免疫学杂志
Immunological Journal 면역학잡지
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siRNA介导的IBP表达抑制对 T细胞凋亡的影响
目的 研究IBP表达抑制后对T细胞凋亡产生的影响.方法 构建IBP siRNA稳定表达及阴性对照载体,脂质体法转染Jurkat T细胞,G418筛选稳定转染细胞株,用anti-CD3和CD28 mAb刺激介导的TCR信号方式作用于稳定转染细胞后,以3H-TdR掺入实验检测细胞增殖,Annexin-v/PI双参数法经流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TCR信号刺激下,阴性对照组细胞的3H-TdR掺入量在24h时下降为未刺激对照组的67%,随时间延长其下降更显著,且24h发生明显凋亡,凋亡率为21.96%;IBP siRNA表达载体转染细胞在不同时相点的增殖均不受影响,24h凋亡率仅为2.12%,比阴性对照组细胞显著降低.结论 IBP缺失能使TCR信号刺激下的细胞激活后凋亡受到抑制,提示IBP可能参与T细胞免疫自稳状态的调节.
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青藤碱促进树突状细胞分化抑制其成熟
目的 探讨青藤碱对树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化发育、成熟、抗原递呈及刺激T细胞活化能力的影响.方法 DC体外培养时,青藤碱处理,观察细胞生长情况,流式检测细胞表型及抗原内吞能力,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞活化的能力,E(I)ISA检测细胞因子分泌.结果 与对照组相比,青藤碱处理DCCD1a表达上调而CD14下调,IL-12分泌减少,共刺激分子表达减少,同种T细胞刺激活性降低.结论 合适剂量的青藤碱能刺激单核细胞分化为不成熟DC但能抑制其进一步成熟.
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健康青年人HCMV特异性CD8+T细胞频率和表型分析
目的 利用负载pp65495.503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型.方法 以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪对样品进行三色荧光分析.结果 健康中国青年人外周血中存在高频率的pp65495-503特异性CD8+T细胞,占CD8+T细胞的百分率为0.14～6.84%(均数2.45%);表型分析显示其CD28+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为为32.5%(±21.7%)和58.58%(±10.4%)(P＜0.001);CD57+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为55.8%(±18.4%)和27.4%(±8.3%)(P＜0.001).同时,对三例健康青年人CD8+T细胞上多种表面分子的详细分析显示,pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞有不同比率的细胞表达CD62L、CD45RO、CD38和CD27,而且还有一定比例的细胞表达CD45RA,但不表达活化抗原CD69分子.结论 青年中国人外周血中存在高频率的HCMV特异性CD8+T细胞,这些细胞的表型存在高度异质性,可能是处于不同分化阶段的记忆和效应细胞群体组成.
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轮状病毒不同毒株感染宿主细胞的感染效力研究
目的 比较轮状病毒Wa株和SA11株对MA104细胞的感染及复制能力,研究不同毒株对宿主细胞的感染效力.方法 差速离心浓缩病毒颗粒,FFA法检测病毒滴度,流式细胞术检测病毒对MA104细胞的感染效率,ELISA检测不同病毒颗粒浓度,并比较2毒株间异同.结果 Wa株感染效率随病毒量的变化明显快于SA11株,极限感染效率也较SA11高;2毒株病毒产量均随感染病毒用量增加而明显升高,而感染了SA11细胞的平均病毒生成能力显著高于感染Wa株的细胞.结论 轮状病毒Wa株与SA11株感染细胞效力差异显著(P＜0.05),为进一步研究轮状病毒感染宿主细胞及与之相互作用特点提供了实验依据.
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人脐血源性MSCs的免疫调节作用
目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.
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Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈
目的 建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响.方法 首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC Ⅰ类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化.结果 酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHCⅠ类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立.在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降.结论 成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础.
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融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用
目的 研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用.方法 采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化.结果 NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组.结论 FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力.
