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磷酸二酯酶4在神经系统疾病发病机制中的作用
环磷酸腺苷(cAMP)为哺乳动物的经典第二信使,参与调节其许多生理功能,包括肝脏和肌肉的糖原储存、学习、记忆、心情及情感等[1].磷酸二酯酶(PDE)4为cAMP特异性的水解酶,其水解活性功能通常占细胞内水解cAMP活性功能的主要地位.PDE4在神经系统的各类细胞中均有不同程度的表达,在调节神经系统活动中起着重要的作用.研究[1]表明,PDE4抑制剂Rolipram和其他典型的抑制剂具有增强意识、抗抑郁、抗焦虑、抗炎症、平滑肌松弛的作用.现对PDE4在神经系统疾病发病机制中的作用综述如下.
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高效液相色谱法测定环磷酸腺苷及其制剂的含量
目的 对环磷酸腺苷及其衍生物葡甲胺环磷酸腺 苷制剂 含量测定方法进行研究。方法 采用高效液相色谱法，将测得 结果与 纸层析法测得结果进行比较。结果 回收率为99.20%，RSD 为0.4 2%。结论 该方法精密度良好，操作简便，可用于快速测定环 磷酸腺苷及其制剂的含量。
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β-葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响
目的: 探讨β-葡聚糖对RAW264.7细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响.方法: 中性红比色法检测细胞生长, 酚试剂法检测细胞蛋白质合成, 动态检测β-葡聚糖对胞内游离钙和cAMP浓度的影响.结果: 微量β-葡聚糖可促进细胞生长及蛋白质合成;β-葡聚糖作用后3～5 min使胞内游离钙浓度升高,作用1 min 后使cAMP浓度升高, 并保持较高水平.结论: 胞内游离钙及cAMP是β-葡聚糖对RAW264.7细胞作用过程中重要的信使分子.
关键词： β-葡聚糖 胞内游离钙 环磷酸腺苷 RAW264.7细胞系 增殖 -
Ac-SDKP通过Gαs/Gαi-cAMP信号通路抑制矽肺大鼠肺纤维化
目的:研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)与激动型G蛋白(Gαs)/抑制型G蛋白(Gαi)-环磷酸腺苷(cAMP)信号通路的关系,探讨Ac-SDKP抑制矽肺大鼠纤维化的作用及其机制.方法:采用一次性支气管灌注SiO2构建大鼠矽肺模型,并予以Ac-SDKP抗纤维化治疗和预防治疗.体外采用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,并予以Ac-SDKP、缬沙坦(valasrtan)和二丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)预处理.免疫荧光法检测Gαs蛋白与波形蛋白(vimentin)在矽肺组织中的定位与表达,Western blot法检测矽肺组织和AngⅡ诱导的肌成纤维细胞中Gαs、Gαi、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和Ⅰ型胶原表达,EIA试剂盒检测cAMP活性.结果:与对照组相比,矽肺大鼠肺组织中Gαs和cAMP表达下调,而Gαi表达上调并伴随α-SMA和Ⅰ型胶原表达升高(P＜0.05),Ac-SDKP抗纤维化治疗和预防治疗均可抑制该变化;同时体外研究发现Ac-SDKP、valsartan和db-cAMP预处理后可抑制AngⅡ介导的Gαs和cAMP表达下调(P＜0.05),抑制肌成纤维细胞分化和细胞外基质沉积.结论:Ac-SDKP通过调节Gαs/Gαi-cAMP信号抑制肌成纤维细胞分化,发挥抗矽肺大鼠肺纤维化的作用.
