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纳米粒介导ROCK-Ⅱ-siRNA基因治疗阿尔茨海默病的体内研究
目的 探讨海马内注射PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA纳米复合物对阿尔茨海默病模型小鼠(SAMP8)学习、记忆、认知及海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的影响.方法 6月龄SAMP8 15只小鼠分为治疗组(8只)及阴性对照组(7只),另选5只SAMPR1鼠作为正常对照组.治疗组给予PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA,N/P＝50、阴性对照组给予PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-Scr,正常对照组给予生理盐水,给药均为海马注射,3 d给药1次,给药5次.30 d后各组进行Morris水迷宫检测行为学改变,免疫组织化学检测海马ChAT的表达.结果 PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA治疗组与阴性对照组相比,定位航行试验潜伏期显著缩短[第1天:(37.02±3.30)s vs.(40.68±3.59)s,t =2.77,P ＜0.01;第3天(23.00±2.70)s vs.(31.35±1.80)s,t =3.35,P ＜0.01],穿越目的 象限区域次数明显增加(4.50±1.68 vs.2.41±0.76,t =1.97,P =0.096),目的 象限停留距离比值(0.66±0.25 vs.0.34±0.05,t =2.49,P ＜0.05)及时间比值(0.57±0.13 vs.0.30±0.04,t =3.95,P ＜0.01)都较阴性对照组提高,海马组织ChAT活性也增加(CA1区阳性率0.32±0.08 vs.0.17±0.01,t =25.21,P ＜0.01;CA3区阳性率 0.32± 0.02 vs.0.16±0.01,t =17.91,P ＜0.01),差异具有统计学意义.治疗组与正常对照组相比,Morris水迷宫结果及海马组织ChAT活性无统计学差异.结论 脑内注射PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA纳米复合物能提高SAMP8鼠的学习和记忆能力,这种作用可能通过增加海马组织ChAT含量而得以实现.
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靶向血管内皮生长因子的纳米颗粒制备及其对大肠癌细胞株SW620的作用
目的 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤新生血管形成过程中起关键性调控作用,是肿瘤靶向治疗的重要靶点之一.RNA干扰(RNA interference,RNAi)是RNA序列特异性转录后的基因沉默现象.小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)可介导同源mRNA降解.纳米颗粒黏附性强、体积小,可随血液循环进入细胞内,提高药物的生物利用度.在纳米颗粒表面整合精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)小肽配体可增加纳米颗粒与表达整合素的肿瘤细胞的特异性结合.聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG) -聚乙烯亚胺( polyethyleneimine,PEI)是构建纳米颗粒的材料.文中利用RGD-PEG-PEI纳米材料构建载有靶向VEGF mRNA的siRNA质粒(psiRNA),并检测其转染大肠癌细胞株SW620的效率.方法 制备由U6启动子驱动、可在哺乳动物细胞内稳定表达的VEGF靶向性质粒,与RGD修饰的PEG-PEI纳米载体结合后形成纳米复合物.测定所制备的纳米复合物的粒径、包封率和体外释放特性,并检测其对大肠癌细胞株SW620的作用. 结果 所制备的纳米复合物平均粒径为(142.3±21.6)nm,包封率为(83.5±5.8)％,大部分质粒在2周内释放,转染大肠癌细胞株SW620后72h转染效率达高,VEGF mRNA的抑制效率为78.4％. 结论 RGD-PEG-PEI纳米基因载体转染效率较高,RGD -PEG-PEI/psiRNA可有效降低大肠癌细胞株SW620中VEGF mRNA的表达量,具有着良好的应用前景.
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PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物物理性能和转染C17.2神经干细胞效率的研究
目的 探索PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的物理性能及转染C17.2神经干细胞的效率.方法 设计合成PEG-PEI共聚物基因载体,与ROCK-Ⅱ-siRNA进行复合;用凝胶阻滞电泳实验、粒径与电位的测定观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的复合效果;采用透射电镜观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的形态学;通过流式细胞仪技术定量检测复合物对C17.2神经干细胞的转染效果.结果 PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=10时完全复合.随着N/P比的增大,复合物的粒径变小而电位增大.在N/P=50时,透射电镜观察到复合物为球形,很好的分散性,平均粒径约为100 nm.PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=50时转染C17.2神经干细胞的转染效率高,为(70.24±5.21)％.结论 PEG-PEI基因载体可以很好的与ROCK-Ⅱ-siRNA复合.PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物对于C17.2神经干细胞具有良好的转染效率.
关键词： 聚乙二醇-聚乙烯亚胺 ROCK-Ⅱ RNA干扰 纳米医学
