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S型氯代甘油醇对大鼠精子运动和超活化抑制作用研究
目的 研究S型氯代甘油醇( SACH)对大鼠精子运动和超活化的影响和可能机制.方法 20只成熟雄性SD大鼠随机分为4组,分别给予0、2.5、5.0和10mg/kg BW SACH,连续灌胃染毒52天.取附睾尾精子,获能条件下培养5h,以计算机辅助精子分析系统检测精子运动和超活化运动,同时检测精子特异的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDS)活性、三磷酸腺苷(ATP)和环磷酸腺苷(cAMP)水平,观察己酮可可碱(PTF)对SACH的拮抗作用.结果 SACH染毒组大鼠精子曲线运动速率(VCL)、平均路径速率(VAP)、直线运动速率(VSL)和精子头侧摆幅度(ALH)与对照组相比受到显著抑制(P＜0.01),运动直线性( LIN)显著增强(P＜0.01).SACH使VCL≥400μm/s或LIN≤20％的比例显著减少(P＜0.01和P＜0.05),表明精子超活化受抑制.SACH显著抑制GAPDS活性,ATP和cAMP水平也随染毒剂量增加呈下降趋势.PTF可改善精子cAMP水平,部分缓解精子运动和超活化的抑制程度.结论 SACH抑制大鼠精子GAPDS活性导致ATP和cAMP水平下降,可能是影响精子运动和超活化的重要机制.
关键词： S型氯代甘油醇 精子运动 超活化 3-磷酸甘油醛脱氢酶 环磷酸腺苷 -
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)动力学方法的初步研究
目的 建立一种简便、快捷、准确的GAPD的检测方法,为以后的临床推广奠定基础.方法 以三乙醇胺作为缓冲液(PH为7.4),1,3-二磷酸甘油酸为底物,偶联3-磷酸甘油酸激酶,还原型辅酶Ⅰ(NADH)被氧化成氧化型辅酶Ⅰ (NAD+),在波长340nm处检测吸光度的变化值,在一定范围内,吸光度的下降与GAPD的活性成正比,间接地计算出GAPD的活性.结果 本测定方法的适PH为7.4,米氏常数(Km)值为6.3×10 - 4mmoL/L,适基质浓度为0.007mmoL/L,批内、批间变异系数为1.60％、1.94％,回收率为96.6％.在0-140U/L范围内线性关系良好,参考值的范围是4-28U/L(逆向法).结论 本法能够准确快速的测定GAPD的活性,是用各种生化自动分析仪.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 动力学方法 自动化分析 -
3-磷酸甘油醛脱氢酶测定在糖尿病肾病诊断中的临床意义
目的 通过测定血中3- 磷酸甘油醛脱氢酶的活性,探讨GAPD 在糖尿病肾病早期诊断中的意义.方法测定190例健康者和80 例2 型糖尿病患者的血GAPD,尿微量白蛋白和β2- 微球蛋白,对结果进行统计分析.结果疾病组中GAPD 活性水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).疾病组中的微量白蛋白尿组、大量白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2- 微球蛋白高于正常对照组,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).但是正常白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2- 微球蛋白与对照组相比差异无统计学意(P ＞ 0.05).结论 GAPD 在正常白蛋白尿期活性已经发生变化,比微量白蛋白和β2- 微球蛋白活性变化更早,能够提早预测糖尿病肾脏疾病的发生,有利于临床做出诊断,改善患者的预后.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 2型糖尿病 微量白蛋白 β2-微球蛋白 -
G3PD的修饰蛋白对急性肾功能衰竭大鼠丙二醛和超氧化物歧化酶的影响
目的:研究3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白(modifier protein,MP)对急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)大鼠丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的影响.方法:利用庆大霉素致ARF的动物模型,将大鼠随机分成4组:正常对照组、阴性对照组、阳性时照组和实验组,采用硫代巴比妥酸法和羟胺法分别测定血清及肾皮质匀浆MDA和SOD,光镜、电镜观察肾组织学改变,同时测定血肌酐(Scr).结果:实验组、阳性对照组血清及肾皮质匀浆MDA明显下降,SOD明显上升,P＜0.01.同时Scr下降.光镜、电镜示实验组、阳性对照组肾脏病理仅呈灶状改变.比阴性对照组减轻.结论:MP可以缓解氧自由基损伤,减轻ARF时的肾脏病理改变,改善肾功能.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 丙二醛 超氧化物歧化酶 急性肾功衰竭 -
提纯G3PD的修饰蛋白
目的：从猴的肾上皮细胞(Vero-E6)内提取具有促进细胞生长作用的3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)的修饰蛋白(modifier protein, MP)。方法：将培养液中K+的浓度降低到3.2 mmol/L,在Vero-E6细胞内将产生G3PD的修饰蛋白，用亲和层析及阴离子高效液相层析纯化而获取这种修饰蛋白。结果：蛋白的分子量大约为62 kDa,Westem及免疫吸附实验证实：随着细胞外液中K+的浓度降低，该种蛋白也相应增多，在低k溶液2 h后达大值，与G3PD的活性相平行。结论：从猴的肾上皮Vero-E6细胞分离出G3PD的修饰蛋白，有促进G3PD的活性、增进细胞生长的作用。
关键词： Vero-E6细胞 钾缺乏 修饰蛋白 3-磷酸甘油醛脱氢酶 细胞增殖 -
G3PD的修饰蛋白对急性肾功能衰竭大鼠中细胞间粘附分子的影响
