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胃十二指肠疾病时胃液表皮生长因子及CagA幽门螺杆菌感染的关系
为探讨胃液表皮生长因子(EGF)含量变化及幽门螺杆菌(Hp)感染与胃十二指肠疾病的相关性.以幽门螺杆菌感染阳性的78比例消化性溃疡和61例慢性胃炎患者为研究对象.健康人20例作对照,观察办液EGF含量变化与胃十二指肠疾病的相关性.结果发现,消化性溃疡和浊性胃炎患者胃液EGF含量分别为175.1±103.5ng/L和240.9±182.1ng/L.明显低于政党人119.±54.1ng/L(均P<0.01)消化性溃疡患者EGF含量明显低于慢性胃炎患者P<0.01.具有CagA基因的Hp感染的消化性溃疡患者EGF含量明显低于慢性胃炎组,P<0.05.表明胃液EGF含量与Hp感染有关,尤其是具有CagA基因的幽门螺杆菌感染.
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表皮生长因子促进子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa增殖
目的研究表皮生长因子(EGF)对子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa增殖的影响,并探讨雌激素受体α(ERα)和Ack1在其调控机制中的作用.方法无雌激素环境下,EGF作用于Ishikawa细胞,CCK-8法检测子宫内膜腺癌细胞增殖;Western blot检测细胞ERα及Ack1磷酸化;用酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼处理细胞后,检测Ishikawa细胞增殖和ERα及Ack1磷酸化状态.结果EGF可增强Ishikawa细胞增殖(P<0.05),并促进ERα Tyr-537特异位点磷酸化和Ack1磷酸化;用达沙替尼后,细胞增殖能力下降(P<0.05),ERα Tyr-537特异位点磷酸化和Ack1磷酸化水平下调.结论EGF促进Ishikawa细胞增殖,其机制可能与诱导ERα Tyr-537特异位点磷酸化和激活Ack1激酶通路有关.
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钙蛋白酶抑制EGF诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞体外增殖
目的 观察钙蛋白酶对表皮生长因子(EGF)诱导的雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞增殖的影响.方法 体外培养人乳腺肿瘤系MDA-MB-231,经10 ng/mL EGF处理后,用蛋白印迹法检测FAK和CANP1蛋白表达.用CANP抑制剂Calpeptin (CALP)预处理对EGF上述效应的影响;通过集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力.结果 EGF可诱导FAK蛋白表达上调及蛋白剪切反应(P＜0.01),也可诱导CANP1自身蛋白剪切(P＜0.05),上述效应可被CALP显著削弱或阻断(P＜0.05);EGF还可诱导MDA-MB-231细胞集落形成(P＜0.05),此效应也可被CALP预处理显著抑制(P＜0.05).结论 CANP可能成为抑制ER阴性乳腺癌细胞增殖的一个潜在药物作用靶点.
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血红素加氧酶-1抑制香烟烟雾提取物致体外人肺A549细胞黏液高分泌
目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对香烟烟雾提取物(CSE)所致人气道黏液高分泌的影响.方法 用CSE刺激A549细胞,复制黏液高分泌细胞模型.分为对照组、CSE组、氯化高铁血红素(Heroin)组和锌原卟啉(ZnPPIX)组,观察黏蛋白(MUC)5AC、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化(P)-EGFR、HO-1及双功能氧化酶1(Duoxl)的表达.用MTT法测定细胞活性;RT-PCR法检测HO-1、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA;Western blot法检测P-EGFR、EGFR、Duox1和HO-1蛋白;ELISA法检测细胞裂解液中MUCSAC蛋白表达.结果 CSE组MUC5AC的mRNA吸光度积分相对值和蛋白水平分别为0.660±0.044和(157±3)μg/mg,较对照组0.412±0.043和(105±8)μg/mg明显升高(P＜0.05),p-EGFR蛋白水平、EGFR、HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组明显增高.与CSE组相比,Hemin组140-1 mRNA及蛋白进一步增高,而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUCSAC的mRNA和蛋白水平明显回降.与对照组相比,ZnPPIX组HO-1 mRNA及蛋白水平无明显增高,而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平明显增高.结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断香烟烟雾诱导EGFR活化的上游信号途径,减少EGFR活化,从而抑制MUCSAC的表达.
