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基于HPLC和HSGC结合的黄芩酒制前后饮片特征图谱表征
目的:建立黄芩片和酒黄芩的特征图谱,分析黄芩酒制前后饮片特征图谱的变化规律.方法:分别采用高效液相色谱法(HPLC)和顶空气相色谱法(HSGC)分析黄芩片和酒黄芩的特征图谱.色谱条件为流动相甲醇(A)-含10 mmol·L-1甲酸铵的0.1％甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 10 min,20％ ～40％A;10～20min,40％ ～46％A;20 ～30 min,46％ ～ 52％A;30～50 min,52％ ～ 70％ A),检测波长260 nm.结果:黄芩片和酒黄芩的HPLC特征图谱中均可标示13个特征峰,并归属了其中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A共6个色谱峰,黄芩片酒制前后HPLC特征图谱无显著差异.黄芩生品、炮制品的HSGC特征图谱差异显著,酒黄芩饮片中可以检测到炮制辅料乙醇的特征峰,可有效地区别生品和酒制品.结论:将HPLC和HSGC建立的特征图谱综合运用于黄芩片、酒黄芩的质量评价和鉴别,弥补了HPLC特征图谱在生品和酒制品属性识别方面的局限性,为酒制类中药饮片的质量评价和真伪鉴别提供了新思路.
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UPLC-MS/MS同时测定双黄连口服液中17种有效成分
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定双黄连口服液中17种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-Dβ-D-葡萄糖苷、汉黄芩素、千层纸素A)的分析方法.方法 采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以乙腈-甲醇(4:1)-0.4％甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.4 mL/min,柱温40℃,采用电喷雾电离源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测,分析时间为7 min.结果 所测17种有效成分在测定质量浓度范围内线性关系良好,r2均大于0.990 1,实验精密度、准确度和稳定性良好,平均加样回收率为95.81％～102.42％,所测5批样品中17种成分定量范围依次为新绿原酸782.68～1 034.27 μg/mL、绿原酸786.35～1 103.77μg/mL、隐绿原酸898.00～1 238.94 μg/mL、咖啡酸82.85～115.17 μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸226.02～461.63 μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸191.59～404.21 μg/mL、异连翘酯苷243.62～298.51 μg/mL、连翘酯苷A 978.43～1 487.37 μg/mL、连翘苷351.97～435.82 μg/mL、芦丁41.19～75.65 μg/mL、黄芩素40.28～73.73 μg/mL、黄芩苷10 080.54～10 820.35 μg/mL、野黄芩苷40.88～50.51 μg/mL、汉黄芩苷187.73～204.85 μg/mL、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖苷144.92～335.08 μg/mL、汉黄芩素9.30～25.58 μg/mL、千层纸素A 7.51～16.58 μg/mL.结论 方法简单、快速、准确度及灵敏度高、专属性好,可用于双黄连口服液中3大类17个主要成分的快速定量测定.
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天然产物千层纸素A的研究进展
天然产物千层纸素A具有广泛的生物活性,如抗肿瘤、神经保护、抗炎、抗分娩、抗瘙痒等,目前引起了国内外学者的广泛关注.综述了近年来国内外关于千层纸素A的植物提取、人工合成、生物活性及作用机制方面的研究进展.
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千层纸素A的药理作用及制剂开发的新进展
千层纸素A主要来源于我国传统中药黄芩,是一种重要的黄酮类有效成分.由于黄芩在我国拥有悠久的药用历史和显著的药用价值,使得千层纸素A一经发现,就很快受到广大研究者的关注.现代研究表明,千层纸素A可以抗炎、抗肿瘤、保护血管与神经细胞、改善记忆障碍、抗病毒等.目前市场上千层纸素A的产品很少.随着千层纸素A提取或合成工艺的不断进步,也将会有更多的千层纸素A制剂产品问世.
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黄芩射干汤中千层纸素A和次野鸢尾黄素的含量测定
目的 建立黄芩射干汤有效成分千层纸素A和次野鸢尾黄素的定量分析方法.方法 采用HPLC-DAD法测定制剂中千层纸素A和次野鸢尾黄素含量,使用Ultimate XB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温:25℃.结果 千层纸素A和次野鸢尾黄素含量的线性范围分别为0.058 32 ～0.641 52 μg(r =0.999 4)和0.053 76 ～0.591 36 μg(r =0.999 6);平均回收率(n=6)分别为96.98％和97.37％,RSD分别为1.68％和1.98％.结论 所建方法快速、准确,重复性好,可作为此制剂的定量分析方法.