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HIV gag DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞免疫应答的研究
目的 研究小鼠注射HIV gag DNA疫苗后的抗原特异性细胞免疫应答.方法 C57BL/6小鼠以初免/加强的策略经肌肉注射HIV gag DNA疫苗,一周后获取其脾与肺的单个细胞,体外经Gag抗原多肽刺激后,采用ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测IFN-γ分泌细胞的频率,流式细胞仪分析特异性T细胞的亚群.结果 经Gag多肽刺激后,加强免疫组IFN-γ产生的总体水平和分泌细胞频率均高于对照组及初次免疫组.HIV gag DNA疫苗可同时诱导产生Gag-特异性CD4+和CD8+T细胞.结论 HIV gagDNA疫苗免疫小鼠后可诱导抗原特异性效应性T细胞应答.
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人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用
目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4+T细胞百分比增高,CD8+T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应.
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RNA干扰体外抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究
目的 针对乙型肝炎病毒(HBV)prec/c区构建shRNA表达载体,观察shRNA表达载体对HBV抗原表达的抑制作用,为运用RNA干扰(RNAi)技术治疗乙型肝炎奠定基础.方法 运用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切,测序鉴定确认后,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染Hela细胞,并于转染后72 h,用微粒子酶免疫实验(MEIA)分别检测细胞上清液和细胞裂解液中HBsAg和HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/c mRNA的转录情况;分析shRNA表达载体对HBe/HBs抗原表达的抑制情况.结果 成功构建了针对HBV prec/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5、psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC;筛选到对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体,同时其对HBsAg的表达有促进作用;psiHBV5和psiHBV6对HBeAg的抑制作用相对较弱,其对HBsAg的表达也有不同程度的促进作用;无关干扰对照psiC对HBV两种抗原的表达均无显著抑制作用.结论 成功构建带U6启动子的shRNA表达载体并初步筛选到可显著抑制HBeAg表达的psiHBV4;本研究设计的3个靶向序列中,只有一个序列有大约70%的抑制率,而另外两个序列的抑制率相对较小,说明RNA干扰作用有较强的序列依赖性;无关干扰序列psiC几乎无干扰作用,说明siRNA产生的干扰作用具有高度的特异性.以上结果为应用RNAi治疗乙型肝炎奠定了一定的基础.
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抗人DR5单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的诱导凋亡作用
目的 观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体nDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用.方法 制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞仪检测mDRA-6对HL-60细胞凋亡率的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果 mDRA-6导致HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对HL-60细胞具有明显的杀伤作用,24ng/mL mDRA-6作用HL-60细胞10 h,细胞死亡率达21.2%;1μg/mL的mDRA-6作用8 h,可使HL-60细胞死亡44.1%;Annexin V及PI双染显示,10μg/mL mDRA-6作用2 h,HL-60细胞的凋亡率达48.1%;20μg/mLmDRA-6作用HL-60细胞3 h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的"梯形"条带.结论 抗DR5单克隆抗体mDRA-6具有诱导HL-60细胞凋亡作用.
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肽抗生素hPAB-β在毕赤酵母中的表达与活性鉴定
目的 构建表达人源肽抗生素hPAB-β的重组毕赤酵母,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法 用PCR及引物延伸法得到天然及优化的hPAB-β序列,克隆入pPIC9K质粒,转化DH5α大肠埃希菌,用酶切和核苷酸测序鉴定.重组质粒经SalⅠ酶线性化,整合入毕赤酵母GS115中,在DNA,mRNA及蛋白水平鉴定阳性重组子.结果 构建的含天然及优化序列的重组质粒酶切均可得到相应大小的插入片段,与预期相符,测序结果表明序列和阅读框均正确.线性化的重组质粒转入GS115后,得到7个不同的高拷贝阳性转化子,均能表达重组肽并具有良好的抑菌活性.结论 本研究成功构建含天然及优化hPAB-β序列的重组毕赤酵母工程菌,能够用于肽抗生素hPAB-β的制备.