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EGF对HaCaT细胞中神经元限制性沉默因子表达的影响
表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)在皮肤的发育、稳态维系和创伤修复中起重要作用.EGF能够通过与受体结合激活下游信号通路,促进角质形成细胞的增殖,此过程中涉及多种转录调控因子的参与,其中包括Kruppel转录因子家族的神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencing factor,REST/NRSF),REST能够与NRSE/RE1(neuron-restrictive silencer element,NRSE;又称repressor element 1,REl)等序列结合,使组蛋白去乙酰化,阻遏基因转录[1].本文研究了EGF对皮肤角质形成细胞HaCaT细胞系中REST表达的影响,为探索REST在角质形成细胞中的调控机制提供依据.
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EGF促进人羊膜间充质干细胞迁移上调MMP14和IL-1β表达
目的 研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响.探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制.方法 贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF对hAMSCs迁移能力影响；Western blot和real-time PCR检测MMP14和IL-1β白及mRNA表达.结果 原代细胞表达间充质干细胞表面标记CD44,不表达CD45；不同浓度EGF作用hAMSCs 24 h 100μg/L EGF迁移指数大为2.0；100 μg/L EGF作用hAMSCs12、24和48 h迁移指数为1.6、2.0和1.7；MMP14蛋白表达12h为(0.81 ±0.20)显著高于对照组的(0.63±0.12)(P＜0.05); IL-1β蛋白表达48 h为(0.55 ±0.16)显著高于对照组的(0.30 ±0.05) (P＜0.05) MMP14和IL-1β mRNA表达上调显著高于对照组(P＜0.05).结论 EGF促进hAMSCs迁移上调MMP14和IL-1β表达；MMP14、IL-1β和EGF协同激活MAPK/ERK、P13K/AKT信号通路参与调控EGF促进hAMSCs迁移.
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EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析
目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制.方法 采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-PCR检测进行验证.结果 筛选出差异表达基因104个(FDR≤0.001和|log2 Ratio|≥1),其中上调差异表达基因56个,下调差异表达基因48个；GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异(P≤0.05)；KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异(Q≤0.05),RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致.结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化,显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复过程中具有重要作用.
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食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子、表皮生长因子和表皮生长因子受体mRNA的表达
目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子(NS),表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达及其相互关系. 方法 采用原位杂交技术检测62例食管鳞状细胞癌组织,31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中NS、EGF和EGFR mRNA的表达阳性率,并分析食管鳞状细胞癌患者不同临床病理参数间NS、EGF和EGFR mRNA的表达阳性率及三者之间的相关性. 结果 正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA的阳性表达率分别为21.0%(13/62)、25.8%(8/31)和69.4%(43/62);EGF mRNA阳性表达率分别是40.3%(25/62)、48.4%(15/31)和77.4%(48/62);EGFR mRNA阳性表达率分别是30.6%(19/62),45.2%(14/31)和75.8%(47/62).食管鳞状细胞癌组织中NS、EGF和EGFR mRNA的阳性表达率与肿瘤的组织学分级,浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA表达与EGFmRNA和EGFR mRNA的表达呈正相关(分别为r=0.394,r=0.604,P<0.05). 结论 食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA与EGF mRNA和EGFR mRNA的表达呈正相关,NS mRNA、EGF mRNA和EGFR mRNA在食管癌的发生、发展过程中可能起重要作用.
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定向诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞分化的研究
目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的佳条件.方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中.向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、β-NGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分化.用靛青绿摄入试验和α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白(ALB)免疫细胞化学染色鉴定原始生殖细胞向肝细胞分化的状况.结果与胎肝组织分隔培养2 d,可见原始生殖细胞向肝样细胞分化,分化细胞呈圆形和星形,圆形细胞多呈簇状,可以摄入靛青绿呈绿色,并呈AAT和ALB免疫阳性着色,培养12 d时分化率达80%.肝细胞提取液也可诱导原始生殖细胞向肝样细胞分化,12 d时分化率达70%以上;0.5g/L和1 g/L的肝细胞提取液的诱导分化率无显著差异;但是0.5 g/L提取液诱导组圆形细胞较多;而1 g/L肝提取液诱导组,星状分化细胞多.β-神经生长因子(β-NGF)诱导4 d,可见肝样细胞出现,随诱导时间延长,分化细胞增多,圆形分化细胞较多,12 d时分化率达60%以上;20 μg/L和50 μg/L两种浓度的β-NGF诱导分化率无显著差异.bFGF、EGF、RA诱导组未见ALB免疫反应阳性细胞.RA可以增强β-NGF的诱导分化作用,使星状细胞增多明显.结论β-NGF和肝细胞因子可诱导原始生殖细胞向肝细胞定向分化.
