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RT-PCR测定SARS患者粪便及漱口液中SARS CoV RNA及其临床意义
目的对46例SARS患者206份粪便及漱口液标本,检测SARS CoV,探讨SARS患者恢复期排毒的情况.方法对住院的46例临床确诊SARS病人,留取粪便及同期漱口液各103份,提取RNA后利用14对SARS CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,凡1次RT-PCR结果阳性,该标本即判定为阳性.结果103份粪便标本中,63份(61.2%)SARS CoV阴性,40份(38.8%)阳性,阳性者的病程为30.75d±11.27d(12 d～64d).103份漱口液标本中,81份(78.6%)阴性,22份(21.4%)阳性,阳性者的病程为29.82 d±12.46 d(12 d～64d).病程长64d时粪便及漱口液中依然发现SARS CoV病原学依据.患者同期粪便及漱口液RT-PCR检测结果一致的有61份(59.2%),不一致的有42份(40.8%).结论SARS患者恢复期排毒可长达64d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该得到足够的重视.SARS患者粪便SARS CoV RNA阳性,而同期漱口液SARS CoV RNA阴性,提示SARS CoV可以直接经消化道传播.
关键词： 严重急性呼吸综合征 SARS相关冠状病毒 套式RT-PCR -
传染性非典型肺炎患者血清细胞因子水平动态观察
目的研究传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征(SARS),探讨患者在不同发病阶段血清中多种细胞因子的变化、发病机理及与免疫反应的关系.方法应用Randox公司产生的EVIDENCEl80全自动化学发光生物芯片分析仪,对90名健康成年人和34例确诊SARS患者的早、中、晚3期血液标本分别进行了12项细胞因子的定量检测,以比较不同发病阶段各种细胞因子的变化趋势.结果SARS患者血清中的细胞因子水平除IL-1β没有显著变化外,其他各项变化均比较明显.其中,IL-6、IL-8、IL-10及干扰素γ与健康人比较显著上升;而IL-1α、IL-2、IL-4、血管内皮生长因子、表皮生长因子、单核细胞趋化蛋白-1及肿瘤坏死因子α与健康对照组比较显著下降.结论各种血清细胞因子在SARS患者不同发病时期有较大变化,发病早期尤为明显,本结果进一步支持SARS患者的病理损伤过程与免疫失调有关.
关键词： 严重急性呼吸综合征 SARS相关冠状病毒 细胞因子 生物芯片 -
SARS患者病原学诊断及病毒传播规律研究
目的探讨血清抗SARS-CoV特异性LgG、IgM;外周血单核细胞、漱口液以及粪便SARS-CoV特异性套式RT-PCR检测SARS-COV RNA在SARS确诊中的意义,并通过研究其系列标本,进一步探讨SARS-CoV特异性IgG、IgM出现规律及病毒传播规律.方法临床诊断SARS患者28例,1周采集2次血清、大便及漱口液系列标本.ELISA测定血清抗SARS-CoV特异性IgG、IgM,套式RT-PCR检测外周血单核细胞、漱口液以及粪便SARS-CoV RNA.结果血清SARS-COV-IgM阳性率为50%(14/28);SARS-COV-IgG阳性率为78.6%(22/28).早期(-10天)IgG可出现;4周阳性率高;IgG出现晚(11天-),2-3周阳性率高;持续时间短(11天-),4周后大部分患者阴转.PBMC SARS-COVRNA阳性率为32.1%(9/28),病程10-14天阳性率高;漱口液SARS-COVRNA阳性率为57.1%(16/28),大便SARS-COVRNA阳性率为60.7%(17/28);病程2-3周阳性率高.85.7%(24/28)可确诊SARS;14.3%不能确诊SARS.结论SARS诊断必须加入病原学诊断标准,而且必须结合特异性抗体、外周血单核细胞、漱口液以及大便SARS-CoV RNA检测,综合判断.由于SARS患者特异性抗体出现晚等特点.因此,SARS特异性抗体不能作为早期诊断.SARS患者病程2-3周传染性可能强,而早期(10天内)传染性可能弱.