目的:观察3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白(modifier protein,MP)对急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)大鼠肾间质内细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的影响.方法:利用庆大霉素致ARF的动物模型,将大鼠随机分成3组,即正常对照组、模型组和MP组.分别测定各组血肌酐(Scr),利用光镜、电镜观察肾组织学改变,并免疫组化染色标记ICAM-1的变化.结果:MP组ICAM-1表达明显降低,与模型组相比,P＜0.01.同时光镜、电镜示MP组比模型组肾脏病理明显减轻.Scr下降,P＜0.01.结论:MP可以降低ICAM-1表达,减轻ARF大鼠的肾脏病理改变,改善肾功能.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 细胞间粘附分子-1 急性肾功能衰竭 -
苏尼替尼对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶表达和活性的影响
目的 探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)表达和活性的影响.方法 用不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖活力的影响；Western blot检测HeLa细胞中GAPDH蛋白表达的变化；GENMED细胞GAPDH活性终点比色法定量检测了GAPDH的活力.结果 经Sutent处理24 h后,HeLa细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为10.283 μmol/L；Sutent可明显降低HeLa细胞中GAPDH蛋白的表达量,并能直接抑制GAPDH的活力.结论 Sutent可抑制HeLa细胞的增殖,降低GAPDH蛋白的表达量及活力,显示了其作为多靶点药物的重要研究价值.
关键词： 苏尼替尼 HeLo细胞 细胞增殖 3-磷酸甘油醛脱氢酶 酶活力 -
周期型马来丝虫复合基因重组质粒和相应表达蛋白的免疫学研究
目的 构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmCPI/BmGAPDH)复合基因重组质粒,并转染人宫颈癌细胞(Hela)进行重组蛋白表达.将重组质粒和相应表达蛋白进行免疫学研究比较,为研制新型的抗丝虫基因工程疫苗提供理论及实验依据.方法 扩增周期型马来丝虫目的编码基因.将目的基因片段和载体分别双酶切后进行连接,构建复合基因重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH,鉴定后转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞,进而通过RT-PCR和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株.亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过免疫蛋白印迹法(Western blot)对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定.60只BALB/c小鼠分5组,每组12只,第2、4、6周分别免疫1次.磷酸盐缓冲液(PBS)对照组为注射PBS 100 μl;空质粒/CpG对照组为注射pcDNA3.1 100 μg和CpG 30 μg;复合重组质粒/CpG组为注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH 100 μg和CpG 30 μg;复合重组蛋白/CpG组为注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH复合重组蛋白50 μg和CpG 30 μg;复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组前2次注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH 100 μg和CpG 30 μg;后1次注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH复合重组蛋白50 μg和CpG 30 μg.用RT-PCR方法检测肌肉组织内目的基因;用酶联免疫吸附试验(ELISA)、特异性增殖试验(MTT法)分别检测免疫小鼠血清抗体效价、T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-4水平.结果 复合重组质粒pcDNA3.1 (+)-BmCPI/BmGAPDH免疫小鼠后,从小鼠肌肉组织扩增出目的基因.复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组小鼠免疫4、6周后血清抗体效价(1 695.12±1.43、3 199.63±1.34)均高于复合重组质粒/CpG组(712.69±1.08、1 510.08±1.43,P均＜0.05)和复合重组蛋白/CpG组(800.02±1.34、1 510.08±1.43,P均＜0.05);第6周的复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数(1.629±0.235)高于复合重组蛋白组(1.248±0.110,P＜0.05);免疫4、6周后,复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组和复合重组质粒/CpG组小鼠血清IFN-γ水平[(101.660±5.101)、(178.265±7.139)mg/L,(102.067±3.722)、(115.148±6.031)mg/L]均高于复合重组蛋白组[(75.438±2.102)、(82.004±3.777) mg/L,P均＜0.05];免疫后6周,复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组和复合重组蛋白/CpG组的小鼠血清IL-4水平[(75.385±3.318)、(46.363±3.672)mg/L]均明显高于复合重组质粒/CpG组[(36.691±3.443)mg/L,P均＜0.05).结论 pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH核酸疫苗和相应蛋白疫苗均可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答反应.核酸疫苗-蛋白疫苗联合免疫效果有明显的优势.
