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硬变肝组织VEGF的表达与原癌基因c-fos,c-myc 以及肝功能分级的相关性研究
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在肝硬化发生发展中的作用以及肝脏原癌基因(c-fos，c-myc)与肝功能Child分级的相关关系。方法通过对54例硬变肝组织中的VEGF、c-fos、c-myc蛋白的免疫组化检测，观察VEGF的蛋白水平表达与肝脏功能Child 分级的相关性，同时分析VEGF阳性病例组与阴性病例组c-fos、c-myc的不同表达，来了解二者的相互作用关系。结果 Child A级与Child B级VEGF的表达显著高于Child C级和对照组(P＜0.05)，而Child A级与Child B级之间差异无显著性意义(P＞0.05)。c-fos 及c-myc的表达在VEGF阳性组和阴性组差异无显著性意义(P＞0.05)。结论 VEGF的水平可以反映肝脏功能的代偿状态，可能在肝硬化的进程中起着保肝作用；原癌基因c-fos、c-myc与VEGF作用在不同环节。
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孕激素对成骨细胞增殖和分化的影响
目的观察孕酮和左炔诺孕酮对正常妇女成骨细胞和成骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响.方法采用四甲基偶氮唑蓝法,检测应用不同浓度孕酮及左炔诺孕酮刺激上述两种成骨细胞增殖的情况;并采用半定量RT-PCR及免疫组化法,测定c-fos、c-jun基因及其蛋白和骨钙素mRNA表达.结果以浓度为0 mol/L 的孕酮和左炔诺孕酮为对照,10-10、 10-8、10-6 mol/L孕酮分别增加人成骨细胞及MG-63细胞增殖达9.8%、23.0%、32.8%及7.8% 、15.6%、21.8%;10-10 、 10-8、10-6 mol/L 左炔诺孕酮分别增加人成骨细胞及MG-63细胞增殖达12.5%、21.9% 、32.8%及9.6%、14.4%、23.0%;孕酮及左炔诺孕酮促进两种成骨细胞c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达,表达呈剂量依赖性;10-10 、10-8、10-6 mol/L孕酮和左炔诺孕酮增加人成骨细胞骨钙素mRNA表达分别为12.2%、23.7% 、45.5%及18.6%、32.1%、60.3%;孕酮和左炔诺孕酮对MG-63细胞骨钙素mRNA的表达无影响.结论孕酮和左炔诺孕酮可刺激成骨细胞增殖,增加c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达,促进骨钙素mRNA的表达.
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缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡
目的 探讨围产期脑缺氧缺血后c-fos基因表达及与脑海马迟发性神经元死亡的相关性. 方法 采用原位末端标记、免疫组化、逆转录扩增法检测缺氧缺血后新生鼠脑海马细胞凋亡与c-fos基因转录、翻译情况. 结果 观察到脑海马CA1～4区凋亡标记信号.CA1区出现早、持续久[细胞凋亡数:CA1区:1 h:(14.6±2.3),24 h:(51±6),72 h:(17.4±0.3);CA4区:1 h:(1.3±1.6),24 h:(47±8),72 h:(21.6±0.6)个/mm2).与对照组比较CA1区P<0.01,CA1区、CA4区P<0.001.FOS表达为缺氧后即刻(0 h)脑海马组织中阳性率增高,1 h明显升高,2 h高峰持续于高水平至4 h(各时间段实验组与对照组比较P<0.05).脑海马内c-fos mRNA表达高峰时间较FOS表达约早1 h.其中高表达部位主要以实验组CA4区齿状回细胞为主,而细胞凋亡以CA1区锥体细胞较明显.正常对照组脑海马未检测到c-fos mRNA表达. 结论 围产期脑缺氧缺血后存在c-fos选择性表达和迟发性细胞凋亡现象.c-fos基因表达参与调节细胞凋亡的发生,其表达与迟发性细胞死亡之间可能存在复杂的相关性.
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胃管状腺癌组织中Fos和Jun蛋白表达及临床意义
目的:检测Fos和Jun在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌的发生、发展及生物学行为的关系.方法:应用免疫组织化学SABC法检测54例胃癌及癌旁组织中Fos和Jun基因蛋白的表达.数据采用SPSS统计软件包及χ2检验分析.结果:c-Fos和c-Jun在胃癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为68.5%、27.8%和63.0%、24.1%;c-Fos和c-Jun的表达在胃癌不同组织学分级间差异有统计学意义(χ2分别为8.101和6.742;P分别为0.018和0.032),在淋巴结转移和TNM分期间差异无统计学意义(χ2分别为1.534、1.342和0.055、0.499;P分别为0.219、0.266和0.832、0.492);胃癌及癌旁组织中c-Fos与c-Jun之间的表达呈正相关.结论:c-Fos和c-Jun基因蛋白表达变化发生在肿瘤细胞形态变化之前,可作为胃癌早期诊断的分子病理学指标.