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人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的鉴定及相关胞内信号转导通路的研究
目的:鉴定人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的类型及其介导的细胞内信号转导途径,探讨EP3对人肝0细胞癌发生发展的影响及相关分子机制.方法:用RT-PCR实验检测Huh7细胞中EP3亚型的类型,给予EP3受体激动剂 sul-prostone 处理后,用WST-8法检测细胞的增殖活性,用酶联免疫法测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的变化,用Western blot-ting法检测Akt、Erk等蛋白磷酸化水平的变化.结果:RT-PCR 结果显示人肝细胞癌Huh7细胞中表达的EP3剪接体类型是EP3(5);WST-8实验结果显示,经 10.0 μmol/L EP3受体激动剂sulprostone作用24 h后,细胞增殖率增加 46.2%;酶联免疫法显示sulprostone 可促使细胞内cAMP浓度显著增高;Western blotting 实验显示,sulprostone作用30 min可使 Huh7 细胞中Akt蛋白磷酸化水平增加27%,而Erk蛋白磷酸化水平降低 16.4%.结论:人肝细胞癌 Huh7 细胞中,表达的EP3亚型类型是EP3(S),EP3受体激动剂sulprostone可以促进Huh7细胞的增殖.通过EP3受体的介导促进胞内cAMP表达水平的增加,其机制可能部分涉及到Akt及Erk信号转导通路.
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前列腺素E2对胆管上皮癌细胞增殖的影响
目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对胆管上皮癌细胞增殖的影响及其可能机制.方法:体外培养胆管上皮癌细胞株(HuCCT1),给予外源PGE2处理,以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率;Fluo-3/AM荧光负载胆管上皮癌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化情况;并用酶联免疫法测定细胞内环磷腺苷(cAMP)的浓度.结果:PGE2可促进胆管上皮癌细胞生长,而且可使细胞内钙离子和cAMP浓度升高.结论:PGE2影响胆管上皮癌细胞内Ca2+和cAMP浓度,可能与PGE2促进肿瘤细胞生长有关.
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鱼棉平喘方对哮喘豚鼠的平喘作用及血浆cAMP、cGMP水平的影响
目的探讨鱼棉平喘方对哮喘豚鼠的作用机理.方法通过平喘实验观察引喘潜伏期及放射免疫分析法测定哮喘豚鼠分组治疗后血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平.结果测定各组豚鼠给药1周前、后的引喘潜伏期,结果显示本方治疗各组与正常组以及与治疗前各组比较,均显著延长引喘时间(P＜0.01),与阳性药组比较无显著性差异(P＞0.05).将豚鼠造模和复制引喘后分组给药治疗1周后取血测定各组豚鼠血浆中cAMP、cGMP水平及cAMP/cGMP比值,结果显示本方治疗各组与模型组比较均显著升高血浆cAMP水平及cAMP/cGMP比值、降低血浆cGMP水平(P＜0.01～0.05).与阳性药组、正常组比较均无显著性差异(P＞0.05).结论本方有明显的平喘作用,其作用机理与其调节机体cAMP、cGMP水平及稳定cAMP/cGMP比值有关.
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正常小鼠血液中环核苷酸信使的昼夜生理节律
目的从时间生理学的角度,探讨血液中环核苷酸系统的生理节律.方法将实验动物置人工光照周期的稳定环境中饲养2周后,在昼夜6个不同时点分别取样测定.结果小鼠血液中cAMP和cGMP含量变化呈现明显的昼夜节律特征,中值分别为104.34和64.70nmol/L,两者相差1.64倍;相位分别位于12∶56和19∶58时,相差近7h.结论正常小鼠血液中的环核苷酸信使含量具有昼夜变化的特征.
