胰腺腺泡细胞囊腺瘤--一种新的肿瘤?

靶向IRF-2基因的siRNA对胰腺腺泡细胞凋亡的机制研究

目的 探讨靶向干扰素调节因子2(IRF-2)基因的小干扰RNA(siRNA)对胰腺腺泡细胞凋亡的影响及机制.方法 以脂质体Lipofectamine TM2000为载体,参照其转染说明将设计并合成的IRF-2的siRNA转染AR42J细胞,并设置阴性对照siRNA(NC)及空白组(仅加入脂质体).IRF-2的siRNA及阴性对照siRNA转染AR42J细胞24 h后与雨蛙肽(10 -8mol/L)同培养,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及活性氧族(ROS)含量;Western blotting检测Bcl-2、Bax和p53的蛋白表达.结果 转染IRF-2的siRNA的AR42J细胞IRF-2蛋白表达降低,与空白组比较差异具有统计学意义(P ＜0.05).雨蛙肽可明显诱导AR42J细胞凋亡,诱导ROS产生,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,与NC组比较差异具有统计学意义(P ＜0.05),而转染si-IRF-2后可降低由雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋 亡和ROS产生,下调Bax和p53蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达,与NC+雨蛙肽组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向IRF-2基因的siRNA可抑制胰腺腺泡细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS含量及下调Bax、p53表达和上调Bcl-2表达有关.这种抑制可能与增加急性胰腺炎的炎症程度有关.

PTD-NBD多肽对大鼠胰腺腺泡细胞炎症损伤中NF-κB表达的影响

目的:探讨PTD-NBD多肽对体外大鼠胰腺腺泡细胞核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)p65的表达影响.方法:分离培养大鼠胰腺腺泡细胞,分为正常对照组、急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)组和PTD-NBD多肽组,用脂多糖(10mg/L)诱导体外细胞AP模型,分别于建模6和12 h观察细胞形态学变化,培养液中淀粉酶(amylase,AMY)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和白介素(interleukin,IL)-1β含量,RT-PCR和免疫印迹法检测细胞中NFKB p65 RNA及其蛋白表达.结果:与对照组相比,AP组各时间点腺泡细胞发生肿胀和死亡增多(细胞形态学评分:6 h:8.90±0.34 vs l.10±0.13; 12 h:9.40±0.26 vs 1.20±0.15,P＜0.05),培养液中AMY升高(6 h:2135.8±347.2 vs 873.5±91.6; 12 h:3299.6± 217.7 vs 917.7±101.9,P＜0.05),IL-1β含量升高(6 h:84.9±15.7 vs 39.3±7.9; 12 h:95.6±17.1 vs 38.9±5.2,P＜0.05),SOD含量降低(6 h:116.3±30.3 vs 176.2±21.6; 12 h:101.5±25.6 vs 173.6±27.9,P＜0.05),细胞中NF-KB p65RNA及其蛋白表达量增多(P＜0.05)；与AP组比较,经PAT-NBD多肽预处理后腺泡细胞出现肿胀和死亡减少(细胞形态学评分:6 h:6.80±0.23 vs 8.90±0.34; 12 h:7.50±0.19 vs 9.40±0.26,P＜0.05),培养液中SOD上升(6 h:137.6±27.4 vs 116.3±30.3; 12 h:144.3±23.6 vs101.5±25.6,P＜0.05),AMY下降(6 h:1951.5±211.7 vs 2135.8±347.2; 12 h:1761.3±231.5 vs3299.6±217.7,P＜0.05),IL-1β含量明显下降(6 h:66.8±11.6 vs 84.9±15.7; 12 h:54.8±21.2 vs95.6±17.1,P＜0.05),NF-KB p65蛋白表达降低(P＜0.05).结论:PTD-NBD多肽透过大鼠胰腺腺泡细胞膜抑制脂多糖刺激的NF-κB p65活化及其活性,下调IL-1β表达,上调SOD含量,从而减轻胰腺腺泡细胞的炎症损伤.

急性胰腺炎腺泡细胞损伤机制的研究进展

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床常见急腹症,发病机制复杂,其中,胰腺腺泡细胞损伤、胰酶提前激活导致胰腺自身消化是胰腺炎的始发因素,因此,探讨腺泡细胞损伤机制对阐明AP发病机制具有重要意义.近年来研究认为,钙超载、内质网应激、线粒体损伤与胰腺腺泡细胞损伤关系密切,本文就其研究进展作一综述.