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大鼠偏头痛模型中脑导水管周围灰质c-Fos表达及与5-羟色胺共存
目的研究中脑导水管周围灰质(PAG)在偏头痛中的作用.方法应用大鼠上矢状窦旁硬脑膜刺激模型,免疫组化染色及双标染色观察PAG内c-Fos表达及其与5-羟色胺(5-HT)的共存.结果 5-HT阳性细胞分布主要集中在PAG腹外侧和腹中间区.阳性细胞数头侧至尾侧逐渐增多.c-Fos阳性细胞在刺激组比非刺激组和对照组明显增多.双标染色显示5-HT和c-Fos阳性细胞均聚集在PAG腹外侧,双标细胞占5-HT细胞数的15.0%±2.8%,占c-Fos阳性细胞的24.0%±4.3%. 结论 PAG神经元在偏头痛模型中兴奋,PAG内5-HT阳性细胞部分兴奋,可能还存在其他类型神经元的兴奋.
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苯甲酸利扎曲普坦对皮质扩布性抑制及中脑导水管周围灰质c-Fos表达的影响
目的 观察苯甲酸利扎曲普坦对大鼠皮质扩布性抑制(cortical spreading depression,CSD)和CSD引起中脑导水管周围灰质(periaqueduetal grey,PAG)内c-Fos表达的影响.方法 实验选用的SD大鼠随机分为3组,A组:氯化钾刺激组;B组:氯化钾刺激+苯甲酸利扎曲普坦组;C组:氯化钠刺激组.对各组大鼠使用氯化钾(或氯化钠)刺激,以观察CSD出现的个数和波幅;第1次刺激2 h后使用免疫组织化学法检测各组PAG内不同层面c-Fos阳性神经元.结果 C组未记录到CSI).A组CSD个数(10.70±3.23)较B组(6.10±2.56)显著增多(t=-3.528,P<0.01);A组CSD波幅[17.33(95%CI 11.45～23.11)mV]较B组[11.82(95%CI 9.24～14.70)mV]显著增加(Z=-4.360,P<0.01).A组各层面c-Fos阳性细胞数较B、C组显著增多(P<0.05).结论 苯甲酸利扎曲普坦对CSD有抑制作用,可使CSD引起PAG内神经元兴奋作用减弱.
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c-fos及NR2A在耳鸣大鼠听皮层中的表达
目的通过检测神经元功能可塑性标记物快反应基因c-fos和N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)亚型NR2A在耳鸣大鼠听皮层中的表达探讨听皮层的可塑性变化及其在耳鸣产生中所起的作用.方法将30只白色Wistar大鼠随机分为3组,耳鸣模型组(12只)、生理盐水组(12只)和空白对照组(6只).注射水杨酸钠造模并用行为学方法证实动物感受到耳鸣后,利用免疫组化技术检测动物听皮层中c-fos和NR2A的表达,并用数字图像分析系统进行分析.结果12只注射水杨酸钠的耳鸣模型组大鼠全部造模成功.c-fos基因的表达产物FOS蛋白主要存在于皮层神经元的胞核,其阳性细胞的数量及所占面积的百分比在耳鸣组显著高于对照组(P值均＜0.01);NR2A受体主要表达在锥形细胞的胞膜上,其阳性细胞的数量、染色强度和面积百分比均显著强于对照组(P值均＜0.01).结论耳鸣大鼠听皮层中c-fos和NR2A的表达明显增多,一方面表明神经递质及受体可能参与了耳鸣的发生;另一方面提示耳鸣大鼠听皮层中发生了功能可塑性改变,这种改变可能在耳鸣的发生发展中起重要作用.
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转化生长因子β1和即刻早期基因及p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达
目的研究转化生长因子-β1( transforming growth factor-β1,TGF-β1)、即刻早期基因(c-fos)、周期素依赖性激酶抑制蛋白p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互之间的关系,探讨其表达对胆脂瘤侵袭能力的影响.方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶染色法检测TGF-β1、c-fos和p27在31例胆脂瘤上皮、11例胆脂瘤患者外耳道上皮和10例正常外耳道上皮中的表达,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析.结果 TGF-β1和c-fos在胆脂瘤上皮中表达阳性率分别为87.1%和83.9%,与胆脂瘤患者外耳道上皮和正常外耳道上皮相比表达差异有显著性.而p27在胆脂瘤上皮和外耳道上皮组上皮中均未见阳性表达.胆脂瘤上皮中c-fos 与TGF-β1表达无相关性(r=0.339,P=0.331); 胆脂瘤侵袭能力与c-fos表达有高度显著相关关系(r=-0.965,P<0.01),与TGF-β1表达也有高度相关关系(r=-0.406,P<0.01).结论即刻早期基因c-fos在胆脂瘤中表达显著增强,且与胆脂瘤的侵袭能力有高度显著相关性,提示高c-fos表达是胆脂瘤高增殖特征的因素之一.TGF-β1在胆脂瘤上皮中高表达亦表明其在胆脂瘤的高增殖能力方面起一定作用.