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X线辐射对仔鼠大脑颞叶皮层结构及乙酰胆碱酯酶活性、Bax蛋白和表皮生长因子表达的影响
目的 探讨X线辐射对仔鼠大脑颞叶皮层结构及大脑乙酰胆碱酯酶(AChE)活性、颞叶Bax蛋白和表皮生长因子(EGF)表达的影响.方法 对160只仔鼠(出生6～7d)用不同吸收剂量(0Gy、1Gy、3Gy、5Gy、7Gy)X线进行全身辐射,分别在辐射后1d、5d、10d和20d,用比色法检测仔鼠大脑皮层AChE活性的变化,用免疫组织化学方法检测颞叶皮层中Bax蛋白和EGF的表达,光学显微镜下观察仔鼠大脑颞叶皮层结构的变化.结果 X线辐射影响仔鼠大脑的生长发育.X线辐射仔鼠后,1Gy组在5d～20d时颞叶Bax蛋白阳性细胞数低于对照组,EGF阳性细胞数高于对照组,差异不显著(P>0.05),AChE活性高于对照组,差异显著(P<0.05);3Gy组EGF阳性细胞数和AChE活性先降低后升高,Bax蛋白阳性细胞数先增多后减少,差异显著(P<0.05);5Gy、7Gy组Bax蛋白和EGF呈强阳性表达,阳性细胞数高于对照组,AChE活性低于对照组,差异极显著(P<0.01).辐射组仔鼠大脑颞叶皮层变薄、结构模糊,除1Gy组在1d时仔鼠大脑颞叶皮层第Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ层,在5d时第Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层及在20d时第Ⅱ、Ⅴ层的细胞面密度值高于对照组以外,其他辐射组颞叶皮层细胞密度值均低于对照组.结论 X线辐射影响了仔鼠大脑颞叶皮层的组织结构,这可能与大脑中AChE酶活性的降低及Bax蛋白、EGF表达的变化有一定关系.
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人胎儿睾丸发生过程中表皮生长因子与细胞增殖核抗原的表达
目的观察表皮生长因子(EGF)与细胞增殖核抗原(PCNA)在人胎儿睾丸发生过程中的表达特征,探讨两者在睾丸发生中的作用. 方法用SP免疫细胞化学技术检测了人胎儿12～32周睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞EGF、PCNA阳性细胞表达率. 结果 EGF在胎儿12周龄睾丸组织未见表达,16～32周龄睾丸间质细胞呈阳性表达,16～20周为表达高峰,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P<0.01);PCNA在胎儿睾丸间质细胞、支持细胞和生殖细胞均有不同程度表达,16～20周为表达高峰,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P<0.01). 结论 EGF与PCNA在人胎儿睾丸发育过程中有不同程度的表达,表明EGF与PCNA在睾丸发育过程中起着一定的作用.
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脾虚胃溃疡大鼠分裂原激活的蛋白激酶信号传递分子的研究
目的探讨脾虚证时分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路中信号分子表皮生长因子(EGF)、胞外信号调节激酶(ERK)的变化及加味四君子汤治疗脾虚证的机理.方法HE染色、免疫组织化学反应、免疫印迹法.结果脾虚胃溃疡大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞内EGF阳性反应产物的含量增加,胃黏膜磷酸化的ERK减少,胃溃疡愈合延迟;经过加味四君子汤治疗后,上述异常变化得到纠正. 结论EGF信号传递分子表达的变化可能是脾虚胃溃疡的发病机理之一,加味四君子汤能通过纠正这些变化而发挥治疗作用.
