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甲亢患者骨钙素变化的分析
甲亢患者中甲状腺激素水平明显升高,而甲状腺激素与骨成熟、发育有关,参与人一生骨骼再塑造的全过程.骨钙素(BGP)是由成骨细胞产生并沉积在骨基质.甲亢时,在过量的甲状腺激素的作用下,成骨细胞和破骨细胞的活性和数量发生变化,导致BGP水平的变化.本文通过测定甲状腺激素与BGP水平的变化进行临床分析.
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2型糖尿病骨质疏松大鼠骨重建研究
目的 通过建立2型糖尿病骨质疏松大鼠模型,探讨其骨重建特点.方法 雌性Wistar大鼠分为假手术组(NS组);去卵巢组(NOVX组);2型糖尿病假手术组(DS组)和2型糖尿病去卵巢组(DOVX组).糖尿病组大鼠造模成功后行双侧卵巢切除术,0、4、8和12周测血糖(FPG)、胰岛素(FINS)、雌激素(E2)及血清骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b),同期测定骨密度(BMD)并行成骨和破骨细胞培养.结果 0周时DOVX组的血糖(13.1±4.9)mmol/L明显高于NS组的(4.4 ±0.6)mmol/L(P<0.05).4周时DOVX组的BMD为(0.073 ±0.012)g/cm2明显低于NS组的(0.098±0.016)g/cm2(P<0.05).4、8和12周时DOVX组的B-ALP与NS组均无差异,而4和8周时DOVX组的TRACPSb明显高于NS组(P<0.05).4、8和12周时DOVX组的成骨细胞活力与NS组均无差异,而DOVX组的破骨细胞计数明显高于NS组(P<0.05).结论 2型糖尿病骨质疏松大鼠骨蘑建特点为骨吸收活跃而骨形成相对减慢.
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细胞因子诱导破骨细胞分化的2种实验模型的建立
目的 探讨体外从单个核细胞诱导分化形成破骨细胞的2种不同方法 ,建立研究细胞因子对破骨细胞分化作用的2种不同实验模型.方法外周血单个核细胞在10-8mol/L LTB4和25μg/L M-CSF刺激下,经过2周的直接诱导分化;外周血单个核细胞与RAFLs共培养,加入10-8 mol/L LTB4和25μg/L M-CSF,经过3周的间接诱导分化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞样细胞(OCL).结果 通过直接分化和间接分化均可形成破骨细胞样细胞.结论 2种不同实验模型能分别用于研究细胞因子对破骨细胞的直接和间接分化作用.
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双氢青蒿素抑制核因子κB受体激动剂配体诱导RAW264.7细胞分化破骨细胞的研究
目的 探讨双氢青蒿素(DA)对核因子κB受体激动剂配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞的影响.方法 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)确定不同浓度(1、5、10、50、100、200 μmol/L)DA对RAW264.7细胞的生存影响.分别用50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+5、10、50、100 μmol/L DA诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞,共3 d.对形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数,TRAP染色阳性且细胞核数目>3个认为是成熟的破骨细胞.50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+10、100 μmol/L DA培养RAW264.7细胞24 h,用Trizol试剂提取总RNA,并使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化相关基因NFATc1、c-fos及Cathepsin K的表达.结果 1、5、10、50、100 μmol/L DA对RAW264.7细胞毒性较小,细胞存活率均>90%.TRAP染色显示,5、10、50、100 μmol/L DA可以减少RANKL诱导成熟破骨细胞的数目,并呈剂量依赖关系(F=139.156, P<0.01).实时荧光定量PCR结果显示,10、100 μmol/L DA具有下调破骨细胞分化关键基因NFATc1和c-fos表达的作用,且100 μmol/L抑制作用比10 μmol/L明显,但两种浓度DA对Cathepsin K的表达无明显影响.结论 DA对RAW 264.7细胞毒性较低,通过下调RAW 264.7细胞NFATc1和c-fos基因表达抑制RANKL诱导破骨细胞形成.DA可以作为治疗骨质破坏性疾病的潜在药物.
