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3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)动力学方法的初步研究
目的 建立一种简便、快捷、准确的GAPD的检测方法,为以后的临床推广奠定基础.方法 以三乙醇胺作为缓冲液(PH为7.4),1,3-二磷酸甘油酸为底物,偶联3-磷酸甘油酸激酶,还原型辅酶Ⅰ(NADH)被氧化成氧化型辅酶Ⅰ (NAD+),在波长340nm处检测吸光度的变化值,在一定范围内,吸光度的下降与GAPD的活性成正比,间接地计算出GAPD的活性.结果 本测定方法的适PH为7.4,米氏常数(Km)值为6.3×10 - 4mmoL/L,适基质浓度为0.007mmoL/L,批内、批间变异系数为1.60％、1.94％,回收率为96.6％.在0-140U/L范围内线性关系良好,参考值的范围是4-28U/L(逆向法).结论 本法能够准确快速的测定GAPD的活性,是用各种生化自动分析仪.
关键词： 3-磷酸甘油醛脱氢酶 动力学方法 自动化分析 -
关键词：
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乳胶增强免疫抑制法测定HbAlc的实验研究
目的 评价全自动生化分析仪乳胶增强免疫抑制法测定糖化血红蛋白(HbAlc)的可靠性,并与常规方法(微柱法)作相关比较.方法 采用乳胶增强免疫抑制法测定糖化血红蛋白,同时用高铁血红蛋白法测定总血红蛋白,然后计算出糖化血红蛋白的百分比.结果 该方法的批内和批阅CV<4.3%,在3.1%～20.0%范围内线性良好.与BioSystems(Spain)公司的微柱法试剂进行方法学比较,差异无显著性(n=220,Y=1.0X-0.32,r=0.9756,P>0.05),两者有很好的相关性.且高浓度的尿素、血脂、胆红素和血糖对该法测定无干扰,红细胞压积比从30%到100%也不影响HbAlc的测定.结论 按照美国糖尿病学会(CLIA,88)要求的允许误差标准,乳胶增强免疫抑制法测定糖化血红蛋白的结果符合临床对糖尿病患者的治疗监测要求,且该方法能进行自动化分析,具有快速、准确、简便等优点,可广泛推广使用.
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糖化血红蛋白直接酶法测定自动化分析的应用
糖尿病是一种多病因的代谢疾病,特点是慢性高血糖,伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱,可导致不同脏器的(长期)损伤,功能障碍和衰竭.监测血糖水平,对糖尿病的诊治是非常重要的,监测结果可用于评价治疗效果,调节饮食、活动和治疗,以达到好的血糖控制效果.血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息,但无法评价一段时期内的血糖平均水平.糖化血红蛋白(HbA1c)的测定解决了这一问题,进一步完善了糖尿病的实验室监测手段,是长期监测糖尿病有用的方法[1],它可以反应糖尿病患者近2～3个月的血糖平均水平,对糖尿病患者的监测管理是一个很好的指标.
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自动化测定血清钙的甲基百里酚蓝比色法
目的探讨血清钙的甲基百里酚蓝(MTB)比色法自动化测定方法,并评价其相关技术指标.方法在OLYMPUS AU 640型全动生化分析仪上分别用MTB法、邻甲酚酞络合酮(OCPC)比色法[1]和偶氮胂Ⅲ(ASAⅢ)比色法进行血清钙的自动化分析,同时用EDTA滴定法手工测定血清钙,并将结果做统计学处理.结果血清钙MTB自动化测定的灵敏度为1 mmol/L L＝0.1 697 A;批内误差＜2.0%,批间误差＜4%.血清钙含量在0.21～7.2 mmol/L内线性良好(r＝0.997),平均回收率为100.7%.与EDTA滴定法的相关系数为0.9 787,P＞0.05.结论血清钙的MTB自动分析法具有较高的精密度和灵敏度,线性范围完全可以满足临床检测要求,测定结果与手工滴定法有很好的可比性,可以使用滴定法的正常参考值.
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尿常规检验自动分析方法的探讨
尿常规包括化学定性和有形成份检验,现分别由尿化学分析仪和尿沉渣分析仪完成[1-3].本文探讨将两者联合实现尿常规自动化分析.1 对象与方法1.1 对象尿常规标本,未分性别和年龄,即时留取.分类为:泌尿感染、镜下血尿(肾性血尿、非肾性血尿)标本.
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双试剂酶速率法测定血清同型半胱氨酸及临床应用
目前,同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的测定方法有很多种,参考法是高效液相色谱法(HPLC),但是其操作复杂,耗时且费用较高;离子色谱法与毛细管电泳法,主要用于实验研究,临床上较少使用;酶联免疫分析法(EIA)是临床上测定同型半胱氨酸水平的常用方法,特点是操作方便,快捷,重复性好,但是大部分操作仍需要手工操作,比较耗时,不适合临床大批量标本同时测定;目前,临床上常用的是荧光偏振免疫法,虽可实现自动化分析,但需专门仪器,且试剂昂贵.
