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酶联免疫吸附试验和微粒子酶免疫分析法检测血清甲型肝炎总抗体的比较研究
目的 评估酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清甲型肝炎(甲肝)总抗体的检测性能,从而说明两种方法在各自实际应用中的区别.方法 用ELISA和.MEIA法检测血清甲肝总抗体,再进行两种方法的互相比较.结果 检测同一批血清甲肝总抗体样品,定量检测时ELISA法试剂盒敏感度为57.57毫国际单位/毫升(mIU/ml),变异系数(CV)为10.65%,其结果比MEIA法高;两种方法抗体几何平均浓度(GMC)分别为125.8mIU/ml、58.8mIU/ml;定性检测时,41例标本中ELISA法检测39例阳性,MEIA法40例阳性,两法的符合率为97.56%(40/41).结论 定量检测时,MEIA法比ELISA法更精确;定性检测时,ELISA法试剂盒能客观反映疫苗的免疫原性和保护效果,与MEIA法结合能大大提高敏感性.
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胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较
目的 对胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)做比较,了解胶体金试纸法的灵敏度和特异度.方法 采用两种方法检测0～65岁人群血清标本3 578份.结果 胶体金试纸法检测出HBsAg阳性标本189份,阳性率5.28%;ELISA法检测出阳性标本200份,阳性率5.59%;两种方法阳性检出率差异无显著统计学意义.胶体金试纸法与ELISA法检测标本符合率为97.74%.胶体金试纸法的灵敏度为77.00%,特异度为98.96%.结论 胶体金试纸法操作简便、快速,检测的特异度较好,但其灵敏度有待提高.
关键词： 胶体金试纸法 酶联免疫吸附试验 乙型肝炎病毒表面抗原 -
酶联免疫吸附试验和血球凝集抑制试验检测健康人群麻疹抗体比较
为了解上海市健康人群麻疹抗体状况，在上海市黄浦区和金山区对505名健康人采血，用血球疑集抑制（HI）试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）平行检测。结果HI试验的阳性率为99.01％，几何平均滴度（GMT）为1∶26.00；ELISA试验则为93.66％和1∶1 303.46。HI抗体滴度高者ELISA－IgG抗体滴度也高，两种方法的相关系数（r）为0.58（P＜0.0005）。但HI试验检测阴性5份，ELISA试验检测阴性32份，两种方法的阳性符合率为94.4％。两种方法的特点是：HI试验检测的是麻疹血凝素抗体，包括IgM和IgG抗体；ELISA试验检测的是麻疹病毒全抗体，包括血凝素、血溶素的IgG和核蛋白等。分析了ELISA试验检测≥7岁5个年龄组抗体阳性率低于HI试验的影响因素，以及金山区各年龄组麻疹抗体高的原因。
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麻疹病毒血凝素基因原核表达与抗原性鉴定
目的 利用大肠杆菌表达系统表达麻疹病毒血凝素(Hemagglutinin,H)基因,并将表达产物应用于麻疹病毒抗体的检测.方法 从麻疹病毒株MVi/Zhejiang.CHN/7.05/4中提取核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增H基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+);用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组质粒在大肠杆菌BL21(DB3)中进行表达;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白印迹法(Western Blotting)分析重组蛋白表达情况和抗原性:通过Ni-NTA亲和层析获得的高纯度目的 蛋白用于酶联免疫吸附试验.结果 RT-PCR获得的H基因外段约长1700bp,经测序确证无突变.转化的大肠杆菌表达产物在SDS-PAGE中出现与目的 蛋白分子量相一致的条带,且重组蛋白主要以包涵体形式存在;蛋白印迹(Western Blot)显示,表达产物具有良好的抗原性.结论 构建麻疹病毒H基因的原核表达体系,纯化的重组蛋白可用作麻疹病毒检测的抗原.
