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M-CSF诱导MnSOD表达减轻RAW264.7细胞氧化损伤
为探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对单核巨噬细胞氧化损伤的保护作用，以富含M-CSF的小鼠L929细胞条件培养液(L929-CM)作为M-CSF来源，以小鼠巨噬细胞系RAW264.7为模型，从形态学上观察了M-CSF对叔丁基氢过氧化物(tbOOH)引起的RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用；并采用酶活性测定、TR-PCR等方法，研究了M-CSF对RAW264.7细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及基因表达的影响。结果发现，M-CSF可以减轻tbOOH对RAW264.7细胞的氧化损伤；M-CSF可以提高细胞总SOD活性；M-CSF还可增强RAW264.7细胞MnSOD mRNA的表达，且这一诱导作用可被放线菌素D(actinomycin D)阻断。提示M-CSF可通过诱导细胞MnSOD表达而减轻RAW264.7细胞的氧化损伤。
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川芎中抑制脂多糖诱导的RAW264.7和BV2细胞系NO生成的新的丁苯酞衍生物——川芎螺内酯
目的 研究川芎95％乙醇提取物的化学成分及其抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠小胶质细胞BV2一氧化氮(NO)生成的生物学活性.方法 采用硅胶、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构.采用LPS离体诱导RAW264.7和BV2细胞系NO生成模型,研究化合物对NO生成的抑制活性.结果 从川芎95％乙醇提取物中分离出3个丁苯酞衍生物,分别鉴定为Z-3',8',3'a,7'a-四氢-6,3',7,7'a–二聚藁本内酯-8'-酮(1)、Z,Z'-3.3'a,7.7'a-二聚藁本内酯(2)和川芎螺内酯(3).对LPS诱导的细胞NO生成抑制作用,在RAW264.7细胞模型,化合物1～3和阳性对照药吲哚美辛的半数抑制浓度(IC50)分别为(31.60±2.62)、(21.20±0.61)、(30.12±2.90)、(54.62±7.53)μmol/L;在BV2细胞模型,化合物1～3和阳性对照药姜黄素的IC50分别为(21.99±4.40)、(15.43±1.34)、(12.20±3.40)、(10.58±1.41)μmol/L.结论 化合物3为新化合物,命名为川芎螺内酯.生物活性实验结果提示化合物1～3可能具有潜在的抗炎作用.
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M-CSF对RAW264.7细胞抗氧化系统的影响
目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)抗单核/巨噬细胞氧化损伤的作用机理,揭示M-CSF对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞抗氧化系统影响.方法:以L929细胞条件培养液为M-CSF来源,采用酶活性测定等生化测定方法,考察M-CSF细胞内还原型谷胱甘肽含量、脂质过氧化物含量、过氧化氢酶活性、谷胱甘肽还原酶活性等检测指标的影响.结果:M-CSF处理可提高RAW 264.7细胞内的过氧化氢酶活性及还原型谷胱甘肽含量,降低脂质过氧化物含量,且使细胞在tbOOH攻击下保持较高的抗氧化水平.结论:M-CSF可能通过改善单核巨噬细胞的氧化还原代谢而减轻细胞的过氧化损伤.
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子 RAW264.7细胞系 氧化应激 抗氧化酶 -
含M-CSF条件培养液对RAW264.7细胞产生NO的影响*
巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是一种单核吞噬细胞特异性的生长因子.近年来的研究表明,M-CSF可以增强巨噬细胞杀伤细菌等病原体及肿瘤细胞的能力,对抗感染及抗肿瘤具有重要意义.一氧化氮(NO)是可由单核吞噬细胞产生的一种自由基,对病原体及肿瘤细胞同样具有杀伤作用.为探讨M-CSF的抗感染、肿瘤作用是否与其刺激单核吞噬细胞产生NO有关,我们以L929细胞条件培养液(L929-CM)作为M-CSF来源,观察了M-CSF对巨噬细胞系RAW264.7细胞NO产生的影响.结果发现,L929-CM可以刺激RAW264.7细胞NO的产生;且RT-PCR显示L929-CM处理使RAW264.7细胞诱导型NO合酶(iNOS)表达增加.
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子 一氧化氮 RAW264.7细胞系 巨噬细胞 -
β-葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响
目的: 探讨β-葡聚糖对RAW264.7细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响.方法: 中性红比色法检测细胞生长, 酚试剂法检测细胞蛋白质合成, 动态检测β-葡聚糖对胞内游离钙和cAMP浓度的影响.结果: 微量β-葡聚糖可促进细胞生长及蛋白质合成;β-葡聚糖作用后3～5 min使胞内游离钙浓度升高,作用1 min 后使cAMP浓度升高, 并保持较高水平.结论: 胞内游离钙及cAMP是β-葡聚糖对RAW264.7细胞作用过程中重要的信使分子.