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8-氯腺苷抑制肿瘤坏死因子α诱导的视网膜细胞原癌基因表达的实验研究
目的探讨8-氯腺苷(8-CLA)抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的视网膜色素上皮 (RPE)细胞原癌基因的表达情况, 为寻找抑制细胞增殖的新药提供依据.方法取健康牛眼RPE细胞进行培养,采用Northern杂交法测定8-CLA对TNF-α诱导的RPE细胞c-fos及c-myc mRNA表达的影响.结果正常培养的RPE细胞有少量c-fos及c-myc mRNA表达;加入TNF-α实验组,RPE细胞中c-fos及c-myc mRNA表达量增加,分别为对照组的3.1和1.5倍;加入TNF-α和8-CLA实验组,经TNF-α刺激的RPE细胞中c-fos及c-myc mRNA表达量降低,分别较未用药组下降25.0%和29.0%.结论 8-CLA可抑制TNF-α诱导的RPE细胞c-fos及c-myc原癌基因的表达,此项研究结果将为临床探索有效抑制生长因子诱导的RPE细胞增殖的药物研究提供理论依据.
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即早基因c-fos在视神经损伤大鼠外侧膝状体中的表达
目的研究大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体神经元的早期损伤反应.方法用70g压力的显微无创血管钳夹持SD雄性大鼠右侧视神经30s,于损伤后2h、1d、3d、7d、14d,采用c-fos和calbindinD-28k抗体行免疫组化和荧光双标检测外侧膝状体中的c-fos定位,用Western印迹法检测外侧膝状体中的c-fos表达量.结果在损伤眼同侧的外侧膝状体腹侧核内侧核团和中间核可见c-fos阳性细胞,损伤后2h开始出现,1d时达到高峰,3d时稍有减少,7d时明显减少,14d仍有少量c-fos阳性细胞.外侧膝状体的背侧核及对照组未见c-fos阳性细胞.CalbindinD-28k阳性细胞主要出现在外侧膝状体的腹侧核内侧核团和中间核内.75%～83%的c-fos都出现在calbindinD-28k阳性细胞的胞核中.结论大鼠的视神经钳夹伤诱导了即早基因c-fos在同侧外侧膝状体腹侧核内侧核团和中间核calbindinD-28k阳性投射神经元中的表达,它们可能在视神经急性损伤的病理过程中起重要作用.(中华眼科杂志,2005,41:321-324)
关键词： 视神经损伤 膝状体 基因 fos 原癌基因蛋白质c-fos 大鼠 Sprague-Dawley -
细胞骨架完整性对流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响
目的 研究细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达中的作用,为进一步探索骨组织力传导机制提供依据.方法 原代培养BALB/c小鼠成骨细胞,将原代培养的成骨细胞分为对照组和细胞松弛素 D组,细胞松弛素D组使用细胞松弛素D破坏细胞骨架.每组一半细胞加载1.2 Pa的流体剪切力,另一半不加载.分别用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫荧光检测c-fos基因mRNA和蛋白、细胞骨架蛋白的表达水平,并对结果进行双因素方差分析和成组t检验.结果 无论是对照组还是细胞松弛素D组,流体剪切力加载均可使成骨细胞c-fos基因mRNA相对水平(分别为0.1637±0.0303和0.0104±0.0070)和蛋白荧光强度(分别为177.14±9.37和150.95 ±6.17)升高,与未加载流体剪切力的对照组和细胞松弛素D组细胞(mRNA相对水平分别为0.0057±0.0021和0.0032±0.0014,蛋白荧光强度分别为117.96±4.11和119.77±5.19)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).流体剪切力加载下,细胞松弛素D组细胞c-fos基因mRNA和蛋白的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 细胞松弛素D对流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白的表达起拮抗作用.保持细胞骨架的完整性是流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因表达过程中的重要条件.