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肾环磷酸腺苷含量下降与实验性肾病大鼠水潴留有关
目的确定血管升压素(DDAVP)及其信使环磷酸腺苷(cAMP)在实验性肾病大鼠水潴留中的作用.方法将42只大鼠分为两大组共6个小组,每组7只.第一大组为对照组,包括正常对照组(组1)、DDAVP组(组2)、DDAVP拮抗剂组(组3).第二大组为肾病组,包括阿霉素(ADR)组(组4)、ADR+DDAVP组(组5)、ADR+DDAVP拮抗剂组(组6).测定肾髓质的cAMP含量、尿渗透压和血渗透压等的改变.结果在给予DDAVP或DDAVP拮抗剂以后,第1～6组大鼠的尿渗透压分别为(1771.5±879.4)、(2145.0±936.2)、(1763.6±497.5)、(1049.6±272.3)、(1144.8±242.8)和(992.7±195.7)mmol/L,ADR肾病大鼠尿渗透压显著下降,其一级处理因素ADR的F值(下同)为113.069,P=0.000443;血渗透压分别为(302.2±8.7)、(296.4±9.5)、(307.9±6.4)、(286.2±5.3)、(288.5±6.2)和(290.2±6.5)mmol/L(F=17.3022,P=0.0142);无溶质水清除率(CH20)分别为(-0.84±0.44)、(-1.37±0.74)、(-1.06±0.58)、(-1.03±0.38)、(-1.02±0.6)和(-0.85±0.49)ml/h(F=0.0241,P=0.8843).肾髓质的cAMP含量分别为(652.22±151.97)、(709.07±84.46)、(566.62±38.51)、(77.11±16.02)、(83.01±20.59)和(84.03±25.72)pg/mg蛋白质(F=177.033,P=0.000184).结论肾髓质环磷酸腺苷含量的减少与阿霉素肾病大鼠水潴留有关,由于血管升压素并不能增加本模型大鼠肾髓质组织cAMP的含量,故它在本模型水潴留的机制中并不发挥显著作用.
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基因转染Gβγ亚基抑制剂对哮喘小鼠β受体水平和环磷酸腺苷的影响
目的研究基因转染Gβγ亚基抑制剂对哮喘小鼠β受体水平和环磷酸腺苷(cAMP)的影响.方法建立哮喘小鼠动物模型,经尾静脉注射转染携有Gβγ亚基抑制剂基因(β ARKct)的表达质粒.用Western blot检测基因表达.放免法检测小鼠肺部的β受体和cAMP的水平.结果 (1)哮喘小鼠β受体和cAMP水平均比正常对照组明显下降(P＜0.05).(2)β ARKct在经基因转染7d后的小鼠肺部有表达.(3)β ARKct转染后肺部β受体的数目和cAMP受体水平均比空载质粒转染组显著上调(P＜0.05).结论基因转染β ARKct对哮喘小鼠β受体和cAMP的下降有抑制作用.
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细菌脂多糖对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响
目的:探讨细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响. 方法:以中性红比色法检测细胞生长,酚试剂法检测细胞蛋白质合成,并动态检测LPS对胞内游离钙和cAMP浓度的影响. 结果:①微量LPS可促进细胞生长及蛋白质合成;②LPS作用后3～5 min可使胞内游离钙浓度升高,作用1 min后使cAMP浓度升高,并保持较高水平. 结论:胞内游离钙([Ca2+]i)及cAMP是LPS对NIH3T3细胞作用过程中重要的信使分子.
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环磷酸腺苷信号通过促进线粒体融合防止足细胞凋亡
目的 研究线粒体分裂/融合在环磷酸腺苷(cAMP)信号防止足细胞凋亡中的作用.方法 使用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)、CAMP激动剂pCPT-cAMP(pCPT)、花生四烯酸(Ara)和Mdivi-1处理条件永生化的足细胞.Western印迹法检测p-Drp1、Drp1、Fis1、OPA1、Mfn1、cleaved?caspase3、caspase3蛋白质表达.Cel Light?Mitochondria?BacMam-GFP?2.0染色系统和透射电子显微镜观察体外足细胞线粒体形态.CCK-8试剂盒检测足细胞毒性.结果 激活cAMP信号防止PAN诱导的线粒体分裂;PAN通过抑制足细胞线粒体外膜Mfn1蛋白表达,抑制线粒体融合;cAMP信号促进Drp1磷酸化和Mfn1蛋白表达,促进线粒体融合;线粒体分裂/融合直接调节足细胞凋亡.结论 环磷酸腺苷信号通过调节线粒体分裂/融合防止足细胞凋亡.
