首页 > 文献资料
-
基因表达谱芯片对结肠癌相关基因的研究
基因芯片技术是一项低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因表达谱的新技术[1],目前已广泛应用于基因功能的研究,尤其是肿瘤发生的分子生物学方面的研究.结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,发病率在逐年增加,已成为严重危害人民健康的主要疾病之一.结肠癌的发生和发展与许多已知的和未知的基因相关,用基因芯片方法寻找在结肠癌组织中特异性表达差异的基因,会对结肠癌的早期诊断、防治起到积极的作用.
-
微小RNA与消化系统疾病诊治研究
微小RNA(miRNA)是生物体内源产生的小RNA分子,它介导序列互补mRNA断裂或阻抑其翻译合成蛋白质,调控目的基因表达.越来越多的研究表明,miRNA是重要的转录后基因调控元件,其表达直接影响相关编码蛋白基因功能,参与包括消化系统在内的多个系统生理和病理生理过程¨].miRNA有望成为消化系统疾病基因诊断和治疗的新手段,本文就此作一综述.
-
表面增强激光解析离子化-飞行时间-质谱仪特点及其在消化系统疾病研究领域中的应用
人类基因组计划已进入功能基因组时代[1],作为基因功能的直接体现者-蛋白质及其之间的相互作用越来越引起基础和临床科学家们的关注.正因为如此,蛋白质组学(proteomics)研究成了生命科学重要的焦点之一[2].
-
酵母双杂交技术筛查与vasostatin相互作用的蛋白质
目的:通过酵母双杂交技术筛查与血管生长抑制因子vasostatin相互作用的蛋白质,为进一步阐明其抑制血管生成作用的分子机制奠定基础.方法:应用第3代酵母双杂交系统,构建vasostatin诱饵质粒,经过表达和自激活验证后筛选预转化的人内皮细胞cDNA文库.将在四缺培养基中筛选得到的阳性克隆提取酵母质粒转化大肠杆菌,进行限制性酶切和测序,寻找可能与vastotatin具有相互作用的蛋白序列.结果:经过酵母双杂交共获得21个克隆,经过验证,有3个阳性克隆;经过NCBI的BLAST进行同源性分析,它们的核酸和蛋白序列与已知基因高度同源,它们分别为层黏连蛋白α5(7 547~8 112)和整合素αV(1 257~1 820、316~878)片段,均为重要的配体结合部位.Vasostatin蛋白通过与该区域结合,影响FAK、VEGF和bFGF等的信号通路,抑制血管生成.结论:酵母双杂交筛选获得的层黏连蛋白和整合素蛋白的3个蛋白片段,它们与肿瘤内血管内皮细胞增殖和迁移等密切相关.
关键词: 酵母双杂交 vasostatin 基因功能 -
肿瘤相关新基因HC90的表达差异及初步功能研究
目的对新基因克隆HC90进行蛋白表达、各种肿瘤组织和细胞系中表达差异检测和体内外功能研究.方法用pET-32a融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中对该基因进行表达,免疫小鼠制备小鼠源性多克隆抗体;从体外细胞集落形成试验,裸鼠体内成瘤实验,原位杂交,免疫细胞化学及免疫组化检测HC90基因的表达差异和对体内外细胞生长影响的生物学功能进行研究.结果 SMMC 7721细胞系的体外集落形成试验表明,HC90转染组与空载体组和p53对照组相比集落形成数显著增加(P<0.05和P<0.01);转染细胞系的裸鼠体内成瘤实验结果表明该基因对L929细胞系的成瘤有明显促进作用(P<0.05);免疫组化结果显示HC90在人多种肿瘤组织,癌旁和正常组织中均有不同程度的表达,总体上表现为癌组织>癌旁组织>正常组织.结论 HC90是个新的肿瘤相关基因.
-
基因功能研究中线粒体定位方法的比较
目的比较和选择佳细胞线粒体定位方法及其适用范围。方法采用免疫细胞化学、免疫组织化学、荧光免疫细胞化学和活细胞培养法对不同细胞系和癌细胞的线粒体定位方法进行比较。结果几种线粒体定位方法各有其特征和适用范围,但均具很高的特异性。结论免疫组化法可用于组织中(即体内)细胞线粒体的显示;免疫细胞化学、荧光免疫细胞化学和活细胞培养法可用于体外基因功能研究中培养细胞的线粒体定位。
-
RNA干扰技术及其在神经科学研究中的应用
RNA干扰(RNAi)是指生物体内由双链RNA介导同源序列mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象.近年来,随着对RNAi研究的不断深入,其作用机制正在逐步被阐明;同时作为阻断基因表达的新手段,RNAi技术也日趋完善和成熟.以其高效性和特异性,RNAi为反向遗传学在神经科学研究中的应用提供了有力的工具.本文仅就RNAi技术的有关研究进展及其在神经科学研究中的应用作一概述.
