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8-氯腺苷增强肿瘤细胞对TRAIL杀伤作用敏感性的研究
目的研究8-氯腺苷(8-Cl-Ado)增强肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TARIL)杀伤作用的敏感性及其分子机制.方法以重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)和(或) 8-Cl-Ado处理乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402,以MTT比色法测定细胞存活率,分析药物处理对细胞凋亡的影响;构建NF-κB DNA结合序列虫荧光素酶报告质粒,并转染适当的细胞株,测定NF-κB的转录活性;以不同胱天蛋白酶的抑制剂预处理所试细胞株,再加入rsTRAIL处理,测定胱天蛋白酶抑制剂对细胞凋亡的影响.结果 8-Cl-Ado显著增强了乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402对rsTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性;8-Cl-Ado与rsTRAIL联合可使肝癌细胞株BEL-7402内NF-κB活性下降,从而促进细胞凋亡,而在乳腺癌细胞株MCF-7中未观察到相同的现象;胱天蛋白酶家族抑制剂对BEL-7402细胞的凋亡无影响,但可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,但胱天蛋白酶-3、-9和-8 的特异性抑制剂对MCF-7细胞株的生长均无影响.结论 8-Cl-Ado可显著增强乳腺癌和肝癌细胞对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性,在此两种细胞中,8-Cl-Ado与rsTRAIL联合作用可分别激活胱天蛋白酶依赖的和非依赖的细胞凋亡信号途径.
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抗代谢药物8-氯腺苷抑制兔实验性视网膜新生血管的研究
目的 探讨抗代谢药物8-氯腺苷(8-Cl-A)眼局部应用对兔实验性视网膜新生血管的抑制作用.设计实验研究.研究对象纯种青紫兰家兔40只.方法 采用视网膜静脉直接光凝法建立兔视网膜静脉阻塞(RVO)模型.分别设立对照组及8-Cl-A给药组,每组各20只(20眼).于造模后次日治疗组每日球后注射8-C1-A 9mg(计10日),对照组注射等体积生理盐水,采用荧光素眼底血管造影观察注射后2周内2组兔视网膜新生血管的发生率,并进行统计学分析.主要指标视网膜新生血管发生率及程度.结果 RVO对照组20眼中,17眼发生视网膜新生血管;8-Cl-A治疗组20眼中3眼发生光凝点远端的视网膜新生血管(P=0.000),且发生的程度及范围小于对照组,同时未见视网膜静脉侧支循环的建立.结论 8-Cl-A可有效抑制兔实验性视网膜新生血管的发生.在视网膜血管增生性病变治疗中可能具有潜在的临床应用价值.(眼科,2007,16:264-266)
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8-氯腺苷抑制肿瘤坏死因子α诱导的视网膜细胞原癌基因表达的实验研究
目的探讨8-氯腺苷(8-CLA)抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的视网膜色素上皮 (RPE)细胞原癌基因的表达情况, 为寻找抑制细胞增殖的新药提供依据.方法取健康牛眼RPE细胞进行培养,采用Northern杂交法测定8-CLA对TNF-α诱导的RPE细胞c-fos及c-myc mRNA表达的影响.结果正常培养的RPE细胞有少量c-fos及c-myc mRNA表达;加入TNF-α实验组,RPE细胞中c-fos及c-myc mRNA表达量增加,分别为对照组的3.1和1.5倍;加入TNF-α和8-CLA实验组,经TNF-α刺激的RPE细胞中c-fos及c-myc mRNA表达量降低,分别较未用药组下降25.0%和29.0%.结论 8-CLA可抑制TNF-α诱导的RPE细胞c-fos及c-myc原癌基因的表达,此项研究结果将为临床探索有效抑制生长因子诱导的RPE细胞增殖的药物研究提供理论依据.