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原癌基因fos在汉坦病毒感染神经元内的表达
培养1周的胚胎小鼠脑皮质神经元，以汉坦病毒（HTNV，A9株）上清液感染4h，阴性对照组用灭活的HTNV上清液作用于神经元，两组随机将标本按不同时间段各分为9组，与正常神经元组同时免疫组化fos染色。结果显示，神经元培养1周以HTNV感染后，ABC免疫组化fos抗血清染色阳性细胞内核呈紫蓝色，fos在各实验组的表达为：感染后0、1、2、3和4h细胞染色阳性率分别为50.0%、51.6%、78.3%、60.9%、48.4%与对照组相比，差异有显著性意义（P<0.01）；以后各时间段与对照组相比差异无显著性意义（P>0.05）。提示HTNV作为生物病理性刺激因素可以激活体外培养的神经元，使其产生fos的快速一过性表达，在探讨HFRS神经元损伤机制中具有一定的意义。
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预处理对缺血再灌注心肌细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达的调控
为探讨即刻早期基因在预处理中的作用机制,将培养心肌细胞分别经短暂缺血及佛波酯、去甲肾上腺素、腺苷预处理,行模拟缺血再灌注,采用Northern杂交技术对心肌细胞c-fos、c-jun mRNA含量进行检测.结果发现,缺血预处理组c-fos、c-jun mRNA明显上升,其他药物预处理组c-fos、c-jun基因均有不同程度的表达增强,H7能明显抑制预处理对c-fos、c-jun mRNA的诱导.表明预处理可能通过激活PKC,进而诱导c-fos、c-jun基因的转录表达增强,PKC可能在缺血预处理中起着关键的作用.
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异丙酚对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时心肌c-fos基因表达的影响
目的观察异丙酚对离体大鼠全心缺血再灌注损伤心肌c-fos基因表达的影响,探讨其对缺血再灌注损伤心肌保护作用机制.方法 Wistar大鼠36只,随机分为对照组和异丙酚组,每组又分为缺血前、缺血30min和复灌30min 3个亚组.通过离体心肌灌注模型,采用免疫组化及RT-PCR观察心肌c-fos蛋白及c-fos mRNA表达水平的变化.结果与缺血前相比,缺血30min及再灌注30min亚组的c-fos蛋白的光密度值及c-fos mRNA表达水平均增加(P＜0.01);与对照组相比,异丙酚各亚组的c-fos蛋白光密度值及c-fos mRNA表达水平均降低(P＜0.01).结论 c-fos基因参与了心肌缺血再灌注损伤的基因调节.异丙酚可减轻心肌c-fos基因的表达,并可避免或减轻心肌缺血再灌注损伤.
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电针刺大鼠足三里穴对应激大鼠延髓内脏带内Fos和GFAP表达的影响
目的探讨延髓内脏带(MVZ)中即刻早期基因Fos和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)在针刺足三里穴保护应激大鼠胃黏膜中的表达及其意义.方法雄性SD大鼠24只,随机分为空白对照组、应激组、电针组,每组8只.利用免疫组织化学方法,观察Fos和GFAP在中枢延髓内脏带内孤束核(NTS)、迷走神经背运动核(DMV)中的表达并计算各组的溃疡指数(UI).结果 Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞表达主要位于延髓内脏带内NTS、DMV中.应激组与空白对照组比较, UI明显上升(P<0.01),Fos和GFAP在中枢延髓内脏带内大量表达.电针组与应激组比较,Fos和GFAP在中枢延髓内脏带内的表达下调,UI下降(P<0.01).结论电针刺足三里穴对应激大鼠胃黏膜损伤具有保护作用,其机制可能与其调节延髓内脏带内免疫阳性神经元和星形胶质细胞的功能活动有关.
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电针足三里穴对LPS刺激后大鼠胃排空功能和延髓迷走孤束复合体内的神经元Fos表达的影响
目的观察电针足三里穴干预后腹腔注射细菌内毒素 (LPS) 大鼠的胃排空功能和延髓迷走孤束复合体内神经元Fos的表达变化及其意义.方法雄性SD大鼠40只,随机分为空白对照组、LPS组、LPS后电针足三里穴组和LPS后电针非经非穴组,每组10只.采用免疫组织化学方法,观察并计数大鼠延髓迷走孤束复合体内神经元Fos的表达并计算各组动物的胃排空率.结果腹腔注射细菌内毒素 (LPS) 2.5h后大鼠的胃排空率明显降低至20.7%±4.5%,迷走孤束复合体内Fos阳性神经元数目明显增加至83.2±6.6;LPS后电针足三里穴组大鼠的胃排空率明显升高至44.1%±6.2%,迷走孤束复合体内Fos阳性神经元数目明显减少至37.9±3.8,与LPS组比较有显著性差异 (P＜0.01);LPS后电针非经非穴组的胃排空率和迷走孤束复合体内Fos阳性神经元数目与LPS组无明显差异.结论腹腔注射LPS对大鼠胃排空功能有明显的抑制作用;电针足三里穴对LPS大鼠的胃排空功能具有良性的调节作用,此作用与其保护性调节延髓迷走孤束复合体内的神经元功能状态有关.