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海洛因依赖期间大鼠下颌下腺EGF及IL-2阳性细胞的免疫组织化学研究
目的 观察海洛因依赖对大鼠下颌下腺表皮生长因子(EGF)及白细胞介素2(IL-2)阳性细胞形态及功能的影响.方法 正常SD大鼠,随机分为空白对照组、盐水对照组及海洛因依赖组.皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,分别于第10、17、24、31、38d取下颌下腺组织.用免疫组织化学SABC法、图像分析及细胞计数方法进行研究.结果 1.与空白对照组相比,盐水对照组大鼠下颌下腺EGF、IL-2阳性细胞的数量及强度均无明显改变.2.海洛因依赖期间,大鼠下颌下腺EGF、IL-2阳性细胞的免疫反应增强,细胞数量明显增加(P<0.05).图像分析结果显示,在整个海洛因依赖期间,EGF、IL-2 阳性细胞的平均灰度值始终低于空白组及盐水对照组(P<0.05).3.EGF与IL-2在大鼠下颌下腺内分泌细胞中有共存现象.结论 在海洛因依赖期间,大鼠下颌下腺EGF、IL-2阳性细胞的数量及反应强度均发生了规律性改变,提示大鼠下颌下腺分泌的EGF及IL-2参与了机体对海洛因依赖的调节过程.
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卵泡刺激素对体外孵育大鼠下颌下腺分泌NGF和EGF的影响
目的 通过确定卵泡刺激素(FSH)与神经生长因子(NGF)或表皮生长因子(EGF)在大鼠下颌下腺的共定位关系,研究FSH在体外对大鼠下颌下腺组织分泌NGF和EGF的影响. 方法 采用邻片免疫组织化学共定化方法 ;体外孵育大鼠下颌下腺组织并给予不同浓度FSH,应用酶联免疫分析方法 检测上清液中NGF和EGF的含量. 结果 大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞、颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞均呈FSH、NGF及EGF免疫反应阳性,FSH与NGF或EGF有共存性;当FSH浓度大于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而降低;当FSH浓度小于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而升高. 结论 FSH在体外对NGF或EGF分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对下颌下腺内分泌具有调节功能.
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生长因子对成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞增生的影响
目的探讨EGF、TGFα、TGFβ1、PDGF、bFGF对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响. 方法在原代培养的成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞中,加入不同种类、不同剂量的生长因子,作用48h,测定3H-TdR掺入、细胞数量和Ki-67标记指数. 结果 EGF、TGFα均促进肺泡Ⅱ型细胞3H-TdR掺入量、细胞数量及Ki-67阳性标记率增加,TGFα比EGF的作用更强;TGFβ1的作用与EGF、TGFα相反.EGF、TGFα和TGFβ1对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响均呈明显量效关系.PDGF和bFGF对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响未显示出明确的量效规律.同时或先后加入TGFα和TGFβ1,肺泡Ⅱ型细胞的增生反应不同. 结论 EGF、TGFα和TGFβ1对培养的成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞增生有明显的调控作用;TGFα和TGFβ1共同作用于细胞时,其生物效应与加入不同因子的时序有关.
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表皮生长因子诱导人脐静脉内皮细胞迁移过程中波形蛋白及基质金属蛋白酶2的表达变化
目的 观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移过程中表皮生长因子(EGF)对波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,分析波形蛋白与EGF促HUVECs迁移能力的关系.方法 EGF处理HUVECs细胞10h后,采用细胞划痕实验检测HUVECs细胞的迁移水平,荧光显微镜下观察细胞的形态变化情况;免疫荧光染色观察划痕诱导HUVECs迁移时波形蛋白的表达变化;Western blotting和RT-PCR法分析MMP-2及波形蛋白表达.结果 EGF刺激后HUVECs的迁移能力上升1.8倍,迁移细胞的形态发生改变,由铺路石样变为长梭形,同时波形蛋白和MMP-2的表达上调(P＜0.05).结论 EGF促进HUVECs的迁移过程中可明显上调波形蛋白和MMP-2的表达,波形蛋白与HUVECs的迁移相关.