关键词： 马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 3-磷酸甘油醛脱氢酶 复合基因 表达蛋白 免疫 -
周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因的克隆与真核表达
目的 克隆和表达周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)的编码基因.方法 依据公布的BmGAPDH基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的 编码基因.PCR产物经TA克隆后,克隆至载体pGEM-T Easy中,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/BmGAPDH,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)对获得重组蛋白(rBmGAPDH)进行分析和鉴定.结果 转染的COS-7细胞高水平表达BmGAPDH的mRNA,根据克隆的目的 基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的结果 一致.SDS-PAGE分析显示重组蛋白rBmGAPDH相对分子质量(Mr)约为43 000.结论 成功进行了BmGAPDH编码基因的克降和真核表达.Cloning,weukaryotic expremion of the gene encoding glyceraidehydes-3-phosphate dehydrogenase from periodic Brugia malayi XIE Dong-fimg,FANG Zheng,HUANG Wei-qun,SHEN Qin,TONG Hai-yan,XUBang-sheng.
关键词： 周期型马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 真核表达载体 COS-7细胞 -
马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测
根据GenBank中马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(BmG3PD基因)序列设计引物,以马来丝虫mRNA为模板,RT-PCR扩增BmG3PD基凶,将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆.经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切及PCR鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmG3PD,经序列分析及同源性比较,以及对其编码产物进行B细胞表佗预测,结果表明PCR扩增的特异性条带为1 020 bp,与预期相符,与GenBank已知基因序列同源性为99%.编码产物B细胞表佗预测,氨基酸区域可能在22～36、242～255、303～318和326～336位.
关键词： 马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 基因克隆 序列分析 B细胞表位 -
华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究
目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性.方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用凝血酶和纯化柱酶切、纯化的CsGAPDH免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.ELISA检测抗IgG抗体滴度,浓缩型S-P免疫组化3步法检测CsGAPDH抗原在免疫小鼠体内的分布和表达.蛋白质印迹法(Western blotting) 鉴定其抗血清的特异性.建立酶反应体系测定重组蛋白CsGAPDH的酶催化活性.结果纯化蛋白样品呈单一条带.免疫动物获取 CsGAPDH 抗血清,在免疫过程中抗体滴度呈连续上升趋势.CsGAPDH抗原分布和表达于小鼠肌细胞膜部位.免疫小鼠血清具有抗 CsGAPDH特异性抗体.重组蛋白CsGAPDH具有酶生理活性,其酶活力单位为 2 872 U min-1·ml-1.结论制备的重组蛋白 CsGAPD H具有较好的酶活性和免疫原性.