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细胞周期素E和c-fos在幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠胃癌前病变中的表达
探讨细胞周期素E(cyclin E)和原癌基因c-fos与幽门螺杆菌(Hp)长期感染蒙古沙土鼠致胃癌前病变发生的关系.采用半定量反转录聚合酶链反应(QRT-PCR)及免疫组织化学技术检测Hp长期感染蒙古沙土鼠致胃癌前病变模型的胃窦粘膜中cyclin E和c-fos的表达,并结合组织标本的病理学特点进行分析.Hp感染蒙古沙土鼠25周时cyclin E mRNA水平的表达是正常对照的2.2倍,45周时是3.1倍(P＜0.01);25周时c-fos mRNA水平的表达是正常对照的2.5倍,45周时是2.1倍(P＜0.01).免疫组织化学显示cyclin E及c-fos在Hp感染蒙古沙土鼠45周的表达显著高于正常对照组(P＜0.01).结果表明在Hp长期感染蒙古沙土鼠致胃癌发生的早期有cyclin E和c-fos的过度表达.
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毫米波急性辐照对大鼠脊髓P物质和c-fos表达的影响
目的 检测毫米波急性辐照后SD大鼠脊髓P物质(SP)和c-fos表达的变化,探索毫米波痛觉效应的机制.方法 采用毫米波(35GHz,40W/cm2)一次性辐照SD大鼠局部皮肤0s(对照组)、30s、1min、3min,采用Real-time RT-PCR和Western blotting检测辐照后0min、5min、10min、1h、3h大鼠对应节段脊髓SP、c-fos mRNA、c-fos蛋白的表达水平.结果 毫米波辐照30s后各时间点辐照部位相应节段脊髓SP和c-os mRNA表达与对照组比较无明显差异.毫米波辐照1min后第10min辐照部位相应节段脊髓SP和c-fos mRNA表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01),此后下降至对照组水平.毫米波辐照3min后第5min、10min和1h辐照部位相应节段脊髓SP和c-fos mRNA表达显著上调(P＜0.01,P＜0.05),于3h时间点下降至对照组水平.毫米波辐照30s及1min后各时间点辐照部位相应节段脊髓c-fos蛋白表达与对照组比较无明显差异.毫米波辐照3min后第5min和10min辐照部位相应节段脊髓c-fos蛋白表达水平显著上调(p＜0.01),此后下降至对照组水平.结论 毫米波急性辐照后皮肤SP含量增加可能与毫米波辐照导致的热疼痛刺激诱导对应节段脊髓SP和c-fos的表达增加有关.
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重型颅脑损伤后神经元细胞c-fos基因表达的双峰特征及机制研究
为探讨颅脑损伤时皮层神经元c-fos基因表达的时相特征及机制,以小鼠重型颅脑损伤模型为对象,采用分子杂交和免疫组化等方法,对脑损伤后不同时间皮层神经元中c-fos基因的表达状况进行检测.结果发现,颅脑损伤后皮层神经元中c-fos基因表达的第一高峰在伤后1h,伤后24h出现另一个表达高峰,c-fos阳性表达神经元主要位于致伤侧大脑皮层Ⅱ～Ⅳ层.提示颅脑损伤诱发的大脑皮层神经元c-fos基因表达具有双峰的时相特征,其表达可能是由Leao播散性抑制引起,并与细胞内外信号转导与细胞凋亡有关.
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吗啡依赖大鼠长期戒断后的觅药行为与伏膈核Fos表达
目的:研究吗啡依赖大鼠长期停药后的觅药行为和伏膈核各亚区(外壳区、核心区)的Fos白表达.方法:大鼠皮下注射吗啡使其成瘾,停药2月后进行条件性位置偏爱试验,并检测伏膈核核心区和外壳区的Fos蛋白表达.结果:吗啡预处理组大鼠的位置偏爱效应明显强于盐水预处理组,在伏膈核核心区的Fos蛋白表达显著高于对照组.结论:位置偏爱行为与吗啡相关环境刺激引起伏膈核核心区的激活有关,预先慢性吗啡处理大鼠在吗啡诱导下对药物相关环境的偏爱强于预先盐水处理大鼠.