关键词： 青蒿素 双氢青蒿素 核因子κB受体活化因子配体 破骨细胞 RAW264.7细胞 -
PERK-eIF2α-ATF4信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解
目的 探讨蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核细胞起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)介导的内质网应激通路在磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用.方法 取雄性ICR小鼠30只,随机分为3组:假手术组(sham,n=10)、TCP磨损颗粒组(模型组,n=10)和salubrinal干预组(SAL,n=10).采用TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型,于术后第2天颅顶局部注射SAL(1 mg/kg),每隔2d1次,持续干预2周.实验结束后处死动物取颅骨和外周血.Western blotting法检测TCP磨损颗粒植入部位周围骨组织中内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平及PERK-eIF2α-ATF4信号通路的活化情况;HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察SAL对假体周围骨溶解和破骨细胞形成的影响;Real-time PCR检测SAL对破骨细胞活化相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和c-fos的mRNA水平;ELISA法检测SAL对血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响.结果 TCP磨损颗粒可诱导假体周围骨组织发生内质网应激反应,同时激活PERK-eIF2α-ATF4信号通路,表现为TCP磨损颗粒组小鼠颅骨组织中内质网应激通路蛋白GRP78、CHOP和磷酸化PERK(p-PERK)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)和ATF4蛋白表达均显著上调,而PERK和eIF2α蛋白明显下调(P＜0.05);而颅顶局部注射eIF2α特异性抑制剂SAL可明显阻止TCP磨损颗粒诱导假体周围破骨细胞形成和骨溶解,减少TRAP、MMP-9和cathepsin K的mRNA水平(P＜0.05);同时抑制TNF-α、PGE2和IL4β等炎症因子的产生(P＜0.05).结论 PERK-eIF2α-ATF4介导的内质网应激通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解;抑制该信号通路可减轻TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解和关节松动.
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破骨细胞在类风湿性关节炎骨破坏中的作用及其调控机制
类风湿性关节炎(RA)是一种严重的慢性炎症性疾病,关节软骨及骨的破坏是患者致残的主要原因.近年大量相关研究表明,破骨细胞(OC)在RA骨破坏的病理过程中起关键作用.多种细胞因子参与了对OC生成、活化的调控.其中起正调控作用的主要有IL-1、TNFα、RANKL、M-CSF、IL-6、IL-8、IL-17、IL-7、IL-11、IL-15等,起负调控作用的有OPG、IL-4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-λ等.OC及其调控因子的研究为RA骨破坏的治疗提供了一些潜在的靶点,具有重要的理论意义和实用价值.
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云南白药对牙龈卟啉单胞菌诱导骨破坏中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达的影响
目的 通过动物实验检测动物血清中IL-6、TNF-α的含量变化及头颅骨中的破骨细胞的表达情况,评价云南白药对牙龈卟啉单胞菌(P.g)诱导骨破坏的影响.方法 选用雄性昆明小鼠72只,用随机数字法分为模型组、白药治疗组和对照组.模型组和云南白药治疗组在小鼠两耳中间颅顶至枕部骨的骨上,接种P.g 1×108 cfu/ml,200μl,分2次隔日注射,对照组则注射同等剂量的生理盐水.同时云南白药治疗组在建模的当天开始给予云南白药灌胃每只0.5 ml(12.5 g/L),模型组和对照组则给予同等剂量的生理盐水灌胃.在建模的第5天、第8天、第14天分批各组各处死8只.运用ELISA方法检测各组中血清TNF-α、IL-6的含量变化;抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)染色法检测头颅骨中破骨细胞的含量.结果 分别在第5天、第8天和第14天,对3组小鼠血清中TNF-α、IL-6的含量和破骨细胞的数目进行两两比较,发现模型组明显高于云南白药治疗组(P＜0.05),且在第5天达到高峰,TNF-α为(621.18±29.55)μg/L,IL-6为(79.15±3.12)μg/L,破骨细胞为5.61±0.24;同时两组和对照组相比也高于对照组(P＜0.05).结论 云南白药有明显抑制骨破坏的作用,其机制可能与降低IL-6、TNF-α的表达,抑制破骨细胞的形成,从而抑制骨的吸收有关.
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胰岛素信号转导通路与骨重建
骨是一持续重建的组织.骨重建主要由破骨细胞和成骨细胞参与,以破骨细胞激活和骨吸收开始,以与之相耦联的成骨细胞激活和骨形成终结,贯穿于整个生命过程的始终[1].破骨细胞和成骨细胞功能受到全身和局部诸多因素调控,除生长激素、雌激素、甲状旁腺激素外,胰岛素信号转导途径相关因子也起着重要作用.本文就胰岛素信号通路对骨重建的作用进行综述.