高三酰甘油血症对大鼠胰腺腺泡细胞的影响

目的 研究高三酰甘油血症对大鼠胰腺腺泡细胞形态和功能的影响.方法 断奶1周雄性SD大鼠(约70 g)随机分为2组,每组10只,分别给予高脂饲料和普通饲料喂养4周.检测血清三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)及游离脂肪酸(FFA)水平,HE染色和透射电镜观察胰腺腺泡细胞形态.胶原酶消化法分离大鼠胰腺腺泡细胞,台盼蓝染色测定细胞活力.给予不同浓度胆囊刺激素(CCK-8)刺激胰腺腺泡细胞分泌淀粉酶及乳酸脱氢酶(LDH),测定酶释放率. 结果 高脂饮食饲喂大鼠4周后,血清TG、FFA较正常饮食组明显升高(P ＜ 0.05).高脂饮食组大鼠胰腺腺泡细胞出现空泡样改变及内质网扩张.体外培养6 h后,高脂饮食组胰腺腺泡细胞活力低于对照组(P ＜ 0.05),且各浓度CCK-8引起的淀粉酶和LDH释放均高于正常饮食组(P ＜ 0.05).结论 饮食诱导的高三酰甘油血症可以引起大鼠胰腺腺泡细胞损伤.

蛋白质摄入量在酒精性胰腺损伤中的作用

目的探讨在长期饮酒的基础上摄入不同量的蛋白质对胰腺腺泡细胞结构和功能的影响.方法 Wistar大鼠分为酒精组(酒精 + 常规蛋白质组、酒精 + 高蛋白质组、酒精 + 低蛋白质组)和对照组,观察6个月.在光镜和电镜下观察胰腺腺泡细胞结构变化,用比色法检测胰腺组织匀浆淀粉酶和脂肪酶的含量,TUNEL法检测腺泡细胞凋亡,免疫组化检测胰腺组织切片中COX-2的变化.结果与对照组相比,酒精组大鼠胰腺腺泡细胞可见髓样结构形成.酒精 + 常规蛋白质组腺泡细胞损伤轻,酒精 + 高蛋白质组胰腺腺泡细胞内线粒体普遍肿胀,酒精 + 低蛋白质组主要表现为粗面内质网明显扩张,甚至部分细胞胞质溶解坏死.对照组淀粉酶含量为(6532.87 ± 100.11)U/g组织、脂肪酶含量为(10193.06 ± 206.27)U/g组织,与对照组比较,各酒精组淀粉酶及脂肪酶含量均有不同程度的降低(P < 0.01).对照组胰腺腺泡细胞凋亡指数为(0.31 ± 0.10)%,酒精 + 低蛋白质组胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增加(P < 0.01).对照组COX-2的ILD为0.09 ± 0.02,酒精 + 低蛋白质组胰腺腺泡细胞胞质COX-2的ILD为0.22 ± 0.03,表达明显增加(P < 0.01).结论长期酒精摄入导致胰腺腺泡细胞退行性变,饮食中适量的蛋白质摄入对延缓胰腺病变发展十分重要.过高或过低蛋白质摄入都将促进腺泡细胞结构的破坏,加速酒精性胰腺损伤的进程.

艾塞那肽诱导大鼠胰腺腺泡细胞损伤机制的实验研究

胰高血糖素样肽-1受体( glucagon-like peptide 1 receptor, GLP-1R)激动剂艾塞那肽是一种肠促胰岛素类似物,可与胰岛β细胞上GLP-1R结合,促进胰岛素的分泌. 艾塞那肽降糖效果理想,低血糖不良反应轻微,一度被称为"智能降糖药物". 然而,自2008年有学者报道艾塞那肽临床使用时有导致急性胰腺炎风险以来[1] ,关于艾塞那肽是否诱导胰腺炎的争论就不断出现. 近年随着相关实验研究的深入,多数研究者认为艾塞那肽长期使用有诱导胰腺慢性损伤的可能[2-3].本课题组前期动物实验研究结果也表明SD大鼠长期皮下注射艾塞那肽可致胰腺腺泡细胞损伤、数量减少和间质纤维化等慢性损伤[4]. 本研究重点探讨艾塞那肽诱导胰腺腺泡细胞损伤的机制.