-
严重烧伤大鼠早期骨骼肌中miRNAs表达谱数据基因功能分析
严重烧伤后高代谢表现为骨骼肌消耗,其中胫骨前肌消耗较为明显,蛋白水平、基因水平和信号通路方面的进一步研究证实:泛素-蛋白酶体介导的蛋白降解、骨骼肌细胞凋亡、内质网应激等是烧伤后骨骼肌消耗的重要原因[1-4].但略显不足的是,对非编码RNA的表观遗传学上游调控方面的机制尚未进行深入研究[5].笔者之前利用芯片筛查技术,发现严重烧伤大鼠早期胫骨前肌中microRNA表达水平明显改变[6].本研究拟通过基因功能分析方法,发现差异microRNA参与调控机制的可能方向,为进一步研究表观遗传调控机制提供理论依据.现报道如下.
-
海洋微生物资源的研究与开发应用
随着全球人口的增长和社会的发展,资源短缺与环境恶化日益加剧,向海洋进军、从海洋取宝,开发海洋生物资源已成了人类的共识.海洋约占地球表面积的71%,是一个开放、多变、复杂的生态系统.正是海洋特殊的物理、化学因素的复杂性,造就了生命活动的复杂性,物种资源、基因功能和生态功能上的生物多样性.也因此,海洋生物尤其是海洋微生物产生了许多独特的生理生化模式,形成了许多特殊的次生代谢产物,这是陆地生物所不能比拟的.本期刊登了一组海洋微生物资源研究的文章,这里对海洋微生物的研究现状作一回顾.
-
酵母双杂交研究与RIG-G相互作用的蛋白
目的应用酵母双杂交技术研究能够与维甲酸诱导的G基因(RIG-G)发生作用的蛋白,以了解其功能. 方法应用酵母双杂交技术,以RIG-G为诱饵,筛选人类骨髓cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白.利用生物信息学,一对一酵母回复性杂交,β-GAL实验等提供的信息,筛除假阳性克隆,确定阳性克隆. 结果经过酵母双杂交共获得109个克隆,经过验证,有24个阳性克隆,它们分别是细胞的信号传导蛋白、细胞骨架蛋白、激酶等. 结论为了研究诸如RIG-G新基因的功能,酵母双杂交技术是可靠的分子生物学技术.
-
4个与营养代谢相关基因对小鼠的血清生化指标的影响
目的 研究4个与营养代谢相关基因(DL、Tr、Pe、P3)对BALB/c小鼠的血液生化指标的影响.方法 将4个基因的反义核酸微量定量注入小鼠侧脑室.设反义核酸实验组、随机序列核酸对照组和生理盐水对照组3组;3次注射后于第4天取血清进行生化指标测定.结果 DL和Tr实验组与对照组分别在6项指标上有显著性差异,Pe实验组、P3实验组与对照组分别有4项和3项指标有显著性差异.结论 3个反义核酸实验组(DL、Tr和P3)BABL/c小鼠的血中甘油三酯含量都显著高于对照组,尤其是Tr反义核酸实验组的胆固醇含量也显著高于对照组,且都超出正常值范围,进一步证明Tr基因与脂类代谢有一定的相关性.另外上述3个反义核酸实验组fDL、Tr和P3)的血中葡萄糖含量也明显高于对照组并超出正常值范围,说明这些基因还可能与糖代谢相关.
-
用不同实验小鼠品系对10个基因进行功能复筛的研究
作者利用反义核酸技术建立了用于神经系统新基因功能筛选研究用的小鼠行为学检测平台,用BALB/c小鼠对38个小鼠的新基因功能进行了初步筛选,又从中选取了10个与生理盐水(saline)及随机序列核酸(scramble)两个对照组都具有统计学差异的基因,进一步使用C57BL/6和ICR小鼠进行了复筛.实验结果发现,各品系小鼠的表现不尽相同.初筛结果显示:10个基因中与记忆相关的有6个,与痛觉相关的有2个,另2个与运动相关.但复筛的实验结果为:与记忆相关的只有3个(Am,L和Sn),与痛觉相关的有2个(Pe和Rp).研究说明了用不同品系进行复筛的重要性,也说明了在基因功能筛选实验中,使用近交系实验小鼠优于远交群.研究不同品系在同一实验中的不同表现,同研究用不同品系来验证同一实验结果一样,对于动物实验和实验动物科学的发展都有着重大的理论意义和现实意义.
-
RNA干扰技术基础与病毒学应用
RNA干扰(RNAi)是指由双链RNA始动的序列特异性转录后基因沉默机制,Fire等首先用这一术语描述双链RNA阻滞线虫基因表达这一现象.现已证实,RNAi不仅存在于线虫,也存在于昆虫、植物、真菌和脊椎动物.1999年Tuschl等将果蝇胚胎提取物中小RNA介导的靶mRNA降解,提出了RNAi的作用模式:大于30个碱基对的长双链RNA(dsRNA)被加工成21~23 nt的小干涉RNA(siRNA),后者可介导特异性mRNA的降解.如今RNAi在发育生物学、基因调控、基因功能的研究以及肿瘤和病毒的基因治疗等方面发挥了重要的作用.
