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β-淀粉样蛋白与载脂蛋白E4对大鼠海马胆碱乙酰转移酶的影响
目的 观察β-淀粉样蛋白(Aβ)和载脂蛋白E(apoE)4对大鼠海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)的影响以及二者是否具有协同作用.方法 将雄性Wistar大鼠分为4组:对照组海马注射生理盐水,Aβ组注射Aβ1-40,apoE4组注射apoE4,Aβ+ apoE4组注射Aβ1-40+apoE4.水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力,原位杂交法检测海马CA1区ChAT的表达.结果 大鼠第5天的逃避潜伏期、跨台次数、ChAT mRNA PU值分别为:对照组(10.75 s±2.44 s,4.13 ±0.64,28.90±4.43)、apoE4组(23.88 s ±4.32 s,2.38 ±0.52,20.85±3.98)、Aβ组(43.50s±9.78 s,1.38±0.52,16.96 ±2.53)、A β+ apoE4组(70.63 s±10.04 s,0.75 ±0.71,13.01±2.21).apoE4组、Aβ组与对照组比较大鼠第5天的逃避潜伏期明显延长,跨台次数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01)；Aβ组与apoE4组比较,大鼠第5天的逃避潜伏期明显延长,跨台次数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01)；Aβ与apoE4之间存在交互作用(F=7.098,P＜0.01).apoE4组、Aβ组比对照组ChAT mRNA PU值下降明显(均P＜0.01)；Aβ组比apoE4组ChAT mRNA PU值下降明显(P ＜0.01)；Aβ+ apoF4组比对照组、apoE4组及Aβ组均下降明显(均P＜0.01)；Aβ与apoE4具有交互作用(P＜0.05).结论 (1)Aβ及apoE4均可损伤海马胆碱能系统,影响大鼠学习记忆能力；Aβ对海马胆碱能系统及学习记忆能力的损伤比apoE4严重.(2)Aβ与apoE4对海马胆碱能系统及学习记忆能力的损伤具有协同作用.
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孕烯醇酮对老年大鼠记忆相关脑区胆碱乙酰转移酶表达的影响
目的 观察孕烯醇酮对老年大鼠记忆相关脑区胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的影响.方法 雄性老年大鼠40只,随机分为空白组、溶剂组、小剂量孕烯醇酮组、大剂量孕烯醇酮组,每组10只.隔日腹腔注射1个月,通过免疫组织化学技术分别检测各组大鼠额叶、颞叶、海马皮质区ChAT表达情况.结果 与空白组比较,大剂量孕烯醇酮组大鼠额叶、颞叶、海马皮质区ChAT免疫阳性细胞明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);而溶剂组和小剂量孕烯醇酮组ChAT阳性细胞数无明显增加,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大剂量孕烯醇酮可以显著改善老年大鼠胆碱能系统活性.
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纳米粒介导ROCK-Ⅱ-siRNA基因治疗阿尔茨海默病的体内研究
目的 探讨海马内注射PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA纳米复合物对阿尔茨海默病模型小鼠(SAMP8)学习、记忆、认知及海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的影响.方法 6月龄SAMP8 15只小鼠分为治疗组(8只)及阴性对照组(7只),另选5只SAMPR1鼠作为正常对照组.治疗组给予PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA,N/P＝50、阴性对照组给予PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-Scr,正常对照组给予生理盐水,给药均为海马注射,3 d给药1次,给药5次.30 d后各组进行Morris水迷宫检测行为学改变,免疫组织化学检测海马ChAT的表达.结果 PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA治疗组与阴性对照组相比,定位航行试验潜伏期显著缩短[第1天:(37.02±3.30)s vs.(40.68±3.59)s,t =2.77,P ＜0.01;第3天(23.00±2.70)s vs.(31.35±1.80)s,t =3.35,P ＜0.01],穿越目的 象限区域次数明显增加(4.50±1.68 vs.2.41±0.76,t =1.97,P =0.096),目的 象限停留距离比值(0.66±0.25 vs.0.34±0.05,t =2.49,P ＜0.05)及时间比值(0.57±0.13 vs.0.30±0.04,t =3.95,P ＜0.01)都较阴性对照组提高,海马组织ChAT活性也增加(CA1区阳性率0.32±0.08 vs.0.17±0.01,t =25.21,P ＜0.01;CA3区阳性率 0.32± 0.02 vs.0.16±0.01,t =17.91,P ＜0.01),差异具有统计学意义.治疗组与正常对照组相比,Morris水迷宫结果及海马组织ChAT活性无统计学差异.结论 脑内注射PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA纳米复合物能提高SAMP8鼠的学习和记忆能力,这种作用可能通过增加海马组织ChAT含量而得以实现.