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腺苷的结构改造与细胞毒活性研究
目的: 为寻找新型抗肿瘤化合物和探讨糖环羟基对8-Cl-腺苷的抗肿瘤活性的影响,合成了腺苷的维甲类似物和8-Cl-腺苷衍生物.方法: 对腺苷的8位和8-Cl-腺苷的糖环羟基进行了结构改造,以酰胺键和酯键在腺苷的8位连接了具共轭基团的肉桂酰基和苯甲酰基,得到腺苷的维甲类似物;对8-Cl-腺苷的5′-羟基进行了甲磺酰化,硝基化以及氯代反应,得到了它的衍生物.结果: 合成了(6～12),(16),(18～20)等11个新化合物.结论: 这些新化合物以HL-60,BIU,KB细胞株的细胞毒为指标进行生物活性筛选,结果表明,8-位取代基和5′-羟基是影响腺苷类化合物细胞毒活性的重要药效基团.
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8-氯腺苷长循环脂质体的制备及其在大鼠体内的药代动力学
8-氯腺苷(8-chloro-adenosine,8-Cl-A)为北京大学医学部天然药物与仿生药物国家重点实验室研制的新型抗肿瘤化合物,经动物药效学研究证实对白血病以及肝癌、胃癌、乳腺癌等多种实体瘤有显著的抑制作用.毒理学研究表明,该化合物的毒性远低于目前仍用于临床的某些化疗药物,因而认为其具有开发价值[1-3].
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8-氯腺苷抑制人胃癌细胞增殖相关信号蛋白的作用
目的探讨8-氯腺苷是否会影响肿瘤细胞的表皮生长因子受体(EGFR)及其相关信号蛋白的表达.方法人胃癌BGC-823细胞与不同浓度8-氯腺苷共孵育.SRB染色法观察细胞增殖;Western蛋白印迹法观察细胞增殖相关信号蛋白的表达.结果8-氯腺苷1.0, 2.5,5.0,7.5和10 μmol*L-1作用24 h,浓度依赖性抑制BGC-823细胞增殖,抑制率分别为19.7%,31.8%, 40.1%, 49.8%和56.7%.7.5 μmol*L-18-氯腺苷作用BGC-823细胞24, 48和72 h,抑制率分别为49.8%, 49.1%和45.6%.Western蛋白印迹结果表明,8-氯腺苷2.5～7.5 μmol*L-1作用24 h,BGC-823细胞EGFR蛋白表达减少;Raf-1蛋白表达变化不显著;p-MEK和p-ERK磷酸化蛋白表达增加.结论8-氯腺苷可抑制BGC-823细胞增殖;改变EGFR-Raf/MEK/ERK等一系列信号蛋白的表达可能是其抑制细胞增殖的重要途径之一.
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新抗肿瘤化合物8-氯腺苷代谢物在大鼠体内的药代动力学研究
目的:全面了解一次静注8-氯腺苷后其代谢产物在大鼠体内药代动力学的规律及特点,为临床实验提供理论依据.方法:给大鼠单次静注4种剂量8-氯腺苷后,应用HPLC方法测定在体液和组织中8-氯腺苷代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤的含量.结果:8-氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤.代谢产物之一8-氯嘌呤半衰期(t1/2)有随用药剂量的增加而延长的趋势,为10.15～32.84 min.药时曲线下面积(area under the curve,AUC)在8-氯腺苷剂量增加至150 mg.kg-1时不成比例地增高,呈非线性动力学消除的特点.另一代谢产物8-氯肌苷的t1/2约为100min,在剂量增加至100 mg.kg-1时,其AUC不成比例地增加,呈非线性动力学消除的特点.除脂肪、脑、睾丸组织外,8-氯肌苷和8-氯嘌呤在体内分布广泛,其中肝、肾等代谢和排泄器官的含量较高.药物主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄,排泄量占总给药量的39.81%.结论:静注8-氯腺苷后8-氯嘌呤在大鼠血中迅速生成,消除也比较迅速,8-氯肌苷在大鼠血中出现较晚,消除也比较缓慢,两种代谢物在用药剂量25～100 mg.kg-1范围内呈线性动力学消除,当剂量增加至100～150mg.kg-1有非线性动力学消除的趋势.两代谢物广泛分布于各组织,但不易进入脂溶性组织和透过血脑屏障.肾为其主要排泄器官,主要以代谢物8-氯肌苷的形式排出体外.