关键词： 华支睾吸虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 蛋白质印迹法 免疫原性 -
3-磷酸甘油醛脱氢酶与帕金森病
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是一种经典的糖酵解蛋白,除了行使糖酵解功能外,还参与多种细胞生理功能.研究显示,GAPDH酶蛋白与帕金森病(PD)相关蛋白如α-突触核蛋白等有相互作用,参与Lewy小体形成,介导多种因素诱导的神经元细胞凋亡.gapdh基因过表达、GAPDH酶蛋白异常聚集和核转位与PD的发生有关.GAPDH 在应激条件下发生巯基亚硝基化,巯基亚硝基化的GAPDH(SNO-GAPDH)通过与Siahl结合发生核转位,介导凋亡级联反应.司来吉兰及其结构类似物通过与GAPDH酶蛋白结合,干扰凋亡信号通路,发挥神经保护作用.GOSPEL(GAPDH'scompetitor of siah protein enhances life)是一种新发现的GAPDH酶蛋白神经毒性通路中的负调节蛋白,可能为PD治疗提供新的靶点.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 帕金森病 凋亡 神经变性疾病 -
3-磷酸甘油醛脱氢酶与神经元凋亡
综述了3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)的基因表达、酶活性及亚细胞定位等三个方面与神经元凋亡的关系的研究新进展,并列举了一些GAPDH参与神经退行性疾病的临床证据.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 神经元 凋亡 -
3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白减轻急性肾小管坏死自由基损伤的研究
目的 通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时, MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用.方法 采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析.纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列.将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2mL-/d×7d+0.9%氯化钠溶液2mL/dX4d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 钠溶液2mL/d×14d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+表皮生长因子 20μg·kg-1·d-1×14d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).应用MP观察7和14d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH).及一氧化氮(NO)水平的动态变化.通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化.同时测定血肌酐(SCr)水平.结果 间接免疫荧光法证实, MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4mmol/L时.MP由25个氨基酸残基组成.实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均<0.01), GSH明显上升(P值均<0.01).MP组肾脏病理改变比模型组明显减轻,同时SCr下降(P<0.01);实验组的ICAM-1表达较阴性对照组下调.结论 自由基积极参与ATN肾小管上皮细胞损伤, MP能够抑制ATN大鼠血清及肾组织中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降.MP具有抗自由基损伤及修复肾小管上皮细胞的作用.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 氨基酸测序 肾小管坏死 自由基 -
日本血吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶的克隆表达及结构预测
目的 克隆、表达日本血吸虫(大陆株)3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjcGAPDH)编码基因并作结构预测.方法 将编码SjcGAPDH的pBluescript质粒用限制性内切酶Xho Ⅰ和Sac Ⅰ消化后,收集目的片段,与经同样酶切的原核表达载体pET28b连接,筛选重组克隆并测序,将正确的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细菌,异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白.用GeneRunner 软件对该蛋白的结构及抗原表位进行预测.结果 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察到大小约42.7 kDa的特异性蛋白条带,与预计一致.免疫印迹试验(Western blot)结果表明致弱尾蚴免疫兔血清可识别该重组蛋白.结构预测表明SjcGAPDH的第50～70、102～122、135～148、165～175、187～205、254～272、278～285位氨基酸区域可能为蛋白质的抗原优势区域.结论 SjcGAPDH编码基因克隆、表达获得成功,为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础,对GAPDH的结构和性质预测为探索该蛋白的抗原优势表位提供了理论依据.
关键词： 日本血吸虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 克隆 表达 -
多发性硬化患者CSF3-磷酸甘油醛脱氢酶反应性抗体水平的改变及其临床意义
目的 探讨多发性硬化(MS)患者CSF 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)反应性抗体水平的改变及其临床意义.方法 采用ELISA法检测23例MS及17例其他炎症性神经系统疾病(OIND)、13例其他非炎症性中枢神经系统疾病(ONIND)患者的CSF GAPDH反应性抗体水平.分析MS患者CSF GAPDH反应性抗体水平与其性别、年龄和扩展残疾状况量表(EDSS)评分的关系.结果 MS组CSF GAPDH反应性抗体水平显著高于OIND组和ONIND组(P＜0.01,P＜0.05);男性与女性MS患者CSF GAPDH反应性抗体水平的差异无统计学意义.Spearman相关分析显示,MS患者的CSF GAPDH反应性抗体水平与其年龄、EDSS评分均无关(rs=-0.197,rs=0.327;均P＞0.05).结论 MS患者的CSF GAPDH反应性抗体水平显著升高,并且与患者的性别、年龄及病情无明显关系.
关键词： 多发性硬化 3-磷酸甘油醛脱氢酶 反应性抗体 CSF 自身免疫反应 -
田鼠巴贝虫GAPDH蛋白特性和抗原表位的生物信息学分析
目的 分析田鼠巴贝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)的蛋白特性和抗原表位.方法 运用ORF Finder、PROSITE、ProtParam、SignalP、TMHMM Server、SOUSI、MotifScan、Bcepred、HNN等生物信息学软件分析预测BmGAPDH基因的开放阅读框和编码蛋白的特征结构域、理化性质、信号肽、跨膜结构域、稳定性、可溶性、翻译后修饰位点、亲水性、柔韧性、表面可及性、二级结构等特性;同时结合DNAStar和SWISS-MODEL软件分别预测蛋白的抗原表位和三维空间结构.结果 BmGAPDH由1074个核苷酸编码的357个氨基酸组成,其特征结构域位于170-177位氨基酸残基.编码蛋白相对分子质量为3.833309×104,分子式为C1700H2723N457O514S17,理论等电点为6.98,不存在信号肽,有1个跨膜区,23个翻译后修饰位点,6个亲水性参数得分≥1.9的区域,3个柔韧性参数得分≥2.0的区域,10个表面可及性参数得分≥1.9的区域,8个潜在的B细胞抗原表位,19个潜在的T细胞抗原表位,在溶液中性质稳定,且为疏水性蛋白.BmGAPDH蛋白和人类的GAPDH蛋白序列覆盖率为56%,相似性为70%.结论 BmGAPDH含有多种抗原表位,且含量丰富,具有成为巴贝虫病疫苗候选抗原的潜在特性.