关键词： β-葡聚糖 胞内游离钙 环磷酸腺苷 RAW264.7细胞系 增殖 -
牛蒡低聚果糖对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用
目的 观察牛蒡低聚果糖(BFOS)对RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用.方法 用脂多糖(LPS)处理巨噬细胞系RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用不同浓度BFOS处理.采用定量PCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合成酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)等炎性因子的表达水平,ELISA检测BFOS处理前后MCP-1、IL-6的分泌量.Western blot法检测COX-2、iNOS、κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF-κBp65)、细胞外信号调节激酶(Erk)、P38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化蛋白表达水平.结果 与对照组相比,经BFOS处理后,细胞iNOS、COX-2、MCP-1及IL-6的水平表达显著下降(P＜0.01).BFOS处理组p-IκB、p-NF-κBp65、p-Erk、p-P38、p-JNK等蛋白表达较LPS单独处理组显著下降(P＜0.01).结论 BFOS对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型具有抗炎作用.
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鸡眼草乙醇提取物抗炎作用研究
目的 采用体外炎症模型研究鸡眼草乙醇提取物抗炎作用.方法 建立脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞系RAW264.7细胞体外炎症模型,使用1,5和10μg/ml三种浓度的鸡眼草乙醇提取物对其进行干预；ELISA法检测药物干预前后上清液中TNF-α、IL- 1β和IL -6的分泌量,Griess反应测定NO水平；实时荧光定量RT - PCR检测TNF -α、iNOS和COX-2的mRNA表达；Western blot法检测COX-2和HO -1的蛋白表达水平.结果 鸡眼草乙醇提取物干预后,上清液中TNF-α、IL - 1β、IL -6和NO含量与模型组相比均显著降低(P＜0.01),并存在剂量依赖关系；干预后细胞TNF -α,iNOS和COX-2的mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),也存在剂量依赖关系；鸡眼草乙醇提取物及地塞米松DM干预后COX-2蛋白水平明显降低(P＜0.01),HO -1蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),亦存在剂量依赖关系.结论 鸡眼草乙醇提取物可以下调TNF-α、IL - 113、IL -6、NO和COX-2等炎症介质的表达,同时促进HO -1的释放而发挥一定的抗炎作用.
关键词： 鸡眼草 RAW264.7细胞系 炎症介质 -
蛇莓乙醇提取物的体外抗炎机制研究
目的 研究蛇莓乙醇提取物在体外的抗炎作用,初步探讨其抗炎机制.方法 通过脂多糖(LPS)干预RAW264.7巨噬细胞系建立炎症细胞模型,ELISA法检测上清液中TNF-α、NO的分泌量,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、iNOS、血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量,免疫细胞化学法检验核因子-κB(NF-κB)的表达及分布变化.结果 蛇莓提取物干预后细胞所分泌的炎症介质(TNF-α和NO)与炎症模型组相比均显著降低(均P<0.01),并存在剂量依赖关系;实时荧光定量RT-PCR结果显示蛇莓提取物干预后细胞TNF-α、iN-OS的mRNA表达水平显著降低,HO-1的mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义,也存在剂量依赖关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平明显升高(P<0.01);免疫细胞化学法结果显示仅有LPS干预时,NF-κB表达增强且集中分布在细胞核,而药物干预时,NF-κB多分布在胞质.结论 蛇莓提取物通过抑制NF-κB的激活,下调巨噬细胞表达炎症介质,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.