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汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A油水分配系数测定
目的 采用摇瓶-HPLC法测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的表观油水分配系数.方法 借助水饱和正辛醇、正辛醇饱和磷酸盐缓冲液油水平衡体系,得到在一系列不同pH环境下汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的表观油水分配系数.结果 汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A在正辛醇-水体系中的油水分配系数分别为lgP=0.49、lgP=3.78和lgP=3.90 (37℃).结论 该法简便、准确、快捷,试验所得三者的油水分配系数可用于佐证其体内吸收变化.
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黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收特征
目的 建立同时测定Caco-2细胞模型中黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的HPLC法,探讨黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收机制.方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由肠腔侧(AP侧)到基底侧(BL侧)和BL侧到AP侧两个方向的转运过程.应用HPLC-UV对上述4个黄酮成分进行分析,计算转运参数和表观渗透系数(Papp).结果 黄芩总黄酮给药后,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由AP→BL侧的Papp分别为(1.65±0.38)×10-6、(1.58±0.21) ×10-6、(1.57±0.15)×10-6和(5.74±0.18)×10-6cm/s,由BL---AP侧的Papp分别为(1.23±0.24)×10-6、(1.22±0.16)×10-6、(1.27±0.07)和(5.13-0.19)×10-6cm/s;表观渗透率(PDR)分别为0.75、0.77、0.80和0.89.结论 4个黄酮类主要以被动吸收方式进入体内.
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千层纸素A内皮依赖性舒张大鼠离体血管的作用
目的:研究千层纸素A对离体大鼠胸主动脉的血管舒张作用及其内皮依赖性作用机制.方法:分离Wistar大鼠的胸主动脉,采用离体大鼠胸主动脉环张力测定法检测千层纸素A对1μmol/L去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)或60 mmol/L氯化钾预收缩的大鼠离体胸主动脉环的舒张效应,并观察去内皮或用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitroL-arginine methyl ester,L-NAME)预处理后千层纸素A舒张血管作用的变化.结果:千层纸素A(10、100 μmol/L)可以舒张NE(1μmol/L)和氯化钾(60 mmol/L)预收缩的内皮完整的离体血管,10、100 μmol/L药物浓度组与溶剂对照组比较差异有统计学意义( P＜0.05,P＜0.01);对去内皮血管的舒张作用显著低于内皮完整的血管(P＜0.05,P＜0.01);终浓度为100 μmol/L的L-NAME可以显著降低100 μmol/L.千层纸素A的舒血管作用,加入L-NAME组与不加入抑制剂组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:千层纸素A可通过内皮依赖的一氧化氯途径发挥舒张血管的作用.
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千层纸素A改善大鼠慢性心力衰竭的作用及其分子机制
探讨千层纸素A(oroxylin A,OA)对异丙肾上腺素诱导的大鼠心力衰竭的保护作用及其分子机制.与模型组相比,OA给药组[25、50、100 mg/(kg·d),每组8只大鼠,灌胃给药8周]可剂量依赖地改善大鼠心力衰竭的症状,血流动力学参数和心脏射血分数有较大改善,心脏功能指数明显恢复,心脏彩超及苏木精-伊红染色、Masson染色提示心脏损伤程度明显减轻,多种神经内分泌因子如去甲肾上腺素、醛固酮、脑钠肽等在OA给药组均显著下调.进一步利用大鼠原代心肌细胞发现,OA可通过抑制AKT1-RPS6KB1信号通路促进心肌细胞自噬.实验结果表明,OA可通过促进心肌细胞的自噬来改善异丙肾上腺素所诱导的大鼠心力衰竭.
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HPLC测定黄芩中6个成分的含量
目的 建立高效液相色谱法对黄芩中6个成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A)的含量分析方法.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3％磷酸三乙胺(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为275 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果 黄芩中的6个成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A进样量分别在0.416 7～4.167 μg(r=0.999 2)、0.078 15～0.781 5 μg(r=0.999 5)、0.053 21～0.532 1 μg(r=0.999 3)、0.016 36～0.163 6 μg(r=0.999 3)、0.001160～0.011 60 μg(r=0.999 1)、0.010 46～0.104 6 μg(r=0.999 4)范围内呈良好线性关系；平均回收率(n=5)分别为99.4％、100.1％、99.9％、100.2％、100.4％、100.1％,RSD分别为1.9％、2.2％、2.3％、1.6％、2.2％、2.1％.结论 该方法准确可靠、重复性好,为黄芩质量综合评价提供了科学依据.