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酶联免疫吸附试验筛查疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的效果评价
目的评价和分析酶联免疫吸附试验(ELISA)在脊髓灰质炎(脊灰)病毒型内鉴别(Intratypic differentiation,ITD)中的应用,及其在疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived polioviruses,VDPVs)筛查中的敏感性和重要性.方法使用ELISA型内鉴定方法对2004年所有省级疾病预防控制中心脊灰实验室送检的单型脊灰病毒进行型内鉴定,然后对结果为非疫苗类似株(Non Sabin-like,NSL)或者双反应毒株(Double reactive virus,DRV)进行VP1区基因序列测定和分析.结果2004年606株单型脊灰病毒中,有576株被鉴定为疫苗类似株(Sabin-like,SL),11株为NSL,全部是Ⅰ型;17株为DRV,2株为无反应株(Non-reactive virus,NRV).通过对ELISA结果为NSL、DRV或NRV的毒株进行全VP1区核苷酸序列测定和分析,检测出9株Ⅰ型VDPVs和1株Ⅱ型VDPV.结论ELISA进行型内鉴定的优势在于它敏感的筛选指标是VP1区核苷酸变异率为1%,即它可以有效地区分脊灰疫苗病毒相关株和其它毒株,包括VDPV(核苷酸变异率≥1%,但＜15%)和脊灰野病毒(核苷酸变异率≥15%),因此对VDPV的筛查具有较强的优势.
关键词： 酶联免疫吸附试验 疫苗衍生脊髓灰质炎病毒 型内鉴别 序列分析 -
两种酶联免疫吸附试验方法检测人血清抗严重急性呼吸道综合征冠状病毒IgG抗体
目的为观测不同人群,尤其是≤14岁正常儿童血清中抗严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome, SARS)冠状病毒IgG抗体的存在状况和分布特征,印证分析不同酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的可靠性和一致程度,评估特异性IgG抗体检测在诊断SARS中的实用价值.方法分别用以全病毒裂解液或纯化N蛋白为抗原的ELISA方法,检测70例SARS患者、55名3～6月龄正常婴儿、297名≤14岁正常儿童、156名≥15岁正常人的血清特异性抗体.以敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、准确度评价其诊断价值,以Kappa值和卡方值评价检测结果的一致性及差异.结果全病毒裂解液试剂检测SARS患者、3～6月龄正常婴儿、≤14岁正常儿童、≥15岁正常人血清,抗体阳性率分别为75.71%、36.36%、23.91%、1.92%.≤14岁正常儿童按＜1、1、2、3、4、5～9、10～14岁组划分,抗体阳性率依次为51.16%、41.86%、30.95%、18.60%、16.67%、2.38%、4.76%,随年龄增长阳性率呈下降趋势.以纯化N蛋白为抗原的试剂检测上述血清,除SARS患者抗体阳性率为80.00%外,正常人群血清抗体全部阴性.两种方法检测≥15岁人群(含正常人群和SARS患者)血清,检测结果高度一致,Kappa值为0.881,差异无显著的统计学意义(χ2＝0.10,P＞0.05);检测≤14岁儿童血清,差异有非常显著的统计学意义(χ2＝89.0,P＜0.005).两种方法用于诊断SARS的敏感度、特异度、PPV、NPV、准确度分别为75.71%、81.50%、36.05%、96.06%、80.80%和80.00%、100.0%、100.0%、97.32%、97.58%.除敏感度、NPV外,特异度、PPV、准确度差异均有非常显著的统计学意义.结论以全病毒裂解液为抗原的ELISA方法,可用于诊断病程＞10d的成年SARS,而以纯化N蛋白为抗原的ELISA方法特异、准确,有助于诊断不同年龄,尤其是难鉴别的儿童SARS.该方法广泛用于核实临床诊断和血清流行病学调查,有重要参考价值.