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益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达骨保护素mRNA的影响
目的 观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞表达骨保护素(OPG)mRNA的影响.方法 取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞(OB)；取5d龄SD大鼠四肢长骨分离培养破骨细胞(OC).建立上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为含药血清组和对照组.将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清.检测共育体系中成骨细胞OPG mRNA的表达.结果 含药血清组与对照组比较,OPGmRNA表达明显升高(8.2567±0.1118比3.3350±0.9854),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 益骨胶囊含药血清在共育体系中通过刺激OB表达OPG来实现对OC的活性和凋亡的调节.
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富于巨细胞的骨肉瘤1例报道并文献复习
目的探讨富于巨细胞的骨肉瘤的临床、影像学、病理学特点,以提高诊治水平.方法通过影像学、组织学及免疫组织化学对富于巨细胞的骨肉瘤进行观察,总结其特点,并结合文献加以分析.结果富于巨细胞的骨肉瘤呈溶骨性破坏,有大量破骨细胞样巨细胞且分布均匀,与出血无空间关系.背景为成骨性骨肉瘤.免疫组化示破骨细胞样巨细胞、少量组织细胞样单核细胞CD68(+),异型性单核细胞及瘤巨细胞CD68(-);所有细胞vimentin(+),CK、S-100、CD34(-)结论富于巨细胞的骨肉瘤属罕见病例,在影像学、组织学上极易误诊,诊断依赖临床、影像学、病理学三方面的结合.
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甲状腺破骨细胞样巨细胞性未分化癌2例并文献复习
目的报道2例少见的甲状腺破骨细胞样巨细胞性未分化癌并进行文献复习.方法对此瘤的临床病理特征做详细的形态学观察和免疫组织化学检查并进行分析.结果甲状腺破骨细胞样巨细胞性肿瘤主要由两种细胞组成,一种为多核巨细胞,分两型:一型为破骨细胞样多核巨细胞,核数目多;一型为较小的具明显异型性的瘤巨细胞,核数目较少.另一种为单核细胞,也分两型:一型为组织细胞样单核细胞,一型为梭形、多角形的单核细胞.免疫组织化学研究显示,破骨细胞样多核巨细胞、组织细胞样单核细胞CD68(++),所有细胞vimentin(++),cy-tokeratin、EMA、NSE、Syn、CgA和calcitonin均(-);少量梭形单核细胞、异型多核细胞的thyroglobulin为局灶阳性.结论该肿瘤属甲状腺未分化癌的另一种亚型.破骨细胞样多核巨细胞是组织细胞样单核细胞融合的结果,来源于单核巨噬系统,属反应性改变.
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伴破骨巨细胞的低级别尿路上皮癌1例
患者男性,61岁.肉眼血尿1个月.CT示双肾盂占位1.5 cm×2 cm大小,疑为恶性肿瘤.前列腺部表面菜花状肿物,绒毛状隆起,无蒂部.前列腺活检:软组织巨细胞瘤.实验室检查:PAS(-).病理检查 前列腺肿物(PURP标本),灰白色碎组织一堆,大小3.0 cm×1.7 cm×0.6 cm;前列腺组织(PURP标本):灰白色碎组织一堆,大小4 cm ×3 cm×1.5 cm.镜下见前列腺组织呈良性前列腺增生,尿路上皮呈乳头状增生,细胞层次增多(多达15层),极性紊乱,细胞核增大,核浆比增高,染色质增粗,可见核仁,未见核分裂象,呈低级别尿路上皮癌形态(图1).
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破骨细胞参与调控骨髓造血微环境
骨髓造血微环境存在于全身骨骼的骨髓腔内,是机体造血以及免疫细胞发育的场所.骨髓造血微环境中的破骨细胞由造血干细胞分化发育而来,在骨重塑中发挥重要作用.近年来的研究表明,破骨细胞与微环境稳定、应激时造血干祖细胞动员及骨免疫密切相关.深入探究破骨细胞与骨髓造血微环境中其它细胞的相互关系,有利于寻找造血、骨免疫疾病和肿瘤等方面新的治疗策略.本文就破骨细胞的发育来源与鉴定、破骨细胞与造血干细胞动员的调节及破骨细胞与骨免疫进行综述.