关键词： 田鼠巴贝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 生物信息学分析 蛋白特性 抗原表位 -
邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露仔鼠阴茎3-磷酸甘油醛脱氢酶表达差异的研究
目的 探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)在SD大鼠尿道下裂发生中的作用机制.方法 SD大鼠妊娠14～18天,邻苯二甲酸二丁酯(DBP)按800 mg/(kg·d)染毒孕鼠,妊娠19天取出胚胎大鼠取阴茎,提取蛋白,比较尿道下裂仔鼠与正常仔鼠阴茎组织中GAPDH的差异.结果 GAPDH在尿道下裂仔鼠阴茎中的表达量明显高于正常仔鼠,GAPDH主要在阴茎上皮细胞中表达.结论 GAPDH可能通过抑制DNA合成和细胞增生发挥生长抑制功能,可能在尿道沟融合障碍过程中起关键作用.
关键词： 邻苯二甲酸二丁酯 尿道下裂 阴茎 3-磷酸甘油醛脱氢酶 大鼠 -
细胞内铁沉积对 PC12细胞凋亡及表达3-磷酸甘油醛脱氢酶的影响
目的：铁是重要的金属元素，参与了各种生命活动。文中探讨细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡的影响，及其对3-磷酸甘油醛脱氢酶（ glyceraldehy de-3-phospha te dehydrog enase， GAPDH）表达的影响。方法实验分为对照组、50μmol／L FeCl3组、100μmol／L FeCl3组、500μmol／L FeCl3组。以FeCl3与PC12细胞共育，建立体外铁沉积于细胞模型，CCK-8检测细胞增殖生长能力；TUNEL法观察细胞凋亡情况；荧光定量PCR测定GAPDH基因mRNA表达；Western blot测定GAPDH蛋白的表达情况；免疫荧光法检测细胞核内GAPDH表达。结果 CCK-8检测结果显示，与对照组的细胞增殖率（100％）比较，50μmol／L FeCl3组增殖率[（77．13±3．9）％]下降，但差异无统计学意义（P＞0．05）；100μmol／L FeCl3组、500μmol／L FeCl3组增殖率[（66．19±3．37）％、（13．84±0．43）％]明显下降（P＜0．05）。荧光定量PCR检测GAPDH mRNA表达显示，与对照组GAPDH mRNA表达量（1．00±0．00）相比，50μmol／L FeCl3组表达量升高（1．42±0．03），但差异无统计学意义（P＞0．05），100μmol／L FeCl3组、500μmol／L FeCl3组表达量（1．93±0．07、2．33±0．15）明显升高（P＜0．05）。与对照组GAPDH蛋白表达（1．00±0．00）比较，50μmol／L FeCl3组表达（0．94±0．11）下降（ P＞0．05），50μmol／L FeCl3组、100μmol／L FeCl3组表达（1．45±0．13、1．79±0．07）明显升高（P＜0．05）。免疫荧光结果显示，铁沉积后，细胞GAPDH发生亚细胞定位改变，由细胞浆转移至细胞核，发生核聚集现象。结论铁沉积于PC12细胞致细胞凋亡增加，其原因与核内GAPDH表达增强有关。
关键词： 铁 3-磷酸甘油醛脱氢酶 细胞凋亡 -
肺癌患者预后与3-磷酸甘油醛脱氢酶高表达的关系
目的 探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)在肺癌中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测201例肺癌组织中GAPDH的表达,探讨其表达与临床病理特征及预后的关系.结果 GAPDH在鳞癌、腺癌、大细胞癌及小细胞癌中的表达率分别为81.3％、44.4％、64.7％、71.4％,组内比较差异有统计学意义(P＜0.01).GAPDH表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析表明GAPDH表达、组织学类型、分化程度、淋巴结转移及TNM分期与肺癌患者的预后明显相关(P＜0.05)；Cox生存分析表明GAPDH表达、组织学类型、分化程度及TNM分期可作为肺癌患者预后评估的独立因素.结论 GAPDH表达与肺癌患者的预后密切相关.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 肺肿瘤 预后