关键词： 抗肿瘤药/药代动力学 8-氯腺苷 8-氯肌苷 8-氯嘌呤 -
水溶性药物8-氯腺苷多囊脂质体的制备
8-氯腺苷(8-chloyo-adenosine,CA)是我国自行开发的抗肿瘤一类新药,现正进行二期临床试验.大鼠静脉注射CA,剂量为25 mg·kg-1时,第一相生物半衰期为0.83 min,较短的生物半衰期使该药在临床应用中存在问题.制备长循环缓释脂质体在理论上可克服CA不利的体内药代动力学过程.但是水溶性药物脂质体包封率不能提高一直是困扰国内外科研工作者的大问题.本实验以CA为模型药物制备多囊脂质体,实验结果显示可显著提高水溶性药物的包封率.以该方法制备多囊脂质体国内尚未见相关报道.
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8-氯-腺苷抗肿瘤作用机制
cAMP对多种细胞的增殖和分化有重要的影响.长期以来人们寻找对癌细胞增殖和分化有作用的cAMP类似物.现有大量研究表明8-Cl-cAMP及其代谢产物8-氯腺苷(8-Cl-Ado)对肿瘤细胞有抑制作用[1～3],但它的抑癌作用机制尚不清楚.细胞周期的运行受诸如细胞周期蛋白、生长因子、癌基因蛋白等因子的调控.如一些癌基因蛋白(如P16、P21、P53等)的缺失或突变就会引起细胞的癌变.
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8-氯腺苷对抑制人晶状体上皮细胞增生的体外研究
目的探讨8-氯腺苷(8-chloroadenonosine)是否对体外培养的晶状体上皮细胞增生有抑制作用.方法取第2、3代传代培养的晶状体上皮细胞做药物抑制试验.加入不同浓度的8-氯腺苷(2,4,8,16μmol/L)作用24、48、72和96小时后,用MTT比色测定法和流氏细胞仪检测法确定药物对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用.结果 8-氯腺苷在4～16μmol/L的浓度下能抑制晶状体上皮细胞的增生.并且其抑制程度呈时间、剂量依赖性.结论该结果可为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据.
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8-氯腺苷对HL-60细胞中蛋白酶体活性的抑制作用
背景与目的:蛋白酶体是真核细胞中具有多相催化活性的蛋白酶复合体,国外报道,蛋白酶体可作为新靶点来筛选抗肿瘤药物.8-氯腺苷(8-chloroadenosine,8-CA)由本室合成,研究已证实8-CA对肉瘤细胞株S180、肝癌细胞株H22及人胃癌异种移植瘤生长有抑制作用.但8-CA抑制肿瘤生长与蛋白酶体的关系还不清楚.本研究拟探讨8-CA对人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60中20S蛋白酶体的三种酶活性(包括糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性)的影响.方法:不同浓度的8-CA作用于HL-60细胞24、48、72 h后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性,并采用免疫沉淀法测定纯化蛋白酶体的糜蛋白酶样活性,酶活性均以特异底物被蛋白酶体水解后产生的荧光吸光度表示.结果:0.1 μmol/L 8-CA作用于HL-60细胞48 h,对总蛋白提取液中20S 蛋白酶体的三种酶活性均有显著抑制作用,并且随着8-CA 浓度的增加,其抑制作用逐渐增强.5μmol/L 8-CA作用48 h,对糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性抑制率分别为44.96%、54.52%和48.36%;作用72 h,对三种酶活性的抑制率分别为67.53%、70.48%和64.08%.1μmol/L和5μmol/L 8-CA作用48 h,对HL,-60中蛋白酶体的糜蛋白酶样活性抑制率分别为68.14%和92.75%,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.01).结论:8-CA对HL-60细胞中20S蛋白酶体的酶活性具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性.
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8-氯腺苷通过磷酸化修饰提高转录因子CREB的活性
背景与目的:8-氯腺苷是国内新近研发的抗肿瘤药物,其分子作用机制尚未完全阐明.本实验研究该药对 HL- 60细胞转录因子 cAMP应答元件结合蛋白 (cAMP- response- element- binding protein, CREB)活性的影响及其相关机制.方法:应用 MTT法检测 8-氯腺苷对人早幼粒细胞白血病细胞株 HL- 60的半数抑制浓度( IC50),用蛋白印迹实验( Western blot analysis)检测药物作用不同时间 CREB蛋白水平和 CREB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验( Gel shift assay)检测药物作用不同时间 CREB与 DNA的结合水平.结果: (1)8-氯腺苷对 HL- 60细胞的 IC50约为 0.42 μ mol/L. (2)8-氯腺苷快速诱导 CREB磷酸化, 30 min达到高水平, 6 h恢复至基础水平, CREB蛋白水平在药物作用期间保持恒定. (3)8-氯腺苷不改变 CREB与 DNA结合能力.结论: 8-氯腺苷诱导 CREB转录因子活性的提高依赖于 CREB磷酸化水平的提高,而与 CREB蛋白水平及 CREB与 DNA的结合水平无关.