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马钱子碱对多发性骨髓瘤中成骨细胞及破骨细胞代谢的影响
本研究旨在探讨体外马钱子碱对多发性骨髓瘤(MM)中成骨细胞早期分化和破骨细胞代谢途径的影响,同时比较马钱子碱与硼替佐米在体外对多发性骨髓瘤的影响.用MTT法检测硼替佐米与马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞株U266的半数抑制浓度(IC(50));将多发性骨髓瘤细胞株U266的上清液加入到成骨细胞MC3T3-E1诱导分化体系中培养后,用RT-PCR方法测定碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OC)、骨保护蛋白(OPG)及骨保护蛋白配体(RANKL)的mRNA水平.结果表明,硼替佐米作用于多发性骨髓瘤细胞株U266 48小时后半数抑制浓度(IC(50))为22.4 nmol/L,马钱子碱为0.16 mg/ml;经马钱子碱及多发性骨髓瘤细胞上清液共同干预组的成骨细胞中ALP、OC及OPG的mRNA水平高于只经多发性骨髓瘤细胞上清液干预组的成骨细胞的表达水平(p<0.05),而RANKL的mRNA水平则降低(p<0.05),且它们增高或降低的程度大于硼替佐米作用组(p<0.05).结论:马钱子碱对多发性骨髓瘤中骨代谢机制的影响可能通过成骨细胞对破骨细胞的调节而发挥作用.实验证实,马钱子碱时多发性骨髓瘤的治疗效果优于硼替佐米.
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类风湿关节炎关节液来源的间充质干细胞分离鉴定及其对破骨细胞发育的影响
为了研究炎性微环境对于间充质干细胞生物学特性的影响,从类风湿性关节炎病人关节液中分离得到间充质干细胞,以流式细胞术测定其免疫学表型,以成骨和成脂肪诱导检测其多向分化能力,将其与CD14+的单核细胞共同培养并以抗酒石酸的酸性磷酸酶染色检测对破骨细胞的调控作用.结果表明:类风湿性关节炎病人关节液中分离得到的问充质干细胞高达CD105,CD73,CD29,CD44,CD166和札A-ABC,低表达CD34,CD45,CD31,HLA-DR,CD80和CD86;与健康人骨髓间充质干细胞相比,其向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力下降,而且其支持更多的破骨细胞生成(P<0.05).结论:类风湿性关节炎病人关节液中存在的问充质干细胞具有与骨髓闻充质干细胞相似的表型,但是其多向分化能力下降,更有意义的是其支持破骨细胞生成的能力增强.本研究结果有助于了解病理微环境中的间充质干细胞生物学特性.
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血清sRANKL/OPG比值在判断多发性骨髓瘤骨病中的意义
本研究探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清中可溶性核转录因子-κB受体活化因子的配体(sRANKL)和护骨蛋白(OPG)的水平与多发性骨髓瘤骨病(MBD)之间的关系.采用酶联免疫吸附法检测了42例初诊的MM病人(观察组)以及25例健康体检者(对照组)外周血清中sRANKL和OPG的水平以及破骨细胞代谢指标抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b)与I型胶原蛋白羧基末端交联肽(CTP-I)的水平,同时根据全身X光摄片判断MM患者骨损害情况并分析sRANKL/OPG比值与TRAP-5b、CTP-I水平和骨损害发生及其程度之间的关系.结果发现:观察组患者血清中sRANKL水平升高(中位水平9.33μg/L),OPG水平下降(中位水平4.931μg/L),sRANKL/ OPG比值明显升高(比值2.65),与对照组相比各对应指标之间的差异均具有显著性(p<0.05);MM患者血清中sRANKL/OPG比值与TRAP-Sb(r=0.512,p<0.05)和CTP-I(r=O.481,p<0.05)水平之间均存在相关性.将观察组患者按有无骨损害分组发现,骨损害组(29例)和无骨损害组(13例)的sRANKL/OPG比值分别为5.13和1.12,有骨损害组的比值明显升高(p<0.05);如果按骨损害程度分组还发现,sRANKL/OPG比值与骨损害程度密切相关(r=0.445,p<0.05),但不同临床分型和不同临床分期(ISS分期)的MM患者之间,血清sRANKL/OPG比值的差异均无统计学意义(p>0.05).结论:MM患者血清中sRANKL/OPG比值明显升高,不仅与破骨细胞代谢增强有关,还与骨损害的发生及其程度相关,所以sRANKL/OPG比值可作为判断MBD的一个参考指标.