-
寻常性银屑病差异表达microRNAs与靶基因及基因功能调控网络的研究
目的:探讨寻常性银屑病差异表达microRNA(miRNA)与靶基因及基因功能之间的调控网络及作用机制.方法:采用基因芯片技术筛选寻常性银屑病患者皮损组织和血浆中差异性表达一致的miRNA,并通过生物信息学对差异表达的miRNA进行靶基因预测及靶基因功能富集分析.结果:经反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术验证,与基因芯片差异表达一致共有7个miRNAs,其中miR-30e-5p、miR-192-5p和miR-17-3p在皮损和血浆中表达均下调;miR-1227-5p、miR-125b-5p、miR-642a-5p和miR-29a-5p在皮损中表达上调,而血浆中表达下调.结论:差异表达的miRNA主要调控的靶基因及其基因功能与银屑病发病密切相关.
-
胃癌组织错配修复基因hMLH1的表达
肿瘤的发生是一个多步骤、多阶段的过程,它涉及到多种癌基因和抑癌基因的突变和积累,错配修复基因功能的失活,导致癌基因激活和抑癌基因失活,终引起细胞恶变和肿瘤形成[1].国外对胃癌的研究证实了错配修复基因功能的失活与胃癌的发生有着一定的关系.本研究通过检测胃癌中的错配修复基因hMLH1的表达,以探讨hMLH1与胃癌临床特征的相关性,力求寻找一种更为有效的遗传标记,为胃癌的早期诊断、治疗提供参考.
-
携带p16基因真核表达质粒载体的构建
p16基因定位于9p21,编码一个16kD的蛋白质,此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的抑制因子(CDK4I).有研究者发现将全长p16基因的cDNA导入无p16基因的人类胶质瘤细胞中可显著抑制其生长.因此,构建p16真核表达载体,针对恢复p16基因功能的基因治疗策略,将对肿瘤的治疗产生积极的意义.
-
野生型p53基因治疗肿瘤研究进展
人们对基因的结构和功能做了大量深入细致的研究,发现超过50%以上的人类肿瘤存在p53基因的异常,p53基因与肿瘤的发生、发展以及肿瘤病人的预后关系密切.p53基因治疗,目的是纠正恶性细胞中突变的p53基因功能,在多种肿瘤的体内外试验中显示出明显疗效,本文就该方面研究进展作一综述.
-
miR-144/451基因簇调控网络的生物信息学分析
目的 生物信息学方法 是预测miRNA二级结构及miRNA靶基因的有用工具.miRNA、转录因子和靶基因之间的调控网络参与多种生理、病理活动的分子机制.文中用生物信息学方法 预测mir-144/451基因簇的调控网络结构.方法 运用多个在线数据库,研究miR-144/451基因簇的上游转录因子及下游靶基因间的多个反馈和前反馈环路,对参与miR-144/451基因簇调控环路的基因进行功能聚类分析,绘制miR-144/451基因簇的核心调控网络图.结果 miR-144/451基因簇与其上游转录因子GATA1有17个共调控的靶基因,与生物体蛋白磷酸化、性腺发育、上皮细胞分化、葡萄糖代谢等生化学过程密切相关,并参与胰岛素信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路及黄体酮调节卵细胞成熟等体内重要生理过程.结论 对miR-144/451基因簇调控网络的生物信息学分析有助于理解其在细胞发育、细胞周期调控和肿瘤发生过程中的作用机制,为后续实验提供了理论依据.
关键词: 微小RNA miR-144/451基因簇 生物信息学 反馈环路 基因功能 -
肿瘤基因与药物治疗
随着人类基因组草图绘制的完成,基因功能和基因突变的研究已成为新世纪肿瘤学前沿的热点课题.业已明确,癌症的预测、预防、发病、证候演变、药物疗效和预后判断,都直接、间接与基因相关.基因诊断和基因治疗的飞速发展,对传统药物设计、研究、制药、临床应用提出了新的挑战.
-
RNA干扰及其技术的应用
RNA干扰(RNAi)是细胞内由双链RNA诱导降解与其配对的特定mRNA的过程.细胞内双链RNA在酶的作用下,形成20-25碱基大小的小干扰RNA(siRNAs),由siRNAs进一步掺入多组分核酸酶并使其激活,从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA,抑制该基因在细胞内的翻译表达.介绍了RNA干扰的分子机制、制备方法、以及RNA干扰技术在功能基因组学、微生物学、基因治疗和信号转导等研究领域里的应用.