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中药对兔晶状体上皮细胞凋亡的cAMP的抑制作用
目的:观察中药复明眼液对凋亡的兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)的环磷酸腺苷(cAMP)的影响及其作用机制.方法:采用终浓度250 μmol/L H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡.用放射免疫分析法检测不同浓度的复明眼液对凋亡的兔LEC的cAMP含量的影响.结果:各实验组兔LEC的cAMP含量,模型组为(89.2±10.2)pmol/g,空白组为(60.6±10.7)pmol/g,两者比较差异有非常显著性(P<0.01),说明兔LEC凋亡时,cAMP浓度明显增高.中药治疗C组[(81.3±11.2)pmol/g]与模型组比较差异没有显著性(P＞0.05),说明终浓度为100 μg/ml的复明眼液对兔LEC的cAMP含量没有明显作用.中药治疗D组[(69.5±11.8)pmol/g]与模型组比较差异有显著性(P<0.05),说明终浓度为200 μg/ml的复明眼液可以降低兔LEC的cAMP含量.中药治疗E组[(52.2±7.6)pmol/g]和F组[(41.5±8.1)pmol/g]分别与模型组比较,差异均有非常显著性,显示终浓度为400 μg/ml和800 μg/ml的复明眼液,有显著减少兔LEC中cAMP含量的作用.上述各中药治疗组,随着复明眼液浓度的提高,对兔LEC的cAMP作用愈强,即呈一定的量效关系.结论:终浓度250 μmol/L的H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡时可伴有兔LEC内的cAMP浓度升高.中药复明眼液可以降解凋亡的兔LEC内的cAMP含量,因而对H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡具有一定的抑制作用.
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环磷酸腺苷的研究进展
环磷酸腺苷(cyclic Adenosine-3',5'-monophosphate,简称cAMP)是核苷酸的衍生物,为蛋白激酶致活剂,是有机体中广泛存在的一种具有生理活性的重要物质,由ATP在腺苷活化酶催化下生成,是细胞内传递激素和递质作用的中介因子,因此被称为"第二信使".其灭活酶为磷酸二脂酶.它对很多酶催化的反应具有调节作用,可调节与细胞内贮藏的糖和脂肪反应的一系列酶的活性,对蛋白质的生物合成也具有调节控制作用.可广泛参与细胞功能的调节,能舒张平滑肌、扩张血管、改善肝功能、促进神经再生、抑制皮肤外层细胞分裂和转化异常细胞的功能、促进呼吸链氧化酶的活性、改善心肌缺氧等.国外对其生理活性、作用机理进行了大量研究,涉及疾病治疗、信号表达、基因复制等方面.环磷酸腺苷(cAMP)可以通过化学合成、生物发酵、天然产物分离提取等方法获得.
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电针对大鼠不同脑区cAMP和cGMP含量的影响
目的:探讨针刺镇痛与中枢cAMP和cGMP含量变化之间的关系.方法:运用放射免疫分析法(RIA)测定大鼠电针前后不同脑区cAMP和cGMP含量的变化.结果:电针30min提高大鼠痛阈的同时,使间脑cAMP、端脑cGMP含量显著降低(P＜0.05).脑干cGMP含量显著升高(P＜0.05).结论:中枢环核苷酸可能参与针刺镇痛.
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AngⅡ反馈性调节肾素分泌机制的研究进展
肾脏局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的激活在慢性肾脏病的发展过程中起着重要作用,但肾脏局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与肾素之间存在的复杂的反馈调节信号传导途径并不是很清楚.近年来大量研究发现,AngⅡ可以将环磷酸腺苷(cAMP)、钙离子(Ca2+)和环磷酸鸟苷(cGMP)三大信号途径联系起来,直接、间接调节肾素分泌.笔者结合相关文献对AngⅡ反馈性调节肾素分泌机制分析如下.
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心先安与洋地黄治疗肺心病肺心功能失代偿期的疗效
肺心病由于低氧血症、合并肾功能不全,以及利尿剂引起的医源性低钾血症,洋地黄单独应用较其它心脏病引起的心衰疗效差.心先安(环磷酸腺苷葡甲胺)是环磷酸腺苷(cAMP)依赖的非洋地黄正性肌力药,近年来单独应用治疗各种心脏病引起的充血性心衰,我们将心先安与洋地黄联合治疗慢性肺心病肺心功能失代偿期的患者,观察其临床疗效及副作用.
