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IFA检测SARS CoV的应用研究
利用本室分离的SARS CoV F69毒株[1,2],采用间接免疫荧光方法(IFA),对我省在SARS流行期间临床确诊为SARS病人、SARS病毒感染死亡病例、聚集性感染者、首例SARS病毒感染者、与SARS病人密切接触的高危人群、健康人等血清样本507份,进行了SARS CoV特异性抗体(IgM、IgG)的检测.
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小鼠心脏移植后穿孔素及颗粒酶B表达水平与急性排斥反应的关系
目的:研究穿孔素和颗粒酶B蛋白在心脏移植后表达水平变化与心脏移植急性排斥反应的关系.方法:采用小鼠腹部心脏移植模型,分为移植排斥组、实验处理组和同系移植组,每组20对.观察移植物存活时间、供心病理改变.采用Western blot法检测受鼠脾脏淋巴细胞穿孔素及颗粒酶B蛋白表达水平,免疫荧光方法观察心脏移植物内穿孔素及颗粒酶B的表达情况.结果:移植排斥组及实验处理组移植物平均存活时间分别为7.8±0.77 d、14.80±1.01 d,同系移植组移植物存活均超过28 d,三组差异有显著性.移植排斥组与实验组及同系移植组相比较,移植物内心肌细胞变性坏死严重并有大量炎性细胞浸润.移植术后7 d,移植排斥组与实验处理组和同系移植组相比,受鼠脾脏淋巴细胞穿孔素蛋白表达分别增加3.02倍、4.13倍,颗粒酶B蛋白表达分别增加3.44倍、2.50倍,差异有显著性.与另外两组相比,移植排斥组心脏移植物冠状动脉分支内充填大量穿孔素与颗粒酶B阳性细胞,组织间隙内也有较多双阳性细胞浸润.结论:穿孔素与颗粒酶B蛋白表达增加与急性排斥反应相关,可作为急性排斥反应的早期诊断指标.
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TNF-α影响肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白的表达
目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-o)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接的影响.方法:应用免疫荧光方法检测在肿瘤坏死因子(TNF-α)0,50,100和200 μg/L作用下,与结肠癌上皮细胞株(CaCo2细胞株)共同培养24 h,以及用TNF-α100μg/L与CaCo2细胞共同培养0,4,8和24 h,观察TNF-α对紧密连接蛋白(zonula occluden 1,ZO-1)表达的影响.并应用半定量RT-PCR方法检测TNF-α用上述相应的时间和浓度作用后对肠黏膜上皮细胞ZO-1 mRNA表达的影响.结果:用TNF-α100和200μg/L作用24h后ZO-1的免疫荧光明显减少,并呈剂量依赖性;用TNF-α 100 μg/L作用24 h时ZO-1免疫荧光明显减少,并呈时间依赖性.应用半定量RT-PCR的方法检测结果:TNF-α作用24 h时,ZO-1 mRNA从TNF-α 0 μg/L的1.1926降至100 μg/L的0.7834和200 μg/L的0.7081;TNF-α100 μg/L作用4 h,ZO-1mRNA为(95.5±5.5%);8 h为(82.0±5.4%);24 h降至低为(67.7±5.7%),与对照组相比P<0.01.结论:TNF-α是通过抑制肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1表达引起肠黏膜上皮细胞间紧密连接破坏.并且是通过抑制ZO-1 mRNA引起肠上皮细胞ZO-1蛋白表达降低.