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黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定
目的 建立同时测定黄芩总黄酮部位中4 种黄酮类成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,并测定其体外血浆蛋白结合率.方法 平衡透析法测定黄芩黄酮类成分血浆蛋白结合率,以高丽槐素为内标,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行预处理,采用HPLC法测定4种黄酮类成分在透析内、外液中的浓度.结果 在低、中、高3 种浓度下,黄芩苷(BL)和汉黄芩苷(WL)的血浆蛋白质结合率随给药浓度的增大而降低(BL:82.03%→77.25%→67.17%;WL:82.24%→76.08%→69.87%),而汉黄芩素(W)和千层纸素A(OA)则呈现非质量浓度依赖性,其平均血浆蛋白结合率分别为 (89.66±1.19)%、(88.56±1.87)%.结论 该文所建立的测定方法简便、灵敏、专属性强.4个黄酮类成分在大鼠体外均有较高的血浆蛋白结合率.
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不同产地黄芩药材中黄芩苷等5种黄酮类成分含量的比较
目的 通过对黄芩中5个黄酮类成分含量的测定,对不同产地的黄芩药材质量进行比较.方法 采用HPLC法,C18色谱柱(4.6 mm ×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.5％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0ml·min-1,检测波长为278nm,柱温27℃,对5种黄酮类成分进行测定,并对测定结果进行差异显著性检验以及聚类分析.结果 不同产地黄芩中黄酮类成分含量差异性较大,聚类分析将16批黄芩聚成两类.结论 本研究表明栽培黄芩与野生黄芩药材的质量有较大差异性,前者的质量普遍高于后者.道地产区的黄芩质量不一定好,应提高栽培技术来提高黄芩药材的质量及质量的均一性.
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千层纸素A通过腺苷酸活化蛋白激酶信号通路调控肝癌细胞增殖和凋亡
目的 观察千层纸素A对肝癌细胞MHCC97-H增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)法检测MHCC97-H细胞增殖能力;通过碘化丙锭(PI)/膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(Annexin Ⅴ-FITC)双染法检测MHCC97-H细胞凋亡率;通过Western blot检测相关蛋白表达水平.结果 3种浓度千层纸素A均可抑制MHCC97-H细胞的增殖能力,千层纸素A对MHCC97-H细胞增殖的抑制作用具有浓度依赖性;50、100和150 μmol/L千层纸素A处理后MHCC97-H细胞凋亡率分别为(18.87±0.37)％、(20.93±0.32)％、(24.37±0.47)％;100、150 μmol/L千层纸素A处理后MHCC97-H细胞的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达下降.结论 千层纸素A抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,并下调AMPK蛋白表达.
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千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究
目的 研究千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法 MTT实验考察千层纸素A在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究千层纸素A的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制药维拉帕米对其吸收的影响.结果 千层纸素A在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关；并受pH值影响,P-gp抑制药维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同.结论 千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运.
关键词： 千层纸素A Caco-2细胞模型 高效液相色谱 被动转运 -
RP-HPLC法测定黄芩属四种药材中五个活性成分的含量
目的:分析比较不同来源黄芩药材中五个有效成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A)的含量.方法:RP-HPLC法,Zirchrom C8色谱柱(5 μm,200×4.6 mm),流动相为水-乙腈-甲醇(54∶ 28∶ 18,V/V/V),含0.5%三乙铵,磷酸调pH 2.8,检测波长276 nm,进样量20 μl.结果:所有成分在30 min内可达到完全分离,每种成分在各自的浓度范围内均具有良好的线性相关性;加样回收率为99.0%～104.6%,其相对标准偏差为1.65%～3.52%.结论:本法操作简便,结果准确,适用于黄芩类药材的活性成分分析.