关键词： 酶联免疫吸附试验 严重急性呼吸道综合征 冠状病毒 IgG抗体 -
麻疹血凝抑制试验和酶联免疫吸附试验的应用比较
为了比较用于检测麻疹抗体的血凝抑制(HI)试验和酶联免疫吸附试验(ELISA),1998年河北省采用这两种方法平行检测了麻疹疫苗(MV)强化免疫前后1～24岁人群的血清1317份.结果显示:MV强化免疫前HI抗体和ELISA IgG抗体阳性率分别为99.78%和95.22%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶36.15和1∶812.15;强化免疫后,HI抗体和ELISA IgG抗体阳性率分别为100.00%和99.88%,抗体GMT分别为1∶91.65和1∶2 158.17,强化免疫前后分别比较,差别均有非常显著的统计学意义.两种方法阳性符合率为98.33%,ELISA IgG抗体的GMT比HI抗体的GMT高23.55倍,两种方法具有较密切的相关关系,相关系数r＝0.73,95%可信区间为(0.70,0.75);所建回归方程为:Log＝-0.321006+0.670756LogX0.两种方法平行检测58份强化免疫前后双份血清抗体≥4倍增长情况,符合率为82.76%.结果表明,两种检测方法用于麻疹抗体检测相关性较好,符合率较高.
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广西壮族自治区2013年健康人群白喉抗体水平调查
目的 了解广西2013年健康人群白喉抗体水平及其变化趋势,为预防控制白喉策略提供参考.方法 在广西5个县采集0～60岁健康人群血清标本,利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测白喉抗体.结果 2013年共采集健康人群血清标本3 191份,白喉抗体阳性率81.13％,中位数抗体浓度(Median Antibody Concentration,MAC)为0.046IU/ml.5个县白喉抗体阳性率在69.97％～ 90.47％之间(χ2=104.99,P＜0.001),MAC在0.029IU/ml～0.068 IU/ml之间(H=112.90,P＜0.001).各年龄组白喉抗体阳性率在75.34％(11～20岁组)～86.76％(51 ～60岁组)之间(χ2=57.01,P＜0.001),MAC在0.032IU/ml(0 ～ 10岁组)～0.1111U/ml(31～40岁组)之间(H=144.78,P＜0.001).男、女性白喉抗体阳性率分别为82.00％和80.51％(χ2=1.13,P=0.287),MAC分别为0.051IU/ml和0.0421U/ml(U=1 155 974.50,P=0.001).结论 白喉抗体血清学调查结果可反映当地儿童免疫规划工作情况,预测广西近几年不会发生白喉流行,需对白喉抗体水平较低的地区和年龄组进行强化免疫以进一步巩固白喉免疫屏障;同时应严格按照含白喉类毒素疫苗接种程序对适龄儿童进行全程接种,防止出现某些剂次疫苗漏种的现象.
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麻疹中和试验对酶联免疫吸附试验的质量控制探讨
目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹IgG抗体的质量控制方法 .方法 2003年对3个年龄组的294份ELISA法检测麻疹IgG抗体后的血清,用中和试验加以证实.结果 两种方法 相关,但差异较大,相关系数0.423～0.684,阳性符合率64.76%～98.24%.结论 排除两种试验方法 本身敏感性的差异,麻疹ELISA-IgG试剂盒质量的稳定性、操作方法 的精确性等问题值得关注,必须确保血清学检测方法 标准化.