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阿米三嗪-萝巴新对慢性间断性缺氧大鼠学习记忆能力的改善及相关生化机制的探讨
目的探讨阿米三嗪-萝巴新(almitrine-raubasine) 对慢性间断性缺氧 (chronic episodic hypoxia, EHYP)大鼠学习记忆能力和脑内胆碱乙酰转移酶 (choline acetyltransferase, ChAT) 活性的影响,为寻找改善阻塞性睡眠呼吸暂停 (OSAS) 患者学习记忆障碍的方法提供实验依据.方法建立EHYP大鼠模型(EHYP组,9只),并给予阿米三嗪-萝巴新 (0.03片/250 g体重,每天2次) 干预(治疗组,9只),并设不行缺氧处理大鼠为对照组(7只).用被动避暗回避反射试验评价大鼠学习记忆能力,潜伏期 (STL) 越长,学习记忆能力越强;用放射化学法测定大鼠皮层、海马和纹状体ChAT活性.结果与对照组相比,EHYP组大鼠STL明显短于对照组和治疗组(P<0.01),各脑区ChAT活性明显低于对照组和治疗组(均P<0.01).结论阿米三嗪-萝巴新可改善EHYP大鼠学习记忆能力并提高其脑内ChAT活性.
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骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠中枢胆碱能系统的保护作用研究
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对老年性痴呆(AD)大鼠中枢胆碱能系统的保护作用及机制.方法 雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字法分为)双侧穹隆海马伞(FF)切断模型组(模型组,复制AD模型),假手术对照组(SOC组,除不切断双侧FF以外,其他操作同模型组),骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗组(BMSCs组,在模型制作成功2周后,每只大鼠接受1×106个BMSCs治疗).采用免疫组化法检测海马胆碱能神经纤维胆碱乙酰转移酶(CHAT)的表达,RT-PCR检测基底前脑神经生长因子(NGF)mRNA表达.结果 模型组在FF切断术后6周,其海马ChAT阳性神经纤维的积分光密度值(1 249.71±143.25)明显低于SOC组(2 059.58±166.69,P<0.05),BMSCs组(1 807.02±133.85)与模型组相比,ChAT阳性纤维数量增多(P<0.05).模型组基底前脑神经元NGF mRNA表达水平(0.45±0.08)与SOC组(1.14±0.12)比较明显降低(P<0.05),BMSCs组(0.78±0.09)较模型组有所升高(P<0.05).结论 BMSCs移植治疗对AD模型大鼠中枢胆碱能系统有保护作用,其机制可能与BMSCs移植上调基底前脑神经元NGF的表达有关.
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淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35所致大鼠学习记忆障碍的改善作用
目的 观察淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 Wistar雄性大鼠,右侧海马内注射Aβ25-35 10 μg制备AD模型,次日起淫羊藿苷30, 60和120 mg·kg-1灌胃给药,连续14 d,d 15～19 Morris水迷宫检测大鼠空间辨别学习记忆能力;d 20检测海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合酶(NOS)的活性,免疫组化法检测海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达.结果 与模型对照组比较,淫羊藿苷给药14 d明显改善大鼠学习记忆能力;海马组织中 SOD和GSH-PX活性升高,NOS活性降低;海马内AChE及ChAT的表达增加.结论 淫羊藿苷可以改善Aβ25-35海马内注射所致AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用可能与其增加AChE和ChAT表达,增强SOD和GSH-PX等自由基清除酶活性,降低NOS活性,减少NO释放等多种机制,促进胆碱能递质系统功能的恢复有关.