NR5A2在胰腺腺泡细胞中作用的研究进展

孤儿核受体NR5A2是核受体NR5A亚家族成员,又叫做肝受体同系物-1(liver receptor homolog-1, LRH-1),是典型的转录因子. NR5A2能促进胰腺腺泡细胞的形成并维持其正常功能,在急性胰腺炎( AP)中可参与胰腺腺泡细胞损伤后修复,还可诱导胰腺癌前病变的发生,并促进胰腺癌细胞的迁移和侵袭[1-4]. 本文就NR5A2在胰腺腺泡细胞及胰腺相关疾病中作用的研究进展做如下综述.

两种不同因素对胰腺腺泡细胞损害机制的研究

目的探讨蛙皮素和牛磺胆酸钠这两种不同因素对胰腺腺泡细胞的损害机制.方法采用一步消化法分离Wistar大鼠胰腺腺泡细胞,然后与不同浓度蛙皮素、牛磺胆酸钠共同孵育,采用台盼蓝法和双标法测定细胞活率、全自动生化仪测定淀粉酶浓度、比色法测定乳酸脱氢酶浓度、激光显微共聚焦法测定钙离子波动和浓度.结果蛙皮素处理后,腺泡细胞仍保持较高的活率,淀粉酶分泌率明显上升,同时乳酸脱氢酶漏出率增加,与淀粉酶分泌率之比约为4:1;而胆酸钠处理后细胞活率明显下降,淀粉酶分泌率明显升高的同时伴有乳酸脱氢酶漏出率也等比例的增加.蛙皮素可引起胰腺腺泡细胞内游离钙离子脉冲式升高,其波动方向由分泌极向基底极;牛磺胆酸钠引起细胞内钙离子持续低幅增高,细胞两极间未出现钙离子波动.结论蛙皮素及牛磺胆酸钠通过不同机制影响胰腺腺泡细胞的存活率,导致胰腺细胞损害.

抑制自噬对艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡的影响

目的 探讨艾塞那肽对AR42J细胞株的损伤及其可能机制.方法 1、5、10 pmol/L艾塞那肽处理AR42J细胞株24、48、72、96、120 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,筛选佳浓度和时间作为后续实验条件.设置空白对照组(NC)、艾塞那肽组(Ex-4)和Ex-4+z-VAD-fmk组,检测艾塞那肽是否可直接导致AR42J细胞凋亡;设置NC组、Ex-4组、3-MA组和Ex-4+ 3-MA组,探究3-MA能否抑制艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡.3-MA为自噬抑制剂,z-VAD-fmk为凋亡抑制剂.细胞活力检测采用MTT法.流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3等凋亡相关蛋白以及微管相关蛋白轻链3(LC3)自噬相关蛋白表达.结果 以10 pmol/L艾塞那肽作用72 h为后续实验条件.z-VAD-fmk预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,两组细胞活力为(49.4±3.0)％比(81.2±3.3)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ex-4组细胞凋亡率(28.2±1.4)％,高于NC组的(3.6±0.8)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot也显示caspase-3表达明显上调,而z-VAD-fmk预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的细胞凋亡和caspase-3表达增加.3-MA预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,处理72 h两组细胞活力为(49.8±2.5)％比(79.1±2.3)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ex-4组细胞凋亡率为(29.2±3.2)％,高于Ex-4+3-MA组的(14.5±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Westernblot结果表明艾塞那肽可上调LC3B-Ⅱ、p62和caspase-3的表达,而3-MA预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的LC3B-Ⅱ和caspase-3上调,但p62的表达却进一步上调.结论 艾塞那肽可诱导AR42J细胞凋亡,3-MA可通过抑制自噬而抑制艾塞那肽诱导的凋亡.使用3-MA可作为减轻艾塞那肽对胰腺腺泡细胞毒性的一种潜在方法.

急性胰腺炎细胞内早期事件的再认识

对急性胰腺炎(AP)的临床病因如饮酒、胆石、高脂血症等,已有共识,但发病机制目前尚不很清楚,实验证明,AP在发病之初,病理变化并非起自胰腺间质、导管,或是脂肪组织,而是开始于腺泡细胞内,甚至在细胞出现形态学变化以前,细胞内即已开始其特有的病理生理进程.胰腺腺泡细胞的惟一功能是制造和分泌各种消化酶原,然后运送至肠管,经活化后产生消化作用,病理生理的变化始于分泌过程的异常.在此仍有必要对胰腺腺泡细胞的正常分泌过程做一简要复习.