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鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨
目的 建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)自动化分析的方法.方法 在磷酸盐缓冲液(pH值7.2)条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶偶联反应,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH+H+)被氧化为氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),340 nm处测定吸光度(A)变化值,A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系,间接求出OCT的活性.结果 本法适pH值为7.2,适底物浓度为2.0 mmol/L.批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.80%、4.08%.米氏常数(Km)值为0.16 mmol/L.回收率达91.56%.在320 U/L内线性良好.参考范围为0～18 U/L.结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性,适用于各类全自动生化分析仪.
关键词： 鸟氨酸氨基甲酰转移酶 速率法 自动化分析 -
雅培ARCHITECT ci8200全自动生化免疫分析仪FlexRate法检测酶活性评价
目的 评价雅培ARCHITECT ci8200全自动生化免疫分析仪启动FlexRate法检测超高酶活性样本的可靠性.方法 用雅培原装配套试剂和国产利德曼试剂分别以FlexRate法测定丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、淀粉酶(AMY)5种常用酶的重复性、线性范围,与其他仪器作方法学对比.结果 5种酶用雅培试剂检测批内变异系数(CV):常规法为0.48%～1.06%,FlexRate法为0.23%～0.48%;利德曼试剂检测批内CV:常规法为0.63%～1.14%,FlexRate法为0.21%～0.68%.仪器启用FlexRate功能,ALT、AST、ALP、GGT、AMY的可报告范围分别至少延伸至3 896 U/L、3 324 U/L、6 530 U/L、6 872 U/L、8 972 U/L.2种试剂的FlexRate法与贝克曼LX20比较有良好的相关性,经同一酶校准品校正后5种酶的系统误差均＜5%.结论 以FlexRate法在测定超高酶活性样本时,结果可靠,避免假阴性错误,提高工作效率,同时适用于原装配套及国产试剂.
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2种糖化血清蛋白自动分析法评价
目的对酶法和硝基四氮唑盐(NBT)法测定糖化血清蛋白的自动化分析法进行评价.方法分别使用Genzyme公司酶法试剂盒和Roche公司NBT试剂盒,在SYNCHRON CX9全自动生化分析仪上建立自动化分析程序,评价2种方法的重复性、线性范围、回收率及相关性.结果重复性:酶法批内和批间变异系数(CV)分别为0.65%～0.98%和1.98%～2.84%,NBT法分别为1.11%～1.26%和2.73%～3.15%.线性范围:酶法30～1 500 μmol/L,NBT法30～1 000 μmol/L.回收率:酶法99.7%～102.4%,NBT法99.1%～103.2%.灵敏度(A/100 μmol/L):酶法0.018 2,NBT法0.025 9.相关性:YNBT法=1.003 6X酶法+46.3,r=0.977 6.正常参考范围(±2s):酶法123.4～238.2 μmol/L、NBT法198.2～284.6 μmol/L.结论 2种方法均具有较高的精密度和准确度,测定结果呈直线正相关,应用时必须使用各自的参考范围.
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血清β-N-乙酰氨基己糖苷酶自动分析法改进
目的对血清β-N乙酰氨基己糖苷酶总活性自动分析法进行改进,使其整个试验过程实现全自动.方法利用SYNCHRON CX9 ALX全自动生化分析仪的操作功能,对原法的试验过程、试验条件、测定参数等重新设计,并对本法进行评价.结果本法的检测波长为410/520 nm,酶促反应时间8.2667 min,色原PNP在410/520 nm 下的毫摩尔吸光系数为18.5,线性达800U/L,批内CV为0.49%～2.21%,批间CV为0.69%～2.93%,x±2s参考范围为7.58～28.46 U/L.本法无须另做样品空白,从样品上机到结果打印一气呵成.结论本法不但简便快捷,真正实现了全自动,而且精密度及线性优于原法.
关键词： β-N-乙酰氨基己糖苷酶 自动化分析 -
精液自动化分析中视频参数的设置
精液自动化分析仪能够快速、准确地对精液作出多项参数的测定,给临床提供了更为直观的参考依据.视频参数的设置对精子数检测的影响较大,本文就如何进行视频参数的设置作一讨论.
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免疫凝集法测定糖化血红蛋白
目的:对免疫凝集法测定糖化血红蛋白(HbAlc)进行临床应用评价.方法:采用免疫凝集法测定糖化血红蛋白,同时用高铁血红蛋白法测定总血红蛋白,然后计算出糖化血红蛋白的百分比.结果:该方法批内、批间精密度在5%以内;同时用微柱层析法测定40份标本,两者有正相关性,回归方程是Y=1.032X-0.436,r=0.954,P<0.01;两份混合标本回收率为98.7%和100.9%;甘油三脂、总胆红素、血红蛋白分别为8mmol/L、200μmol/L、60g/L时对本法无明显干扰.结论:该方法可用末梢血测定且不受饮食的影响,大的优点是能进行自动化分析,因此具有快速、准确、重复性好、易于推广等特点.