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狗食管下括约肌处射频控温热凝术后病理学及神经递质变化的研究
目的：探讨射频控温热凝术（RFT）对家狗食管下括约肌（LES）处病理组织及神经递质胆碱乙酰转移酶（ChAT）、血管活性肠肽（VIP）和一氧化氮合酶（NOS）表达的影响及可能机制。方法15只家狗随机分为3组：进行胃镜检查并饲养3个月（Sham）组、RFT后饲养24 h（RFT+24 h）组、RFT后饲养3个月（RFT+3 m）组。取LES组织采用HE染色法观察3组的病理组织学变化，免疫组化法观察Sham组和RFT+3 m组ChAT、VIP和NOS的表达情况。结果HE染色结果显示Sham组接近正常组织，RFT+24 h组黏膜出现急性炎症反应和结构破坏，RFT+3 m组黏膜出现慢性炎性反应和结构重构；免疫组化结果显示RFT+3 m组与Sham组相比，ChAT明显升高，VIP、NOS明显下降（均P<0.01）。结论 RFT可使狗的LES厚度和压力增加，并造成局部组织内神经递质发生表达变化。
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术后睡眠剥夺对老龄大鼠海马胆碱乙酰转移酶表达的影响
目的 探讨术后睡眠剥夺对老龄大鼠海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,体重500～ 600 g,20月龄,采用随机数字表法将其分为4组(n=12):对照组(C组)、手术组(O组)、睡眠剥夺组(S组)和术后睡眠剥夺组(OS组).OS组于脾切除术清醒后,S组于相应时点采用小平台水环境法制备睡眠剥夺模型,剥夺睡眠24 h.于术后24 h时行Morris水迷宫实验.水迷宫测试完成后,行海马CA1区ChAT阳性细胞计数.结果 与C组比较,O组和OS组术后逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越原平台次数减少,海马CA1区ChAT阳性细胞数减少(P＜0.05),S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与O组比较,OS组术后逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越原平台次数减少(P＜0.05),海马CA1区ChAT阳性细胞数差异无统计学意义,S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,OS组术后逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越原平台次数减少,海马CA1区ChAT阳性细胞数减少(P＜0.05).结论 术后睡眠剥夺诱发老龄大鼠术后认知功能减退的机制与海马ChAT的表达无关.
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三七总皂苷对阿尔茨海默病大鼠脑胆碱能神经的保护作用
背景:现代医学目前对阿尔茨海默病尚无有效的治疗方法,三七总皂苷治疗阿尔茨海默病已引起重视和关注,但其作用机制仍不十分清楚.目的:观察具有化瘀止血、活血定痛功效的三七总皂苷对阿尔茨海默病动物模型大脑胆碱能神经病理损害的保护作用.设计:完全随机分组设计,对照试验.单位:广西中医学院神经科学研究所.材料:实验于2003-06/2005-04在广西中医学院中药药效研究实验室完成,选用清洁级健康Wistar大鼠90只,雌雄各半.其中15月龄老年鼠75只,3月龄青年鼠15只.方法:实验于2003-06/2005-04在广西中医学院中药药效研究实验室(广西重点实验室)完成.①选用清洁级健康Wistar大鼠90只,雌雄各半.其中15月龄老年鼠75只,3月龄青年鼠15只.设3月龄15只为青年对照组.于15月龄75只中随机抽取15只作为老年对照组.对其余60只大鼠进行造模.以D-半乳糖腹腔注射致亚急性损伤合并鹅膏蕈氨酸损毁双侧大脑Meynert基底核建立阿尔茨海默病大鼠模型.青年对照组和老年对照组均在相同条件下以生理盐水作平行对照.②2周后将存活的造模大鼠随机分为4组:模型组,三七总皂苷高、低剂量组和石杉碱甲组,每组12只.三七总皂苷高、低剂量组分别按200和100 mg/kg灌胃三七总皂苷(云南玉溪维和制药厂生产),1次/d;石杉碱甲组按0.3 mg/kg灌胃给药,1次/d,连续4周;模型组、青年对照组和老年对照组以等体积的生理盐水灌胃,连续4周.③给药结束后行大脑组织病理切片,利用免疫组织化学方法检测大脑切片胆碱乙酰基转移酶免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变.应用IBAS图像分析系统对胆碱乙酰转移酶免疫阳性神经元进行图像分析处理,测定胆碱乙酰转移酶免疫阳性细胞平均截面积和平均吸光度(A值);用显微镜测微尺测定计算胆碱乙酰转移酶阳性神经元数目.④采用单因素方差分析进行计量资料间差异比较.主要观察指标:三七总皂苷对阿尔茨海默病大脑胆碱能神经元分布和胆碱乙酰基转移酶的影响.结果:老年大鼠75只和青年大鼠15只均进入结果分析.①青年对照组胆碱乙酰转移酶免疫阳性神经元多,免疫阳性物质染色深;三七总皂苷高剂量组免疫阳性神经元明显多于石杉碱甲组和模型组;模型组免疫阳性神经元较其他各组的神经元小,且数目明显减少,胞体的轴突及树突变短.②基底前脑胆碱乙酰转移酶免疫阳性细胞数:模型组明显少于其他各组(P＜0.05),三七总皂苷低剂量组、石杉碱甲组、模型组明显少于老年对照组(P＜0.05),石杉碱甲组、模型组明显少于三七总皂苷高、低剂量组(P＜0.05),青年对照组明显高于其他各组(P＜0.05).基底前脑胆碱乙酰转移酶免疫阳性细胞平均A值:变化与各组免疫阳性细胞数变化基本相同.基底前脑胆碱乙酰转移酶免疫阳性细胞平均截面积:三七总皂苷低剂量组和模型组明显小于青年对照组(P＜0.05),其他各组间差异不明显(P＞0.05).结论:三七总皂苷对老年性痴呆大鼠动物模型大脑胆碱能神经元具有较强的保护作用,通过改善和修复受损神经元而提高细胞存活的数量和质量、提高胆碱乙酰转移酶的含量和活性,从而保护和改善中枢胆碱能系统的功能,发挥抗老化、抗痴呆的作用.