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外周血淋巴细胞γ-H2 AX的RL/G值分析:一种新的用于辐射事故伤员分类诊断和剂量估算的方法
在应对大规模的核与辐射事故过程中,对伤员进行快速分类诊断和快速剂量估算,是核事故医学救援的重要问题之一。目前,以染色体畸变为代表的生物剂量估算方法并不能满足大规模核与辐射事故中批量伤员的分类诊断和快速剂量估算的需要。近年来的研究报道表明,外周血淋巴细胞中γ-H2AX分析是一种非常有潜力的生物剂量估算方法。目前,对于外周血淋巴细胞中γ-H2AX的分析主要有两种方法:①荧光显微镜分析细胞中γ-H2AX聚集点。这种方法准确度高,灵敏度高,但是分析速度慢;②采用流式细胞术结合细胞免疫荧光方法分析细胞中γ-H2AX含量,这种方法分析速度快,但是实验重复性差,存在个体间和个体内差异大的问题,降低了其实际应用价值。王治东等的“Ratio of γ-H2AX level in lymphocytes to that in granulocytes detected using flow cytometry as a potential biodosimeter for radiation exposure”一文建立了一种基于流式细胞快速分析外周血淋巴细胞中γ-H2AX含量的新方法。该方法保留了流式细胞分析的快速、高通量等优点,同时解决了目前流式细胞分析外周血淋巴细胞γ-H2AX方法存在个体间和个体内差异大的问题,该研究对生物剂量计领域具有重要的意义。
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不同方法检测健康人群肾综合征出血热隐性感染率的分析
肾综合征出血热(HFRS)是我国广泛流行的一种人畜共患急性病毒性传染病.目前该病在我国的发病率占全球总数的 90%,病死率为 3%~10%,是除病毒性肝炎外危害大的一类病毒性疾病.为了更好地控制肾综合征出血热,每年都对 HFRS 感染率进行监测.由于 HFRS 临床表现复杂多样,病情变化迅速,给临床诊断带来困难.目前血清学检测方法仍然是 HFRS 辅助诊断的有效手段.以往采用间接免疫荧光方法(IFAT)对健康人群进行 HFRS-IgG 检测,感染率很低,是否反映 HFRS 流行的真实情况.鉴于有文献报道对IFAT 评价说法不一,我们收集了 100 份健康人血,用间接免疫荧光法 IFAT 及 ELISA 双抗原夹心法同时检测 HFRS IgG 抗体及总抗体.比较两者检测结果,为今后监测方法提供依据.
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层粘连蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达
层粘连蛋白(Laminin LN)是细胞外基质中重要的大分子非胶原糖蛋白,由座落于基膜上的上皮细胞、内皮细胞及被基膜包绕的肌细胞、垂体细胞合成并分泌贮存于基质中.研究表明,LN与细胞膜表面受体结合后可产生多种生物学作用,如介导上皮细胞生长、增殖、分化,促进细胞粘附、辅展、移动,并在肿瘤细胞转移过程中起重要作用.有人曾用间接免疫荧光方法对小鼠早期胚胎进行研究,发现LN在桑椹胚和内细胞团及其滋养层均有较强的阳性反应,在外胚层与内胚层之间的细胞外基质中可见LN呈条带状荧光.但有关胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化研究报道较少.本实验用免疫组化ABC法,对小鼠子宫内膜腔上皮基膜和腺上皮基膜中LN的表达进行观察,探讨在胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化及其作用.
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活化型表皮生长因子受体和转录调节因子E2F在尖锐湿疣中的表达
活化型表皮生长因子受体(EGFR)指磷酸化后的表皮生长因子受体,是一种相对分子质量为170000、具有生物学活性的跨膜糖蛋白.其广泛分布于哺乳动物细胞膜上,直接参与细胞的信号转导,促进细胞的增殖和分化;E2F是一种细胞周期依赖性转录调节因子,它存在于细胞核内,能调节细胞的基因表达,与细胞增殖直接相关.尖锐湿疣(CA)是一种由人类乳头瘤病毒(HPV)引起的皮肤粘膜良性增殖性病变.为了研究EGFR和E2F在尖锐湿疣增殖中的作用,我们采用免疫荧光方法分别观察了活化型EGFR和E2F在尖锐湿疣皮损中的表达情况,现报道如下.
