细胞表面没有靶向纳米微泡聚集.结论 通过旋转蒸发法、机械震荡法和生物素-亲和素法可成功制备载STEAP-1抗体的靶向纳米微泡造影剂,此造影剂能够在体外与前列腺癌PC3细胞特异性靶向结合.
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携抗HER-2抗体PLGA高分子纳米超声造影剂的制备及其体外寻靶实验
目的 以高分子聚合物聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)为成膜材料制备携抗HER-2抗体空心纳米靶向超声造影剂,并考察其体外寻靶及显像效果.方法 以樟脑为致孔剂,通过改进的双乳化溶剂挥发法制备PLGA纳米超声造影剂,利用扫描电子显微镜、透射电子显微镜及激光粒度仪对其一般特性进行表征;并用碳二亚胺法将造影剂与抗HER-2抗体耦联制备携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,用激光共聚焦扫描显微镜对其体外寻靶能力进行初步评估,考察其体外成像效果.结果 PLGA纳米超声造影剂的平均粒径为(152.00±58.08)nm,粒子呈规则球形,大小均一,分散性好.体外寻靶实验显示,携抗HER-2抗体的PLGA靶向造影剂较多牢固地聚集到乳腺癌细胞表面.体外成像实验显示,PLGA靶向纳米超声造影剂显像呈细腻均匀的点状高回声,后方回声未见明显衰减.结论 本研究成功制备了携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,其能与HER-2受体高表达的乳腺癌细胞体外特异性靶向结合,且体外显像效果较好.
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靶向血管内皮生长因子受体2超声造影剂的制备及其体外寻靶能力实验研究
目的：制备靶向血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2)超声造影剂，评价其物理性质及对肿瘤细胞的寻靶能力。方法：利用生物素-亲和素桥接法将微米级超声造影剂USphere与VEGFR2抗体结合，制备靶向VEGFR2超声造影剂，检测其粒径分布；用免疫荧光法检测不同细胞株(高转移肝肿瘤细胞MHCC-97H及正常肝细胞LO2)中VEGFR2表达强度，以及靶向与非靶向VEGFR2超声造影剂对MHCC-97H和LO2细胞的结合能力。结果：靶向VEGFR2超声造影剂微泡分布均匀，平均粒径(1012.67±78.59) nm，免疫荧光法显示VEGFR2抗体可特异性连接于微泡表面。标记荧光的VEGFR2抗体在MHCC-97H细胞高表达，在LO2细胞低表达。免疫荧光定量显示靶向VEGFR2造影剂在MHCC-97H细胞中的荧光强度比值(微泡荧光强度/细胞荧光强度)为0.75±0.32，显著高于其他3组(P＜0.01)。结论：本研究成功制备靶向VEGFR2超声造影剂，其大小稳定均一，可与高表达VEGFR2的MHCC-97H细胞特异性结合。