关键词： 三七皂甙 阿尔茨海默病/中药疗法 疾病模型 动物 胆碱O-乙酰转移酶 -
穴位电针刺激对周围性面神经损伤兔面神经核中脑源性神经营养因子和胆碱乙酰转移酶的调节
目的:观察穴位电刺激对面神经损伤兔面神经核中脑源性神经营养因子、胆碱乙酰转移酶的影响,揭示针刺促进损伤面神经再生修复的作用途径.方法:实验于2005-03/2005-09在黑龙江中医药大学解剖教研室完成.①选用日本大耳白兔120只,雌雄各半,6～8月龄.随机将兔分为5组,每组24只:假手术组、模型组、西药组、传统针刺组、电针刺激组,每组再分为术后7,14,21,28 d 4个时间点进行观察.②应用神经卡压法造成周围性面神经损伤模型.假手术组:切开左侧面部皮肤后缝合.模型组:造模后不给任何处置.西药组:造模术后第1天每只给予维生素B110 mg/d,维生素B12 50μg加地塞米松肌肉注射.地塞米松用量从每只2 mg/d开始,以后每隔7 d减为半量.传统针刺组:造模后第1天开始用0.25 mm×40 mm毫针针刺术侧穴位:翳风直刺1.0 cm,颧髎直刺0.3 cm,地仓直刺0.5 cm,颊车直刺0.5 cm,四白向下平刺0.5 cm、阳白向下平刺0.5 cm,每10 min捻转1次,留针30 min,每针刺治疗5 d,休息2 d.电针刺激组:从造模后第1天开始取术侧穴位电针刺激,穴位位置、进针角度及进针深度同传统针刺组,翳风(阴极)与颊车(阳极)、地仓(阴极)与四白(阳极)连接全能脉冲电疗仪,频率为1～100Hz,电压2 V,疏密波刺激,治疗30 min/d,每针刺治疗5 d,休息2 d.各组均干预28 d.③手术后7,14,21,28 d,取兔左侧脑干组织,固定,石蜡包埋,切片.采用内氏染色的方法,光镜下观察面神经核中神经元形态的改变.按SP试剂盒操作说明,用免疫组织化学方法对神经元进行染色,每张片显微镜下计数5个固定点高倍(10×40)视野下面神经核脑源性神经营养因子和胆碱乙酰转移酶表达阳性细胞数.组间计量资料差异比较采用方差分析.结果:大耳白兔120只均进入结果分析.①面神经核中内氏体:随治疗时间延长,西药组、传统针刺组、电针刺激组均有不同程度增多,其中电针刺激组增多明显,但这3组仍少于假手术组.②面神经核脑源性神经营养因子阳性神经元数:术后7,14,21,28 d电针刺激组均明显多于其他4组(P＜0.01);西药组、传统针刺组、电针刺激组均有随治疗时间延长逐渐增多的趋势(P＜0.01).③面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元数:术后7,14,21,28 d:电针刺激组均明显多于模型组、西药组、传统针刺组(P＜0.01);西药组、传统针刺组、电针刺激组均有随治疗时间延长逐渐增多的趋势(P＜0.05).结论:穴位电针刺激可调节面神经核脑源性神经营养因子、胆碱乙酰转移酶,对面神经神经核神经元具有一定的保护作用,对损伤面神经修复起促进作用.