关键词： 多发性骨髓瘤骨病 核转录因子-κB受体活化因子 护骨蛋白 破骨细胞 -
向成骨细胞和成脂肪细胞分化的小鼠骨间充质干细胞调节单核细胞来源的破骨细胞发育
为探究分化阶段的骨间充质干细胞对于破骨细胞的影响,将小鼠密质骨来源的间充质干细胞体外诱导分化,研究其对于破骨细胞发育的调控作用.从小鼠密质骨中分离培养得到间充质干细胞,将其进行成骨和成脂肪诱导1周,分别将成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞与CD11b+的单核细胞共同培养,并以抗酒石酸的酸性磷酸酶染色鉴定破骨细胞.结果表明:向成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞均可以调节单核细胞向破骨细胞分化.与未分化的间充质干细胞相比,成骨分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用减弱,而成脂肪分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用增强.结论:间充质干细胞调节破骨细胞发育的能力在其分化为不同种类细胞后发生相应变化,提示间充质于细胞通过分化为子代细胞而对破骨细胞发育发挥选择性的调节.
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核转录因子κB受体激活剂可能通过新的信号途径调节破骨细胞分化
本研究探讨生理条件下核转录因子(NF-κB)受体激动剂(RANK)调节破骨细胞(osteoclascts,OC)分化的信号传导途径,为阐明多发性骨髓瘤骨损害的发生机制提供理论依据.针对535-IVVY-538是RANK调节OC分化的特异性结构域,用缺失突变方法删除RANK膜内区域IVVY这4个氨基酸,构建1个由肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和RANK膜内部分组成的突变嵌合体(RANK-Mu).用包装细胞plat E分别将RANK-Mu和无突变的TNFR1/RANK嵌合体(RANK-WT)包装成逆转录病毒,通过感染分别将这两种逆转录病毒转染到TNFR1/TNFR2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMM)中.用TNFα刺激这两种转染后的BMM,观察BMM向OC分化情况,同时用Western blot方法检测这两种BMM受刺激后细胞内NF-κB、JNK、P38和ERK蛋白磷酸化的表达.结果发现:用TNFα刺激后,转染RANK-WT的BMM能分化成OC,BMM中的NF-κB、JNK、P38和ERK磷酸化蛋白在受刺激后5-10分钟表达明显增强,而转染RANK-Mu的BMM不能分化成OC,但BMM中的NF-κB、JNK、P38和ERK磷酸化蛋白同样在刺激5-10分钟后出现表达增强.结论:RANK可能不通过NF-κB、JNK、P38和ERK 4条经典信号传导途径调节OC分化,调节OC分化可能还有其它新的信号途径.
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bBMP异位诱导成骨的组织学长期观察
目的 长期观察并获得单纯牛骨形态发生蛋白(bovine bonemorphogenetic protein,bBMP)异位诱导成骨的组织学变化.方法 (20±2)g昆明小鼠21只,麻醉后于双侧股部肌肉中直接植入块状bBMP各2mg,分别于第1、2、4、6、8、10、12周各处死3只,切取诱导分化组织,5%戊二醛固定,标本用10%EDTA脱钙后制作5μm石蜡切片,分别行甲苯胺蓝染色,HE染色,丽春红三色染色观察组织学变化情况.结果 植入1周,大量分化良好的间充质细胞和幼稚软骨细胞形成一椭圆形分化组织块;植入2周,大量骨小梁生成,部分骨小梁边缘骨化;植入4周,骨小梁转化为成熟的骨质,骨质中有散在于骨细胞中的破骨细胞生成;植入6～12周,椭圆形骨组织块内部小梁骨逐渐吸收、断裂、不连接,但外周骨质逐渐塑形,局部成熟骨质周边仍伴有新生骨形成.结论 bBMP无需任何载体即可在肌肉中异位成骨,具有强大的异位骨诱导能力;血供在异位骨的形成和维持中可能起着重要作用.
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类风湿性关节炎T细胞活化及其与疾病活动的相关性研究
类风湿性关节炎(RA)是一种病因复杂的自身免疫性疾病,其发病机制至今仍不十分清楚.T细胞活化后可通过高表达CD69、CD25、CD3HLA-DR等表面活化标记分子,以直接接触的方式调控着巨噬细胞、树突状细胞、B细胞、滑膜细胞、破骨细胞的功能,释放各种细胞因子、抗体和酶类,由此引起滑膜炎症和增生,终导致关节病理性损伤.选择检测异常活化的T细胞的表面标记分子的表达,探讨其与RA疾病活动指标之间的相关性.