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克拉玛依市1～17岁健康人群麻疹抗体水平调查
为进一步掌握克拉玛依市1～17岁健康人群麻疹抗体水平，为加速控制麻疹采取相应措施提供科学依据，于1999年10月对482名1～17岁健康人群用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法进行了麻疹IgG抗体水平调查，现将调查结果报告如下。 本次调查1～17岁健康人群482人，抗体阳性者（≥1∶200）442人，阳性率为91.70％，几何平均滴度（GMT）为1∶814.60。其中抗体阳性者属低抗体者（1∶200）115人，占调查人数的23.86％；中抗体者（1∶800～1∶3*!200）306人，占63.48％；高抗体者（＞1∶3*!200）21人，占4.36％。1 不同年龄组人群的麻疹抗体水平 附表显示各年龄组麻疹抗体阳性率范围为72.31％～100.00％，GMT范围为1∶261.10～1∶1*!354.41。人群随着年龄的增长抗体阳性率和GMT呈现波状起伏，即1岁、7岁、14岁的抗体阳性率和GMT呈高峰，3～4岁、9～12岁、16～17岁人群的阳性率和GMT呈低谷，这与本市现行的2针麻疹疫苗（MV）的免疫程序，即8月龄和7岁各免疫1针相符。
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昭通地区一起麻疹暴发原因的调查
2000年3月,鲁甸县大水井乡麻疹暴发.疫情波及7个村,45个农业社,发病125例,罹患率4.4‰,发病小9月龄,大26岁,7岁以下儿童发病65例,占52.0%;7～15岁占45.6%.病人均有发热、咳嗽、眼鼻卡他症状及出疹,30.4%儿童有科氏斑.10.4%有麻疹疫苗(MV)接种史,其他病人免疫史不详或未接种.取现患病人血12份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法检测麻疹IgM抗体,8份阳性,证实为一次麻疹暴发.
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合肥市2001～2002年发热出疹性病人实验室监测分析
为了解合肥市麻疹和风疹的流行情况,对来自合肥市市区和3个县2001、2002年的1?283例发热出疹性病人的血清标本,同时检测麻疹、风疹IgM抗体.麻疹IgM抗体检测采用捕捉IgM抗体酶联免疫吸附试验(ELISA),试剂购自中国疾病预防控制中心(CDC)病毒病预防控制所、上海荣盛生物科技有限公司.风疹IgM抗体检测采用间接ELISA,试剂购自海南华美生物有限公司.血清标本置低温冰箱冻存,以备上级CDC网络实验室随机抽样复核.数据采用Excel进行统计分析.
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国产浓缩、精制狂犬病疫苗免疫接种血清学效果观察
狂犬病疫苗是目前预防狂犬病唯一有效的生物制剂,为评价目前不同狂犬病疫苗的免疫效果,我们对1999年1～11月因犬伤来本站接种不同厂家生产的狂犬病疫苗(上海生物制品研究所生产浓缩狂犬病疫苗、辽宁生物技术公司生产精制狂犬病疫苗各4个批号)的本市患者,以酶联免疫吸附试验(ELISA)进行免疫前、后抗狂犬病抗体血清学观察.
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英山县3所小学风疹暴发的调查
1999年3～4月,英山县草盘镇毕升小学、红花小学和城关温泉实验小学报告发生出疹性疾病暴发.经流行病学调查及实验室检测,认定为一起风疹暴发.3所小学共发病101例,发病率达3.75%(101/2696).为总结经验,现将流行病学调查情况报告如下.1 调查对象和检测对3所小学的教职工和出现皮疹的学生进行了调查,内容为免疫史、发病时间、临床症状、体征及治疗情况等.随机抽取23名有皮疹的学生采静脉血2ml,分离血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹和风疹IgM抗体.试剂由中国预防医学科学院病毒学研究所和湖北省医学科学院病毒学研究所提供.以≥1:200为阳性,＜1:200为阴性.所有资料应用EPI info软件进行统计分析.
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上海市外来清扫工麻疹抗体水平初步调查
近几年,上海市外来人口麻疹发病呈上升趋势.据报导,上海市外来人口麻疹发病率从1993年的2.14/10万上升到1997年的7.99/10万,其中外来人口中成人发病占了一定比例.为了解外来人员成人麻疹抗体水平,制订特定人群麻疹防制措施,降低该人群发病的危险因素,我们于1998年10月采用单纯随机抽样方法对聘用的外来清扫工进行了麻疹抗体水平初步调查,现简报如下.1 调查对象和检测方法采用单纯随机抽样方法,对聘用的外地来沪清扫工和本市居民分别抽取221人、175人作为调查对象.两组人群均无明确发病史和麻疹疫苗(MV)接种史.所有调查对象采血分离血清,送上海市疾病预防控制中心,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测麻疹IgG抗体.抗体滴度＜1∶200为阴性,≥1∶200为阳性.