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8-氯腺苷对多药耐药型人癌细胞株KBv200mdr-1基因表达的下调
多药耐药(multid rugresistance,MDR)是导致恶性肿瘤化疗失败的主要原因,因此寻找抗多药耐药的敏感化疗药,对提高肿瘤化疗疗效具有重要意义.本文观察了新抗癌化合物8-氯腺苷(8-chloroadenosine,8-Cl-Ado)对多药耐药人癌细胞株KBv200的生长抑制作用,及对该细胞mdr-1多药耐药基因表达的影响.
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8-氯腺苷调节RNA编辑酶ADAR1对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移的影响
目的:研究8-氯腺苷(8-chloro-adenosine,8-Cl-Ado)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移的影响,以及与RNA编辑酶1 (adenosine deaminases acting on RNA 1,ADAR1)表达的相关性.方法:蛋白印迹实验检测乳腺癌组织中ADAR1的蛋白表达量以及8-Cl-Ado(10 μmol/L)处理乳腺癌SK-BR-3细胞不同时间ADAR1蛋白表达量的变化;MTT法和形态学观察检测不加药组和8-Cl-Ado(10 μmol/L)加药组对SK-BR-3细胞增殖的影响;MTT法和伤口愈合实验检测SK-BR-3细胞过表达ADAR1质粒(空白对照组、空载组、ADAR1-P110组、ADAR1-P150组)对8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞增殖及迁移的影响.结果:乳腺癌癌组织中ADAR1-P110和ADAR1-P150蛋白表达量均明显高于癌旁组织(t=9.871,P=0.000;t=7.169,P=0.000);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞48 h后ADAR1-P110和ADAR1-P150蛋白表达量均明显降低(t=-8.838,P=0.013;t=-19.866,P=0.003);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞ADAR1-P110组和ADAR1-P150组48 h后增殖抑制率均明显低于空白组(P均为0.000);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞ADAR1-P110组和ADAR1-P150组48 h后的迁移率均明显高于空白组(P均为0.000).结论:8-Cl-Ado能明显抑制SK-BR-3细胞增殖和迁移,其作用机制可能与ADAR1的表达下调有关.
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HPLC法测定大鼠体内8-氯腺苷及其代谢物的浓度
采用高效液相色谱法测定大鼠体内8-氯腺苷及其代谢物8-氯肌苷和8-氯腺嘌呤的浓度.试样用乙腈沉淀蛋白后,水层进样,采用YWG-C18.柱,以甲醇-1%醋酸(含0.1%四丁基溴化铵)为流动相,检测波长263nm.8-氯腺苷及其代谢物分离良好,低检测浓度8-氯腺苷、8-氯肌苷和8-氯腺嘌呤分别为0.10μg/ml,0.50μg/ml,0.25μg/ml,日内精密度和日间精密度均在2.3%～16.0%,三种化合物回收率为70%～99%.
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低剂量8-氯腺苷联合TRAIL对前列腺癌细胞杀伤力的研究
目的:观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法:人前列腺癌细胞株PC-3M经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量8-氯腺苷(0-200μmol/L)以及联合用药处理96h,用流式细胞分析仪和蛋白质免疫印迹分析测定细胞生存率、细胞周期以及相关细胞凋亡蛋白的动态变化.结果:人前列腺癌细胞株PC-3M单独经过TRAIL或低剂量8-氯腺苷处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.结论:低剂量8-氯腺苷可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用.8-氯腺苷主要是诱导人前列腺癌细胞株PC-3M发生G2/M期阻滞和细胞凋亡,P53和P21蛋白参与了这一分子生物学事件.
关键词： 8-氯腺苷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 前列腺癌