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373名教师白细胞分类特征分析
全血细胞血液自动化分析是医院健康体检中的常规检查项目,而白细胞分类计数是其中关键的检测项目.Beckman-Coulter LH750全自动血细胞分析仪采用电阻抗、高频传导和激光散射法(VCS)技术将白细胞分为中性粒细胞(NE)、淋巴细胞(LY)、嗜酸性粒细胞(EO)、嗜碱性粒细胞(BA)和单核细胞(MO).笔者综合373名教师血液自动化分析白细胞分类的结果,与129名非教师职业的健康体检人群白细胞分类结果进行统计学比较,旨在探讨教师职业人群的白细胞分类特征,为临床提供参考.
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尿液自动化分析复检规则的验证
目的：对实验室制定的AX-4280尿干化学分析仪和UF-500i尿沉渣分析仪联合检测尿常规的复检规则进行验证；方法使用AX-4280尿干化学分析仪和UF-500i尿沉渣分析仪对1651例尿液标本进行联合检测，同时对每份标本进行离心镜检。以镜检结果为标准，确定各项设定的镜检规则的真阳性率、假阳性率、真阴性率和假阴性率。结果根据实验室制定三条复检规则，以镜检结果为标准，1651例尿液标本中，无需复检标本共1169例，需复检标本共482例，复检率为29.2%，其中无需复检标本WBC符合率为91.02%，RBC符合率为83.07%，CAST符合率为99.49%；另外，阴性标本共487例，其中假阴性有6例，假阴性率为1.23%，其中WBC假阴性有5例，RBC假阴性有1例。结论本实验室制定的尿常规复检规则可以适用于临床。
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血清5'-核苷酸酶酶法测定的实验研究
目的对血清5'-核苷酸酶(5'-NT)酶法测定的原理及自动化分析法之精密性、准确性等内容进行较深入的探讨,为其临床应用提供方法学支持.方法使用浙江东瓯公司5'-NT酶法试剂盒在SYNCHRON CX9全自动生化分析仪上建立自动化分析程序,并对其检测时间、精密性、准确性、线性等内容进行测定.结果本法λmax=510nm,开始检测时间定为419s(739s-320s),结束检测时间定为515s(835s-320s).批内和批间CV(%)分别为1.98～2.52和4.53～4.92,线性范围达0～250U/L,回收率(%)为98.7～102.3,正常参考范围(x±2s)为3.66～10.5 U/L.结论酶法测定5'-NT简便快捷、结果准确可靠,是目前5'-NT测定较为理想的方法.
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尿沉渣自动化分析研究进展
尿沉渣是指尿液排出体外经离心沉淀,在显微镜下看到的有形成分.尿沉渣检查可以弥补尿液理、化检查不足造成的漏诊,可以了解泌尿系统各部位的变化,对辅助泌尿系统疾病的定位诊断、鉴别诊断及预后判定等有重要意义.尿沉渣检查有"体外肾活检"之称[1].尿沉渣自动化分析[2]的研究由来己久,但难度较大.
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尿液有形成分分析的研究进展与临床应用
尿液分析是临床常用的检验技术之一,不仅对泌尿系统疾病的诊断、疗效观察有重要意义,对于安全用药的监测和健康状态的初评也很有帮助,因此,尿液分析早已列为三大常规检查的内容.尿液分析包括物理检查、化学分析和尿液有形成分分析.
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大鼠运动行为的自动化检测与分类
目的探讨大鼠运动行为的自动化检测与评估方法.方法利用计算机自动化技术对大鼠运动行为进行记录,并对记录数据进行统计整理,找出具有代表意义重复性高的评估其运动行为特征的指标.结果通过对大鼠各运动速率百分比加权求和得出实验动物运动水平值(M)可以反映其整体运动行为状况,根据运动速率可将大鼠在特定时间段内的活动区分为四种类型,实验动物入陌生环境头25分钟四种运动类型所占份额的百分比数值有较好的重复性.结论在本室自行研制的实验动物运动行为自动化检测系统中,运动水平值(M)和头25分钟四种运动类型所占百分比值可作为衡量大鼠运动特征的重要指标.
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免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白A1c
目的评价糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的免疫抑制比浊测定法.方法通过重复试验、回收试验、干扰试验、方法比较实验、线性关系的检测评价免疫抑制比浊法,测定正常人和糖尿病人HbA1c标本共90例,并与微柱法进行比较.结果正常线性范围2%～20%,批内变异系数(CV)值正常人和糖尿病人1.09%和1.30%,日间CV值2.91%和2.65%.回收率90.9%～101.2%.胆红素248μmol·L-1、甘油三酯8.8mmol·L-1、抗坏血酸50mg·dl-1时对测定无明显干扰.与微柱法比较,Y=0.9505X+0.0305(r=0.9740).正常组HbA1c为6.85%±0.37%与糖尿病组10.21%±1.92%相比有显著差异(P＜0.01).结论免疫抑制比浊法测定HbA1c具有较高稳定性和特异性,可作为自动化检测HbA1c的首选方法.