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DNA免疫激发针对肾母细胞瘤CTL效应初步研究
目的 将鼠源肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的针对肾母细胞瘤CTL效应.方法 人工合成WT1基因一段序列,含有HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸.构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y.免疫Balb/c小鼠,通过ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8;将分离的脾淋巴细胞与小鼠肾母细胞瘤细胞共培养,检测其体外溶解组织相容性抗原型别一致的外源性靶细胞能力.结果 构建的重组质粒经测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(P＜0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能.结论 WT1基因的DNA疫苗初步研究具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路.
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人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 N端片段的原核表达
目的 在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段.方法 应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性.结果 从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60 000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合.结论 获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件.
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贝那普利对环孢素A慢性肾毒性的防护作用
目的 探讨贝那普利对环孢素A(CsA)慢性肾毒性的防护机理.方法 选雄性大鼠30只,随机分为3组,3组均给予低盐饮食.A组为CsA溶剂(橄榄油)对照组;B组为CsA组;C组为CsA加贝那普利.观察给药28 d后各组大鼠血浆肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及醛固酮(ALD)水平的变化,并对肾组织进行组织学观察和免疫组织化学检测,观察贝那普利对上述改变的防护作用.结果 ①CsA可引起大鼠血浆PRA、AngⅡ水平明显升高,而贝那普利对大鼠PRA、AngⅡ水平的升高有明显的抑制作用;血浆醛固酮水平,A组和B组之间差异无显著性(P＞0.05),而贝那普利组醛固酮水平明显下降.②CsA能导致肾间质纤维化和小动脉病变,诱导大鼠肾内转化生长因子-β1(TGF-β1)的高表达,贝那普利能减轻上述改变.结论 CsA能激活肾素-血管紧张素系统(RAS),使大鼠肾内TGF-β1高表达;贝那普利能阻断RAS系统,尤其是能降低AngⅡ水平,减轻CsA引起的肾间质纤维化,使大鼠肾内TGF-β1表达下降.
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铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核表达载体构建及其鉴定
目的 构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定.方法 采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性.结果 经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了PE38KDEL与GST的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被PE的特异性抗体所识别.结论 PE38KDEL在大肠杆菌中获得了高效的融合表达,为下一步研究其功能奠定了基础.
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卵巢癌自身抗体谱研究及应用
目的 肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体.因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱.本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原,为卵巢癌的免疫治疗提供候选靶抗原.方法 用卵巢癌组织建立了库容量达1.82×106pfu的cDNA表达文库,用卵巢癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获了阳性抗原克隆,进一步分析了其中5个克隆与48例卵巢癌48例正常人血清的反应情况.结果 获得的67个阳性克隆中,5个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外49个克隆与已知基因高度同源.BHLHB2等5个抗原克隆与卵巢癌患者和正常人血清反应阳性率分别为41.6%(14.6%)、29.2%(6.25%)、29.2%(12.5%)、31%(18.7%)、31%(6.2%).联合5个克隆诊断卵巢癌的敏感性为81%,特异性75%.结论 本研究发现的45个卵巢癌抗原可能作为卵巢癌诊断新的候选血清学标志物和免疫治疗潜在分子靶点.BHLHB2等5个克隆与卵巢癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,5个克隆联合诊断卵巢癌有较好的敏感性和特异性,其相关自身抗体可作为卵巢癌诊断的血清标志物.
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猪骨髓间充质干细胞成骨分化后SLA的表达及免疫原性研究
目的 研究猪骨髓间充质干细胞成骨分化后(osteogenic cells differentiated from mesenchymal stem cell,DOC)在IFN-γ刺激下猪白细胞抗原(swine lymphocyte antigen,SLA)基因的表达变化及对外周单个核细胞(PBMC)增殖的影响.从而了解其免疫原性.方法 以未分化的MSC为对照,采用RT-PCR技术分别检测DOC、未分化的MSC、MSC+IFN-γ组、DOC+IFN-γ的SLA基因表达情况,采用单向混合淋巴反应观察各组细胞对植物血凝素(PHA)刺激PBMC的每分钟脉冲值(CPM)变化.结果 DOC组、MSC+IFN-γ组、DOC+IFN-γ组SLA-Ⅰ(P1,P14)表达上调(P＜0.05),SLA-Ⅱ(DRA、DRB、DQA、DQB)表达明显上调(P＜0.01).并能抑制PHA刺激的PBMC增殖反应.结论 在体外实验中,DOC在IFN-γ刺激下仍具有低免疫原性,且具有免疫调节作用.