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贵州省一起家庭聚集性百日咳病例的实验室诊断
百日咳是由百日咳鲍特菌引起的急性呼吸道传染病,传染性较强,是严重威胁人类健康的主要传染病之一.随着20世纪40年代全球扩大免疫规划的实施,百日咳的流行得到有效控制[1].但近年来,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)疾病监测发现,长期无细胞百白破联合疫苗(DTaP)接种所带来的百日咳低发病率形势出现逆转,表现为发达国家百日咳发病率复升和发展中国家屡出现百日咳暴发,即所谓的“百日咳再现”.2012年WHO报道全世界百日咳病例约有200 868例,其中95％来自发展中国家,病死率高达3％[2].“百日咳再现”现象在全球受到了重视.
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北京市东城区1999年健康成人麻疹免疫水平监测
为了解北京市东城区成人麻疹免疫水平，1999年对18～45岁健康成人进行了麻疹免疫水平监测。现将监测结果报告如下。1 调查对象和抗体检测随机选择了生活和工作在北京市东城区的本市籍和外省籍从事食品、环境、厂矿、公共场所工作的18～45岁健康人，计本市户籍301人，外地户籍299人，共调查了600人。采集被调查对象的静脉血，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测麻疹IgG抗体，试剂由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。操作按说明书进行。血清IgG抗体＜1∶200为阴性，≥1∶200为阳性。计算抗体总阳性率、几何平均滴度（GMT），并按不同时期、年龄组、性别、户籍所在地分别计算抗体阳性率、GMT并进行分析比较。2 成人麻疹抗体水平本次监测600人，其中抗体阳性者487人，阳性率81.17％，GMT为1∶309.15。抗体滴度＜1∶200的占18.83％；抗体滴度≥1∶800的仅占35.50％，表明我区成人麻疹的抗体水平较低。
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三亚市农村儿童风疹抗体水平调查
为了解三亚市农村儿童风疹抗体水平,以便为制订免疫策略提供科学依据,我们于1998年对三亚市农村常住儿童,按照分层多阶段随机抽样的方法,在30个自然村,采集近期无出疹性疾病史的0～4岁儿童末捎血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测风疹病毒特异性IgG抗体,抗体滴度≥1:100判为阳性.所用试剂由中国药品生物制品检定所提供.
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海南省907名婴幼儿麻疹抗体水平监测
根据卫生部下发的<全国麻疹监测方案(试行)>分类指导的原则,海南省划归二类乙组,主要是控制麻疹暴发,保持较高的常规免疫接种率,分析人群免疫状况,开展病例调查等监测活动.我们于1998年10月在全省19个县、市抽查了907名12～24月龄儿童,采集末梢血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行麻疹IgG抗体水平监测.
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一起高校麻疹、风疹混合流行的调查分析
2001年3月1日～5月25日,西安市某高校发生出疹性疾病的流行,市卫生防疫站于3月20日接到报告后,依据流行病学调查、临床表现、实验室检测结果判定为一起麻疹、风疹混合流行,现将调查情况报告如下.1 诊断标准根据<全国麻疹监测方案(试行)>要求,对现症病人进行流行病学个案调查,并查阅患者住院病历,采集血标本进行血清学诊断.由市卫生防疫站采用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法检测麻疹、风疹IgM抗体.麻疹按<全国麻疹监测方案(试行)>中标准麻疹定义判定.风疹按<传染病诊断标准及处理原则>的要求判定.