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高效液相色谱法测定砷胁迫下栽培黄芩根中5个黄酮类成分含量
目的:建立HPLC法测定经过砷胁迫处理栽培的黄芩根中5个黄酮类成分的含量.方法:采用C_(18)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,检测波长为275 nm,流速1.0 mL·min~(-1),柱温27 ℃.结果:5个黄酮类成分在30 min内司达到完全分离,每种成分在各自的检测浓度范围内线性关系良好.结论:本法操作简便,结果准确,可以同时测定黄芩中5个黄酮类成分的含量,而且首次应用于砷胁迫下黄芩中药效成分的量化分析,适用于黄芩类药材的成分分析及质量控制.
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MEKC-DAD同时测定黄芩中6个黄酮类成分的含量
目的:建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)同时测定不同批次黄芩及其炮制品中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A及芹菜素含量.方法:以40 mmol·L-1磷酸氢二钠-15 mmol· L-1硼砂-40 mmol·L-十二烷基硫酸钠-15％乙腈-7.5％丙醇(pH 8.4)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm × 64.5 cm,有效长度56cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为280 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5 kPa×6 s.结果:6个黄酮的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.9990);加样回收率为96.20％ ～ 103.6％.用此法测定了黄芩中6个黄酮类成分的含量,得到满意结果.结论:该方法简单、准确,重复性较好,可用于黄芩药材内在质量的评价和控制.
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HPLC法同时测定银黄制剂中9个成分的含量
目的:建立同时测定银黄制剂中9个成分(绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、黄芩苷、木犀草素、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A)含量的高效液相色谱方法.方法:采用Sepax GP-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.1％甲酸甲醇溶液-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-,黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A的检测波长为275 nm,绿原酸和咖啡酸的检测波长为320 nm,木犀草苷和木犀草素的检测波长为350 nm,柱温30℃,进样量20 μL;液质联用法确认化合物的结构.结果:9个成分在考察的浓度范围内,浓度与峰面积之间呈良好的线性关系(r ＞0.9997);回收率(n=9)均在97.1％ ～ 103.9％范围内,RSD均小于2.6％.批内精密度RSD均小于1.0％,批间精密度RSD均小于1.7％.结论:本方法简便、准确,精密度高,重复性好,可用于银黄制剂的质量控制.
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HPLC法测定黄连、黄芩药对提取物中11个成分的含量
目的:建立高效液相色谱法测定黄连、黄芩药对提取物中11个成分(药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A)的含量.方法:采用Phenomoil 5μ C18 BDS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(37:63,内含磷酸二氢钾0.3400 g,十二烷基硫酸钠0.1700 g,磷酸调pH约为4),流速1.0 mL·min-1,检测波长349 nm,柱温30℃,对药对中黄连进行测定;采用Agilent ZORBAX SB-C1s(250 mm ×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3％磷酸三乙胺(B)水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长为275 nm,柱温30℃,对药对中黄芩进行测定.结果:药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A进样量分别在0.015～0.15 μg(r =0.9997)、0.033～0.33 μg(r =0.9993)、0.17～1.7 μg(r=0.9991)、0.079 ～0.79μμg(r =0.9991)、0.31 ～3.1 μg(r=0.9991)、0.42～4.2 μg(r =0.9992)、0.078 ～ 0.78 μg(r =0.9995)、0.053 ～0.53 μg(r =0.9993)、0.016～0.16μg(r =0.9993)、1.2×10-3 ～0.012 μg(r =0.9991)、0.010～0.10g(r =0.9994)范围内呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为100.1％、97.7％、97.6％、102.2％、99.4％、99.3％、99.9％、99.8％、101.1％、101.1％、100.3％,RSD分别为2.1％、1.1％、1.2％、0.9％、1.2％、1.8％、1.8％、2.2％、2.0％、1.9％、2.3％.结论:该方法为黄芩、黄连药对提取物的质量综合评价提供了科学依据.
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RP-HPLC测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的PKa
目的:采用反相高效液相色谱法测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pK,为该单体的剂型设计与临床应用提供重要参考.方法:基于待测成分保留因子(h)随流动相的pH变化而变化,采用乙腈-不同pH缓冲盐溶液作为流动相,依次测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的k,根据pK和k的函数关系计算其pK.结果:汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pH-k曲线均呈现S型,pK分别为3.84±0.16、7.48 ±0.11、7.53±0.13.结论:该方法具有样品损耗少,分析速度快,重现性好,准确度高,方便简单的特点,可用于测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pK.