关键词： 面神经麻痹/穴位疗法 电刺激 针刺穴位 脑源性神经营养因子 胆碱O-乙酰转移酶 -
电针刺激百会及大椎穴对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护
背景:中国传统医学针灸治疗缺血性脑损伤可提高脑的抗损伤能力并加快损伤修复.目的:观察百会、大椎两穴同时给予电针刺激后大鼠脑源性神经生长因子及胆碱乙酰转移酶的表达水平,探讨电针对缺氧缺血性脑损伤的保护作用.设计:随机对照实验. 单位:郑州师范高等专科学校生命科学系.材料:实验于2000-06/2001-09在郑州大学基础医学院人体解剖教研室完成.实验选取出生后7 d的清洁级Wistar大鼠50只,随机分为假手术组10只、模型对照组20只、电针治疗组20只.自制常压缺氧舱,40 cm×50 cm×60 cm,有两个2 em×2 cm的小孔与外界相通,钠石灰吸收舱内水分和CO2.方法:①模型建立及电针刺激:假手术组不造模,模型对照组及电针治疗组建立缺氧缺血模型.造模后两组大鼠在室温中恢复1～4 h后,进行低氧处理,即置于恒温37℃的常压缺氧舱内,以1.5 L/min的速度通人8 mL/L O2,920 mL/L混合气体,2 h后将动物取出,返回母鼠身边继续哺乳喂养.电针治疗组从造模后第2天开始,用一寸毫针,沿皮斜刺百会穴(顶骨正中)及大椎穴(第7颈椎与第1胸椎间,背部正中),两穴同时给予电针刺激,施以连续波,频率16Hz,强度10V,留针10 min,1次/d,10 d为1个疗程,共两个疗程,两个疗程间隔2 d.模型对照组动物造模后未进行任何治疗.②细胞记数:模型对照组及电针治疗组大鼠于缺氧缺血后22 d给予麻醉处死,取左侧脑组织制作石蜡切片,光镜下对各组切片的免疫阳性细胞进行记数.评估脑神经细胞功能状态,选择海马区进行胆碱乙酰转移酶阳性细胞数计数,每张脑片随机选取5个视野,求出阳性细胞的算术平均值.评估神经组织损伤修复作用,选择皮质和海马区脑源性神经生长因子阳性细胞数计数,方法同上.主要观察指标:新生大鼠电刺激后脑组织胆碱乙酰转移酶和脑源性神经生长因子免疫阳性细胞的表达.结果:①脑海马区胆碱乙酰转移酶免疫阳性细胞的表达:与假手术组比较,模型对照组明显降低,而电针治疗组则无明显变化[(24.46±8.24),(13.96±7.62),(25.54±5.05)个/视野,P＜0.05,P＞0.05];电针治疗组高于模型对照组(P＜0.05).②脑皮质和海马区脑源性神经生长因子免疫阳性细胞的表达:与假手术组比较,模型对照组和电针治疗组均明显升高[(14.14±6.11),(24.49±8.31),(31.35±9.92)个/视野,P均＜0.05;(13.42±5.56),(21.93±5.12),(27.63±7.15)个/视野,P均＜0.05];电针治疗组高于模型对照组(P＜0.05).结论:电针刺激使缺氧缺血动物中枢胆碱能神经系统处于积极活动状态,使脑源性神经营养因子数量上升增进缺氧缺血动物的神经修复功能.
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还脑益聪方组分对β淀粉样前体蛋白转基因痴呆小鼠行为学及胆碱能系统的早期干预作用
目的:观察还脑益聪方复方组分早期干预对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)转基因小鼠行为学及脑胆碱能系统的影响.方法:将60只3月龄APP695V7171转基因小鼠随机分为4组:模型组、大剂量还脑益聪方组[2.80 g/(kg·d)]、小剂量还脑益聪方组[1.40 g/(kg·d)]及盐酸多奈哌齐阳性对照组[0.65 mg/(kg·d)],每组15只.15只遗传背景相同的非转基因C57BL/6J小鼠作为正常对照组.所试药物稀释至相同体积灌胃给药,正常组和模型组给以等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃6个月.采用Morris水迷宫实验和避暗实验进行小鼠行为学测试,采用酶联免疫吸附测定法分别检测小鼠大脑皮层和海马组织的乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)含量及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的活性,采用考马斯亮蓝法测定脑组织中蛋白的含量.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆成绩均显著下降(P＜0.05,P＜0.01),海马和皮层组织的ACh含量和ChAT活性显著降低,AChE含量显著增加(P＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠的学习记忆能力均有明显提高(P＜0.05);盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方大剂量组小鼠海马ACh含量明显提高(P＜0.05),盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠海马AChE含量显著降低,ChAT活性显著升高(P＜0.01,P＜0.05);盐酸多奈哌齐组和还脑益聪方两组小鼠皮层ACh含量均明显提高(P＜0.05),AChE含量有不同程度的降低,还脑益聪方两组小鼠皮层ChAT活性均明显提高(P＜0.05).结论:还脑益聪方能明显改善APP转基因小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与调控小鼠海马与皮层胆碱能系统相关酶的含量有关.