关键词： 蛇莓 RAW264.7细胞系 核因子-κB 炎症介质 血红素氧合酶-1 -
氧化剂对RAW264.7细胞诱导型一氧化氮
为揭示氧化应激对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响，采用逆转录多聚酶链反应技术，观察氧化剂叔丁基氢过氧化物对RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。结果发现，1.5×10-4mol/L 叔丁基氢过氧化物能够诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达，放线菌素D、环己酰亚胺及acetovanilone均可减弱叔丁基氢过氧化物对RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶表达的诱导。另外，叔丁基氢过氧化物对RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶表达的诱导作用还可被核因子-κB抑制剂PDTC减弱。可见，氧化剂可诱导RAW24.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达，且作用在转录水平，该过程中有新的蛋白质合成及内源性活性氧产生的参与，转录因子核因子-κB的激活也可能与该诱导过程有关。
关键词： 一氧化氮合酶 诱导型 氧化应激 RAW264.7细胞系 基因表达 -
草木犀正丁醇提取物对小鼠巨噬细胞促炎介质的影响
目的 研究草木犀正丁醇提取物在体外的抗炎作用.方法 通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,使用1、5和10 mg/L 3种浓度的草木犀正丁醇提取物对其进行干预.ELISA法检测药物干预前后上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌量,Griess反应测定NO水平;实时荧光定量RT-PCR检测TNF-α、iNOS和COX-2的mRNA表达;Western blot法检测COX-2的蛋白表达水平. 结果 草木犀正丁醇提取物干预后,上清中TNF-α、IL-1 β、IL-6和NO含量与模型组相比均显著降低(P<0.01),并存在剂量依赖关系;干预后细胞TNF-α,iNOS和COX-2的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),也存在剂量依赖关系;草木犀正丁醇提取物及DM干预后COX-2蛋白水平明显降低(P<0.01).结论 草木犀正丁醇提取物可以下调TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和COX-2等炎症介质的表达,该药物体外抗炎作用可能通过抑制这些炎症介质而产生.
关键词： 草木犀 正丁醇 RAW264.7细胞系 炎症介质 -
臭苜蓿根提取物对脂多糖诱导急性炎症中核因子-κB表达的影响
目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在LPS诱导急性炎症中的表达及臭苜蓿根提取物的干预作用.方法 通过脂多糖干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化.结果 免疫细胞化学法结果 显示干预时,巨噬细胞胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核且表达增强.臭苜蓿根提取物干预时NF-κB多分布在胞质未被激活.结论 臭苜蓿根提取物通过抑制NF-κB的激活发挥抗炎作用.
关键词： 臭苜蓿根提取物 炎症 RAW264.7细胞系 核因子-κB -
M-CSF基因转染对RAW264.7细胞氧化损伤的影响
目的 揭示巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对单核／巨噬细胞氧化损伤的影响。方法 采用真核细胞基因导入的脂质体转染方法，建立了两株M-CSF基因过表达的RAW264.7细胞系，并观察了氧化剂叔丁基氢过氧化物(tbOOH)对该RAW264.7细胞的氧化损伤作用。结果 用M-CSF基因转染的RAW264.7细胞具有较强的分泌有活性M-CSF的能力，而与正常RAW264 7细胞相比，M-CSF过表达的RAW264.7细胞更易受到氧化剂的损伤。结论 在一定条件下，M-CSF可促进巨噬细胞的氧化损伤。
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子 氧化应激 RAW264.7细胞系 基因转染 -
M-CSF对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用
目的揭示巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是否能保护单核巨噬细胞免受过氧化损伤.方法以L929细胞条件培养液(L929-CM)作为M-CSF来源,以细胞显微形态、细胞活力等指标,观察了M-CSF对叔丁基氢过氧化物(tbOOH)诱导的巨噬细胞系RAW264.7细胞氧化损伤的影响.结果tbOOH可以引起RAW264.7细胞的损伤,表现为细胞皱缩、伪足消失、细胞活力降低,且损伤随tbOOH作用浓度的增加而明显;而M-CSF可以减轻tbOOH诱发的RAW264.7细胞氧化损伤.结论M-CSF对单核巨噬细胞的氧化损伤具有保护作用.
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子 氧化应激 动脉粥样硬化 RAW264.7细胞系 -
白细胞介素-24对破骨细胞功能及分化的影响
目的：研究白细胞介素-24（interleukin-24，IL-24）对破骨细胞分化及功能的影响。方法：从新生24 h内大鼠四肢长骨分离鉴定破骨细胞；确定AdCMV-EGFP的佳感染复数（MOI），分别转染AdCMV-EGFP和AdCMV-IL-24，培养在骨片上，测定骨吸收陷窝的面积；real-time PCR方法检测在诱导条件下RAW264．7细胞转染AdCMV-IL-24后，破骨细胞相关因子的表达。结果：破骨细胞胞内可见2个以上的细胞核，TRAP染色呈紫红色；MOI＝400为佳转染效率；转染AdCMV-IL24的破骨细胞骨吸收陷窝面积比转染AdCMV-EGFP的细胞大（P＜0．05）；在诱导条件下RAW264．7细胞转染IL-24后，破骨细胞的相关基因NFATc1、CTSK和TRAP表达发生变化。结论：IL-24能促进破骨细胞的分化，提高破骨细胞的骨吸收功能。
关键词： 破骨细胞 RAW264.7细胞系 骨吸收 白细胞介素24