大黄牡丹汤组方对急性胰腺炎模型大鼠腺泡细胞分泌功能的影响

目的 研究大黄牡丹汤组方(RPDP)对急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)模型大鼠胰腺腺泡细胞外分泌功能和腺泡细胞内钙离子浓度(FI)的影响.方法 SD大鼠灌胃RPDP以制备大黄牡丹汤组方含药血清(RPDP-S);SD大鼠分为假手术组和AP模型组,分离胰腺腺泡细胞并与RPDP-S共同孵育,测定腺泡细胞淀粉酶分泌水平和FI变化.结果 AP模型大鼠腺泡细胞分泌淀粉酶水平较假手术组显著升高(P＜0.05),经RPDP-S处理的AP模型大鼠腺泡细胞分泌淀粉酶水平显著降低(P＜0.05);FI随AP模型病程延长而升高(P＜0.05),RPDP-S可抑制AP模型大鼠腺泡细胞内FI升高(P＜0.05).结论 RPDP通能抑制AP大鼠胰腺腺泡细胞的外分泌功能,抑制腺泡细胞内钙离子的升高,降低腺泡细胞内FI超载.

重症急性胰腺炎治疗概况

重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一种较为常见的疾病,大部分患者起病继发于胆结石或是大量饮酒.胰腺腺泡细胞中的胰蛋白酶原被激活是引发此病的原因.胰蛋白酶原激活导致胰腺的自身消化而引发局部及全身性的炎症反应,进而引发多器官功能衰竭综合征(MODS),甚至死亡.大约一半的死亡病例发生在急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)起病的第1周内.

小鼠胰腺腺泡细胞钙振荡的激光共聚焦成像研究方法

目的:建立一种简易高效的成年小鼠胰腺腺泡细胞钙振荡的激光共聚焦成像研究方法.方法:取成年昆明小鼠胰脏,用胶原酶法急性分离得胰腺腺泡细胞,加荧光染料fluo-4-AM标记胞内钙;以乙酰胆碱(ACh)为兴奋剂作用于胰腺腺泡细胞,激光扫描共聚焦显微镜发射488 nm激光并同步、实时、动态地记录此过程中胰腺腺泡细胞产生的钙振荡.结果:①一定浓度的ACh(如100 nmol/L)可稳定地激发胰腺腺泡细胞产生典型钙振荡,且此钙振荡可被阿托品完全阻断;②胞浆内不同部位的钙振荡有强弱不同,但呈同步变化节律;而不同细胞间的钙振荡强弱和节律往往不同;③钙振荡的幅度和节律与Ach具有剂量依赖效应.结论:小鼠胰腺腺泡细胞钙振荡的激光共聚焦成像研究方法简单易行、直观形象、高效、灵活,可作为常规方法使用,具有良好的应用前景和推广价值.

急性胰腺炎大鼠血清、腹水对离体胰腺腺泡细胞的损伤

目的:观察急性胰腺炎(AP)大鼠血清、腹水对大鼠离体胰腺腺泡细胞的损伤作用,探讨AP细胞钙超载的可能机制.方法:采用大鼠胰胆管逆行注射3%去氧胆酸钠复制AP模型,分别在1、5、10h取动物的血清、腹水备用.胶原酶法分离、培养正常大鼠胰腺腺泡细胞,给予1、5、10h AP大鼠血清、腹水刺激;采用MTT法检测胰腺腺泡细胞的存活率;用荧光染料Fura-2/AM负载后,给予1、5、10h AP大鼠血清、腹水刺激,采用钙离子成像系统,观察单个胰腺腺泡细胞游离钙水平的变化.结果:AP模型复制后1h,血清淀粉酶活性即明显升高,同时胰腺组织破坏严重;经AP腹水、血清刺激的胰腺腺泡细胞,其存活率降低;胰腺腺泡细胞内游离钙浓度明显升高(P<0.05),且随AP病程时间延长,AP腹水、血清的刺激作用越明显.结论:在AP大鼠血清、腹水刺激下,胰腺腺泡细胞存活率下降,同时有细胞钙超载发生.

哺乳动物水通道蛋白家族成员-AQP8

AQP8是1997年以来被鉴定的哺乳动物水通道蛋白家族成员之一,主要分布于肝细胞、胰腺腺泡细胞、消化道上皮细胞、唾液腺腺泡细胞、睾丸精子细胞、胎盘、支气管上皮细胞和支气管腺的肌上皮细胞以及肾近曲小管、集合管上皮细胞的细胞内囊泡和顶质膜.能够特异性通透水分子,受cAMP等因素调节,可在细胞内囊泡与细胞顶质膜之间穿梭.可能参与胰液、胆汁及唾液的分泌、排泄物的脱水、精子成熟和受精以及肾脏水的重吸收等生理过程.