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嗅球摘除昆明小鼠水迷宫和跨杆运动的改变
目的 探讨嗅球摘除昆明小鼠的学习记忆行为及可能机制.方法 制备嗅球摘除昆明小鼠模型,采用小鼠跨杆运动实验和小鼠水迷宫实验观察其学习记忆活动的改变;应用免疫组织化学方法观察前额叶皮质、边缘系统和纹状体CHAT的表达.结果 嗅球完全摘除第14天昆明小鼠的游泳时间(P＜0.01)和游泳错误次数(P＜0.05)均较假手术组和嗅球不完全摘除组升高;嗅球完全摘除第14天小鼠的前额叶皮质、海马、内嗅区皮质、基底前脑Meynert基底核CHAT阳性神经元较假手术组数量减少,染色减弱,平均光密度值减少(P＜0.01),而纹状体CHAT阳性神经元无明显改变.结论 嗅球摘除昆明小鼠出现明显的陈述性学习记忆障碍,前额叶皮质、海马、内嗅区和Meynert基底核的胆碱能神经元减少,出现AD特征性的行为改变和生化改变.
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束缚-浸水应激对大鼠迷走背核胆碱能神经元活动的影响
目的 研究束缚-浸水应激(RWIS)大鼠迷走神经背核(DMV)中胆碱能神经元的活动情况.方法 随机将10只雄性Wistar大鼠分为对照组和应激组,采用Fos和胆碱乙酰化酶(ChAT)免疫组织化学双标技术,统计对照组和应激组Fos、ChAT、Fos/ChAT双标阳性神经元数目.结果 与对照组相比,应激组大鼠DMV大量神经元表达Fos,Fos阳性神经元主要集中于DMV尾段和吻段(P<0.01);CHAT 阳性神经元主要分布于DMV中段和尾段,应激组大鼠DMV中单位面积内ChAT阳性神经元数目减少(P<0.01);Fos/ChAT双标阳性神经元的分布与Fos阳性神经元分布情况相似,RWIS组Fos/ChAT双标阳性神经元数目显著增加(P<0.01),Fos/ChAT双标阳性神经元占ChAT 阳性神经元的比例在对照组和RWIS组中分别为7.17%、21.12%(P<0.01).结论 DMV中胆碱能神经元参与RWIS调控过程.
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条件免疫对胶原性关节炎大鼠烟碱样乙酰胆碱受体及胆碱乙酰转移酶表达的影响
目的建立条件免疫反应(CIR)模型,研究CIR状态下胶原性关节炎(CIA)大鼠烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)蛋白和mRNA表达,探讨CIR可能的胆碱能通路作用机制.方法将大鼠分为健康对照组和CIA模型组,模型组大鼠分为5组:CIR组;甲氨蝶呤(MTX)+泼尼松(Pred)治疗组;MTX+Pred治疗减量组;单纯闻樟脑气味组;空白对照组.用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测各组大鼠关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA表达.结果免疫组织化学和RT-PCR均显示CIR组关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA的表达明显均高于空白对照组(P均<0.01);空白对照组大鼠表达nAChRα7、ChAT明显低于健康对照组和CIR(P均<0.01),而MTX+Pred组、MTX+Pred减量组、单纯闻樟脑气味组均与空白对照组差异无显著性(P均>0.05).结论 CIR状态下nAChRα7、ChAT mRNA和蛋白表达水平增高,表明胆碱能抗炎通路在CIR治疗胶原性关节炎大鼠的作用机制中起重要作用.