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2株SARS相关冠状病毒主要结构蛋白基因的多态性分析
目的:分析2株SARS相关冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus,SARS-CoV)HK21378和BJi04的主要结构蛋白基因序列的多态性以及蛋白质结构变化与功能的关系.方法:提取组织培养物中的SARS-CoV基因组RNA,对RT-PCR产物进行测序;以GZ02为参照序列,对蛋白质编码序列进行基因多态性分析和蛋白质结构与功能关系分析.结果:①与SARS-CoV GZ02株相比较,HK21378和BJi04主要结构蛋白编码序列共有14个变异位点,其中9个变异位点为两者共有,3个变异位点见于HK21378,2个变异位点见于BJ104;与GenBank数据库已发表的103株SARS-CoV基因组数据比较,变异位点22901(T→G)为BJ104特有,未见于已发表的其他SARS-CoV基因组中;在14个多态位点中,有5个多态位点为同义突变,其余9个为非同义突变.②14个变异位点中有11个变异发生在S蛋白编码区,其碱基变异频率为3.7/kb;2个见于M蛋白编码区,其碱基变异频率为3.0/kb;1个见于N蛋白编码区,碱基变异频率为0.8/kb;而E蛋白编码区未见变异位点.结论:SARS-CoV的主要结构蛋白编码区容易发生变异,尤其是膜表面S蛋白和M蛋白编码区.
关键词： SARS相关冠状病毒 结构蛋白基因 多态性 -
SARS病毒s1基因片段真核表达载体的构建及免疫效果
本研究根据GenBank登录的BJ01株SARS-CoV序列合成801bpS1基因片段,该片段被亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)得到重组质粒pcDNA3.1(+)/S1;转染Hela细胞,SDS-PAGE、Western-Blotting鉴定蛋白表达;肌注免疫BALB/c小鼠,利用ELISA法检测免疫后小鼠的抗SARS/CoVIgG及IFN-γ水平,MTT法检测T细胞增殖活性.结果显示,重组质粒pcDNA3.1(+)/S1可在Hela细胞内表达S1蛋白,免疫后小鼠的T细胞增殖活性增强,抗SARS-CoVIgG与IFN-γ水平升高.本实验说明pcDNA3.1(+)/S1可诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫应答.
关键词： SARS相关冠状病毒 S1基因 免疫活性 真核表达 -
广西健康接触者及哺乳动物感染SARS相关冠状病毒的血清学调查
目的:了解广西人群接触者及哺乳动物感染SARS相关冠状病毒的情况和IgG抗体滴度及亲和力的差异.方法:用间接ELISA法检测人和哺乳动物血清SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(H)和刺突糖蛋白S1片段(S1)IgG滴度,并测定相应抗体的总亲和力.结果:接触者N和S1IgG阳性率分别为3.24%和11.15%,抗体几何平均滴度(GMT)为1∶2.71和1∶7.02,抗体亲和力为(1.72±0.24)mol/L和(1.92±0.21)mol/L;猕猴N和S1 IgG阳性率分别为5.80%和60.87%,GMT为1∶26.50和1∶112.36,抗体亲和力为(0.80±0.14)mol/L和(2.26±0.14)mol/L;其它哺乳动物除狗S1 IgG阳性率为3.33%,其余动物N和S1 IgG均无阳性检出.结论:人健康接触者及猕猴等哺乳动物可隐性感染SARS相关冠状病毒,S1IgG阳性率由高到低依次为猕猴、人、狗;人及猕猴感染病毒时,S1 IgG阳性率均高于N IgG阳性率;猕猴S1 IgG亲和力显著高于N IgG亲和力.
关键词： 哺乳动物 SARS相关冠状病毒 IgG 滴度 亲和力