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阿奇霉素联合鱼腥草注射液治疗小儿支原体肺炎40例
肺炎支原体(MP)感染临床报道较多,由于MP不仅可以引起肺炎支原体肺炎(MPP),还可导致多系统的免疫损伤[1],在儿科,婴儿常致混合感染,病程迁延,给临床诊断、治疗增加了难度.作者于2000年11月~2001年5月,使用阿奇霉素联合鱼腥草注射液治疗小儿肺炎支原体肺炎(MPP)40例,报道如下.1 资料与方法1.1 临床资料住院患儿60例,随机分为治疗组和对照组.治疗组40例,其中男27例,女13例,年龄4个月~8岁,平均4岁5个月,病程5天~2个半月,平均10天;对照组20例,男13例,女7例,年龄3个半月~7岁,平均4岁2个月,病程4天~2个月,平均9.5天.两组年龄、性别和病程比较差异无显著性(P>0.05).MPP临床诊断标准参照许积德小儿内科学[2].实验室诊断标准:(1)血冷凝集试验;(2)间接免疫荧光方法检测肺炎支原体IgM抗体;(3)PCR检测肺炎支原体DNA.如果第1项1∶32以上2次递增或第2、3两项之一阳性即可诊断.本组60例,全部符合临床及实验室诊断标准.
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微波微量免疫荧光检测斑点热立克次体方法的建立
目的建立微波免疫荧光检测斑点热立克次体的方法.方法通过微波促免疫荧光染色佳时间、佳火力的选择及微波免疫荧光方法与常规免疫荧光方法敏感性的比较.结果表明:微波法反应速度快,只需15min就可以观察结果,大大缩短了检测时间,提高了工作效率,并且两种方法在特异性上没有显著性差别.结论我们认为微波免疫荧光方法是一种简便的、实用的快速检测立克次体的方法.
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两种方法检测流行性出血热IgG抗体效果评价
流行性出血热(EHF)是病死率高、对我国人民的健康危害较严重的急性传染病之一.为了更好地控制EHF,每年都对EHF的感染率进行监测.以往采用间接免疫荧光方法(IFA)对健康者进行EHF-IgG抗体检测,但感染率很低.基于此种情况,2000年采用IFA和ELISA两种方法检测EHF-IgG抗体,比较两者检测结果,为今后的检测方法提供科学依据.
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冠心病患者肺炎衣原体感染的研究
目的:探讨肺炎衣原体感染与冠心病之间的关系.方法:采用微量免疫荧光方法检测76例冠心病(包括急性心肌梗塞)患者和76例对照组患者的外周血肺炎衣原体IgG、 IgM抗体;采用PCR法检测以上所有病人的鼻咽拭子.结果:两组患者IgG抗体的几何平均滴度差异显著(P<0.05).IgG、IgM抗体阳性率在冠心病组(包括急性心肌梗塞)分别为75.4%、23.1%,而在对照组分别为52.1%和5.2%,差异均有显著(P<0.05).152例患者中IgG、 IgM抗体阳性率男性分别为66.3%、15.1%,女性分别为60.6%和13.6%,男性略高于女性,但男女相比没有显著差异.152例患者中PCR阳性率为15.8%,与血清学检测结果相比较,PCR阳性者90.0%满足肺炎衣原体急性感染的诊断指标.
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促炎性细胞因子诱导NF-κB激活促进神经细胞凋亡机制
目的:探讨细胞凋亡机制中核转录因子κB(NF-κB)的激活及信号转导机制.方法:用IL-1β,TNFα处理大鼠皮层培养的神经细胞,采用四唑盐比色法(MTT),乳酸脱氢酶释放率及免疫荧光方法反映细胞生存力和损伤指标,western blot分析检测NF-κB,JNK,ERK,Hsp27蛋白的表达水平.
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妇女毛滴虫病的治疗性干预
1背景阴道毛滴虫病是常见性传播疾病之一.据估计全世界每年约有1.2亿妇女患毛滴虫病(WHO1994).在发展中国家的某些社区中呈现为一种常见的感染性疾病,其感染的特征为:阴道黄绿色泡沫样分泌物,性交疼痛,外阴、阴道酸痛和瘙痒,排尿疼痛等.但许多患者可无症状,故临床诊断为非特异性的,必需经实验室确诊.通常可在阴道分泌物、腺体(前庭大腺和女尿道旁腺)、尿道中找到寄生虫.湿涂片法是廉价快速的诊断方法,但其敏感性取决于检测者的经验和阴道寄生虫的数量.也可采用标准培养、转运/培养试剂盒、酶免测定、核酸扩增和免疫荧光方法.