关键词： 条件免疫反应 关节炎 实验性 烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位 胆碱O-乙酰转移酶 -
针药合用刺激嗅觉系统对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马ChAT 、AchE活性的影响
目的:探讨针药合用刺激嗅觉系统对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马ChAT、AchE活性的影响作用.方法:成年SD雄性大鼠48只.随机分为正常对照组、VD模型组、VD嗅球损毁模型组、嗅三针组、丁香酚刺激组和针药合用组,每组8只.结果:定位航行试验显示,平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较,正常对照组明显短于VD模型组(P＜0.01);嗅三针组、丁香酚刺激组和针药合用组均明显短于VD模型组(P＜0.01);针药合用组短于嗅三针组、丁香酚刺激组(P＜0.05);嗅三针组与丁香酚刺激组相比较,其差异无显著性意义(P＞0.05);VD模型组与VD嗅球损毁模型组相比较,其差异无显著性意义(P＞0.05).海马ChAT、AchE活性比较,VD模型组明显低于正常对照组(P＜0.01);嗅三针组、丁香酚刺激组和针药合用组明显高于VD模型组(P＜0.01);针药合用组高于嗅三针组和丁香酚刺激组(P＜0.05);嗅三针组与丁香酚刺激组之差异无显著性意义(P＞0.05).VD模型组与VD嗅球损毁模型组之差异无显著性意义(P＞0.05).结论:嗅三针和丁香酚均能够显著增强VD大鼠学习记忆功能、提高海马ChAT和AchE活性、针药合用效果更佳,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性.
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130 dB次声对大鼠纹状体NOS阳性神经元及ChAT免疫阳性神经元表达的影响
目的: 探讨130 dB次声作用对大鼠纹状体一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元及乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫阳性神经元表达的影响.方法: SD大鼠接受频率为16 Hz和8 Hz,130 dB次声,2 h·d-1,分别作用7,14及21 d后,采用神经化学解剖学方法观察纹状体NOS阳性神经元和ChAT免疫阳性神经元表达的影响.结果: 次声作用后,大鼠NOS阳性神经元数目表现为先升高后降低,而ChAT免疫阳性神经元随时间增加数目减少. 16 Hz组ChAT免疫阳性神经元计数较8 Hz组数目显著减少 (P＜0.01). 结论: 次声作用后,NOS神经元和ChAT免疫阳性神经元表达与次声的频率和作用时间有关.
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高压氧促进大鼠弥漫性轴突损伤后学习记忆功能恢复的实验研究
目的研究高压氧(HBO)治疗对弥漫性轴突损伤大鼠学习记忆功能的影响. 方法采用Marmarou介绍的落体打击装置制作弥漫性轴突损伤(DAI)大鼠模型,一组大鼠在致伤前进行Y型迷宫训练,另一组不预先训练,分别观察高压氧治疗对致伤大鼠迷宫空间辨别记忆及学习功能的影响,并用免疫组化的方法观察海马区ChAT阳性纤维表达变化. 结果无论是否进行Y迷宫训练,损伤大鼠条件反射数(conditioned reflex number, CN)明显高于空白对照组(blank)大鼠(P<0.05);预先Y迷宫训练后的大鼠造成DAI损伤后,HBO组与对照组(control)相比CN次数无明显差别;未预先训练组中HBO治疗大鼠CN次数明显少于对照组(P<0.05);HBO治疗后损伤大鼠海马区ChAT阳性纤维表达显著增强. 结论弥漫性脑损伤后大鼠的学习能力和记忆力均下降,而高压氧治疗能改善脑损伤大鼠学习障碍,但对记忆障碍的影响不大;高压氧治疗能增强海马区神经元活性,抑制外伤后ACh能神经元发生的退行性变,这可能是高压氧改善脑损伤大鼠学习记忆障碍的机制之一.
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卵巢切除大鼠不同脑区胆碱乙酰化转移酶阳性细胞表达的变化
目的观察卵巢切除大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶(ChAT)阳性细胞表达的变化,了解ChAT改变与轻度认知障碍(MCI)相关的可能机制.方法成年健康雌性Wistar大鼠14只,应用SINGH法建立大鼠卵巢切除模型(模型组),对照组除不切除卵巢外,其余步骤同模型组.常规处死大鼠,取脑组织行ChAT免疫细胞化学染色,观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化.结果模型组与对照组比较脑内海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区、Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少(t=5.15～16.48,P<0.01).结论雌激素下降可致大鼠脑内多部位ChAT阳性细胞表达减少,这种病理变化可能与MCI发病有关.