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c-AMP/PKA信号通路在γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939生长中的作用研究
目的 探讨c-AMP/PKA信号通路在γ-氨基丁酸(GABA)抑制胆管癌细胞株QBC939生长中发挥的作用.方法 分别以GABA、GABA+ 8Br(cAMP激动剂)、GABA +H89(PKA 拮抗剂)孵育胆管癌细胞株QBC939 48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡,ELISA法检测cAMP、蛋白激酶A(PKA)表达情况,Westem blot法检测PKA Ⅰ/PKA Ⅱ蛋白表达.结果 MTT及流式细胞术检测结果显示8Br协同GABA所导致的增值抑制(20.30％±0.57％ vs 16.11％ ±0.73％,t=8.977,P＜0.05)和凋亡效应(32.62％±2.45％vs 28.38％±1.53％,t=2.929,P＜0.05),而H89拮抗此效应; ELISA检测结果显示GABA明显上调eAMP及PKA的含量,8Br协同GABA增加cAMP含量(26.08 ±0.15 vs 25.88±0.06,t=8.565,P＜0.05),H89拮抗CABA所导致PKA的含量(933.13±3.13 vs 947.71 ±6.51 t=2.512,P＜0.05);Western blot检测结果显示,GABA较对照组能明显下调PKA Ⅰ(0.0878 ±0.003 vs 0.1521±0.003,t=29.687,P＜0.05),上调PKA Ⅱ蛋白的表达(0.2042 ±0.012 vs 0.1461 ±0.072,t=8.152,P＜0.05).结论 GABA可能通过cAMP/PKAⅡ信号通路发挥抑制胆管癌细胞株QBC939生长的作用.
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RGS4和D2受体信号通路相关分子在甲基苯丙胺依赖CPP大鼠纹状体的表达变化
目的:研究甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)依赖条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验大鼠纹状体G蛋白信号调节因子4(regulator of G-protein signal 4,RGS4)和多巴胺D2受体(dopamine receptor D2)信号通路相关分子的表达变化.方法:建立METH依赖CPP大鼠1周组、2周组,应用蛋白质印迹(Western blot)测定各组大鼠纹状体RGS4和D2、抑制性G蛋白α亚基(inhibitory G protein α-subunit,Gαi)、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)蛋白表达的变化;应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组大鼠纹状体环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)含量的变化.结果:与生理盐水对照组相比,METH依赖1周组、2周组大鼠在伴药箱的平均停留时间明显延长(P＜0.05).与生理盐水对照组相比,RGS4蛋白在METH依赖1周、2周组的表达均明显下降(P＜0.01),且与METH依赖1周组相比,2周组的下降更为明显(P＜0.05);与生理盐水对照组相比,D2、Gαi、MAPK蛋白以及cAMP在METH依赖1周、2周组的表达均明显升高(P＜0.01),且与METH依赖1周组相比,2周组的升高更为明显(P＜0.05).结论:在METH依赖的CPP大鼠纹状体中,RGS4和D2受体信号传导通路相关分子发生了改变,RGS4可能参与了METH依赖的CPP大鼠纹状体D2受体信号传导通路的调节.
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榄香烯抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制
目的:研究榄香烯(elenene, Ele)抑制重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor, rhEGF)诱导的晶状体上皮细胞(lens epithelium cell, LEC)增殖时对细胞内钙(Ca2+)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate, cGMP)的影响,探讨其抑制增殖的细胞信号转导机制.方法:采用rhEGF诱导LEC增殖后,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子浓度([Ca2+]i)、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,探讨Ele的影响.结果:(1)Ele组LEC内[Ca2+]i比增殖组显著增高(P＜0.01);(2)增殖组LEC内cAMP浓度比对照组明显下降、cGMP浓度比对照组明显升高(P＜0.01);(3)Ele组LEC内cAMP浓度比增殖组显著升高、cGMP浓度比增殖组显著降低(P＜0.01).结论:Ele抑制LEC增殖的作用是通过细胞内[Ca2+]i、cAMP和cGMP信号系统及多条信号转导途径的相互作用实现的,这可能是Ele抑制LEC增殖、防治后发性白内障的细胞和分子生物学机制.