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中电导钙激活钾通道调节表皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞体外增殖
目的 观察表皮生长因子(EGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)离子通道中电导钙激活钾通道(KCa 3.1)表达的影响,以及KCa 3.1在EGF诱导HUVECs体外增殖过程中的作用.方法 MTT法筛选EGF佳实验浓度;免疫荧光和Western blotting技术检测EGF对HUVECs细胞KCa 3.1的表达;经KCa 3.1阻断剂TRAM-34处理,MTT法分析EGF诱导的HUVECs增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期,RT-PCR法分析细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)表达的水平.结果 EGF处理细胞48h后,MTT实验证实25 μg/L浓度的EGF促细胞增殖效应强.免疫荧光染色显示,EGF明显促进KCa 3.1蛋白表达,且Westernblotting提示KCa 3.1的表达上调1.4倍.进一步研究显示,高选择性阻断剂TRAM-34阻断KCa 3.1通道48h后EGF的促细胞增殖作用显著下降,并呈时间和剂量依赖性;细胞周期G1期细胞百分比明显增加;CDK4的mRNA表达下调,而cyclinD1表达无明显变化.结论 KCa 3.1可能通过影响细胞周期进程调节EGF诱导的HUVECs增殖过程.
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海洛因戒断复吸对大鼠睾丸表皮生长因子、嗜铬粒素A表达及血清卵泡刺激素与黄体生成素的影响
目的 探讨海洛因戒断、复吸对大鼠睾丸表皮生长因子(EGF)、嗜铬粒素A(CgA)免疫反应(IR)细胞、血清卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)的影响.方法 正常雄性SD大鼠63只,随机分为实验组21只、盐水对照组21只和正常对照组21只,实验组大鼠又分戒断组、脱毒组和复吸组.取正常对照组、盐水对照组及实验各组大鼠的睾丸组织和血清,采用免疫组织化学SABC法、图像分析法及放射免疫法进行研究.结果 戒断组中EGF-IR细胞染色加深,免疫反应强度增强,平均灰度值降低(P＜0.05);脱毒组EGF-IR细胞免疫反应强度有所下降,但仍强于正常及盐水对照组(P＜0.05);复吸组EGF-IR细胞免疫反应强度减弱,平均灰度值升高(P＜0.05).戒断组CgA-IR细胞免疫反应强度减弱,平均灰度值升高(P＜0.05);脱毒组CgA-IR细胞免疫反应强度在脱毒后逐渐恢复;复吸组CgA-IR细胞染色变浅,平均灰度值升高(P＜0.05).放射免疫测定结果表明,LH在大鼠戒断和复吸期间处于较低水平(P＜0.05),脱毒期间与正常组和盐水组比较无明显差异;FSH在大鼠戒断、脱毒、复吸期间变化差异无统计学意义.结论 海洛因戒断、复吸期间大鼠睾丸EGF-、CgA-IR细胞的分泌及血清LH、FSH水平发生改变,参与了机体的内分泌调节.
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T3对人神经干细胞分化为少突胶质细胞的影响
目的以体外诱导生成的人神经干细胞(NSCs)为模型,研究甲状腺激素(TH)对其分化的影响. 方法无菌状态下取因治疗目的而终止妊娠的胎龄10～22周的人胎大脑半球,机械法分散细胞后,以105个/ml细胞密度接种于含N-2配方的DMEM/F12培养基中,同时添加表皮生长因子(EGF,20μg/L)和/或碱性成纤维生长因子(bFGF,20 μg/L).采用自然分化以及T3诱导的方法诱导分化,免疫组织化学方法鉴定分化后的细胞类型,抗体分别为NF-200、GFAP、Gal-C,并采用抗MBP、O4、A2B5抗体鉴别少突胶质细胞发育的不同阶段.结果T3有助于向胶质细胞方向发展,包括少突与星形胶质细胞,MPB阳性细胞比例超过80%,尤其在EGF+T3组,这种现象更为突出.结论NSCs的定时分化是内外源信号共同作用的结果.TH就是这样一种信号,激活"生物钟"机制的效应组件,在有限次的分化后诱导NSCs分化为少突胶质细胞.
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猪肾脏中表皮生长因子mRNA活性的研究
目的研究表皮生长因子(EGF)基因在猪肾脏中的表达部位. 方法采用RT-PCR技术分别检测猪肾皮质和髓质中的EGF mRNA活性. 结果公猪和母猪肾皮质中的EGF mRNA活性均很高,而髓质中则无EGF mRNA活性. 结论 EGF仅在猪肾脏皮质中表达,无性别差异.