血液净化治疗高血脂症性急性胰腺炎患者的护理

高血脂症导致急性胰腺炎(AP)发生的机制还不是很清楚,目前认为其主要是通过影响胰液分泌、诱发胰腺微循环障碍和损伤胰腺腺泡细胞引发高血脂症性急性胰腺炎(HAP)[1].HAP治疗的关键在于迅速降低三酰甘油(TG)和尽早阻断全身炎性反应.当TG降到5.65 mmol/L以下时,便可阻止HAP病情的进一步发展[2].我院采用连续肾脏替代治疗(CBRT)机应用血浆置换串联血液滤过治疗高血脂症性急性胰腺炎(HAP)11例,取得了满意疗效,现报道如下.

饥饿及雨蛙素诱导的AR42J细胞中自噬基因LC3及beclin-1表达的变化

目的:观察饥饿及雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J中自噬基因LC3及beclin-1表达的变化,初步探讨吞噬(autophagy)在急性胰腺炎中的作用.方法:选择体外培养的生长状态良好的大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,随机分为3组,饥饿组(N=10),雨蛙素处理组(N=10),空白对照组(N=10).饥饿组加入充足的平衡盐溶液,雨蛙素处理组加入含10-7mol/L雨蛙素的全营养培养液,空白对照组加入含20％灭活胎牛血清的F12-K培养液(pH7.2-7.4),各组分别于处理后2、4、6h收集细胞并提取蛋白质.采用免疫印迹法检测三组不同时点胰腺腺泡细胞AR42J中自噬基因Beclin-1和LC3的蛋白表达.结果:空白对照组不同时点beclin-1和LC3-Ⅱ均呈低表达,且各时点比较差异无统计学意义(P＜0.05).饥饿组和雨蛙素处理组beclin-1和LC3-Ⅱ的表达随处理时间的延长逐渐增加,且不同时点beclin-1和LC3-Ⅱ的表达均较空白对照组显著增高,差异均具统计学意义(P＜0.05).结论:雨蛙素和饥饿刺激可导致大鼠胰腺腺泡细胞AR42J中LC3-Ⅱ及beclin-1蛋白表达随作用时间的延长而增加,自噬可能参与了胰腺炎的发生发展过程.

自噬在胰腺炎中的研究及进展

自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性降解途径,作为细胞生存的一种机制,在很多生理过程如清除损伤、衰老细胞器以及冗余蛋白上发挥重要作用.自噬在人类胰腺炎的研究早由Helin等人早在1980年提出,随着不断深入研究,发现自噬在胰腺炎发生发展过程中起主导作用.急性胰腺炎是一种发病率和死亡率极高的疾病,目前表明这种疾病始于胰腺腺泡细胞,主要诊断指标为高淀粉酶血症,胰腺腺泡细胞内消化酶的激活、液泡的大量堆积和炎症因子的聚集,终胰腺炎症细胞侵润及引起的全身炎症反应导致腺泡细胞的凋亡和坏死,在其发病机制和治疗方面仍需进一步研究探讨.本文综述近年新研究成果,深入探讨自噬在胰腺炎中的研究及进展.

碘过量对小鼠甲状腺滤泡和胰腺腺泡细胞形态的影响

目的 观察不同程度的碘过量对小鼠甲状腺滤泡和胰腺腺泡细胞形态学变化的影响.方法 选取60只雌性(BALB/c)小鼠,体重18～22 g,按体重采用随机数字表法将小鼠分为6组,每组10只.采用在饮用水中加入碘酸钾的形式,按碘含量分成300、600、1 200、2 400和4 800μg/L组,正常(对照)组给予正常碘含量(5 μg/L)的自来水.饲养1个月,取小鼠甲状腺和胰腺组织,光镜下观察甲状腺滤泡和胰腺腺泡细胞形态,电镜下观察胰腺超微结构变化.结果 光镜下,从1 200 μg/L组开始,甲状腺滤泡腔逐渐增大,细胞变为扁平;小鼠胰腺腺泡细胞肿胀,并出现空泡样变形.电镜下,从600μg/L组开始,胰腺腺泡细胞超微结构出现显著变化,酶原数量减少,细胞器变性坏死,以及内质网扩张.结论 碘过量可引起小鼠胰腺腺泡细胞损伤.