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大剂量过敏原诱导哮喘小鼠T细胞不反应性及机制研究
目的 探讨大剂量过敏原诱导哮喘小鼠T细胞不反应性及其机制.方法 采用不同浓度的过敏原在体外处理哮喘小鼠DC及T细胞,ELISA法检测DC分泌IL-10和TGF-β1以及T细胞Th1/Th2细胞因子的分泌,并分析其相关性.结果 ①在0～10 mg/mL范围内,哮喘小鼠DC分泌IL-10、TGF-β1水平随处理浓度增高而增高,正常小鼠DC各浓度处理组之间无显著差异.②在0～1 mg/mL范围内,Th2细胞因子的分泌随处理浓度增高而增高,但在10 mg/mL的OVA作用的下,IL-4、IL-5等细胞因子的分泌水平则较其他组明显降低(P＜0.05).IL-2和IFN-γ的分泌也受到明显抑制(P＜0.05).而对正常小鼠T细胞,OVA质量浓度的变化对其Th1/Th2细胞因子的分泌无影响.③Th1/Th2细胞因子水平与DC分泌的IL-10和TGF-β1水平无明显相关性.结论 大剂量过敏原(10 mg/mL的OVA)可诱导哮喘小鼠T细胞不反应性,但与DC分泌IL-10和TGF-β1水平无明显关系.
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用糖基化磷脂酰肌醇B7-1锚定肿瘤细胞膜进行免疫治疗
目的 研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗.方法 用蛋白转化法将B7-1锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL-6小鼠后,一组小鼠取脾细胞进行T细胞扩增和细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能检测,另一组小鼠进行肿瘤细胞接种试验.结果 用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后诱发了肿瘤特异性T细胞扩增和CTL.且该疫苗有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用.结论 GPI蛋白转化法为人类抗肿瘤免疫治疗提供了新的、有效的修饰肿瘤细胞膜的方法.
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缺氧诱导因子-1α和PTEN、P53在急性髓性自血病骨髓基质细胞中的表达及意义
目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和PTEN、P53在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义.方法 分离培养28例急性髓性白血病患者和22例正常对照样本骨髓基质细胞,RT-PCR检测HIF1αmRNA的表达,免疫组织化学技术检测基质细胞HIF-1α和PTEN、P53蛋白表达和分布.结果 急性髓细胞白血病(AML)组HIF-1αmRNA和蛋白表达率显著高于对照组(P＜0.05),AML组P53蛋白表达率显著高于对照组(P＜0.05),而PTEN表达率显著低于对照组(P＜0.01).HIF-1α在骨髓基质细胞的阳性表达与P53的高表达和PTEN的低表达相关联(P＜0.05).结论 HIF-1α可能是白血病异常骨髓造血微环境形成过程中的重要调控因子,HIF-1α的表达可能与PTEN和P53基因表达调控相关.
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乙型肝炎患者HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞的研究
目的 对乙肝患者尤其是慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞(CTL)的分布频率及功能状态进行研究.方法 应用多色流式分析结合HLA-A*0201限制性表位肽/五聚体复合物技术对乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL进行精确定量,应用胞内细胞因子染色技术结合流式细胞分析技术研究HBcAg18-27表位特异性CTL穿孔素,颗粒酶B,干扰素-γ的分泌水平.结果 在急性与慢性乙型肝炎患者外周血中均可测到HBcAg18-27表位特异性CTL,两者的分布频率存在显著性差异.慢性乙肝患者外周血中HBcAg18-27表位特异性CTL分泌穿孔素,颗粒酶B,干扰素的水平明显降低.结论 HBcAg18-27表位特异性CTL在乙型肝炎病毒清除中起到重要作用,慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL存在功能缺陷.
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慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化和意义
目的 观察慢性乙型肝炎感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的频率,特征性表型及与临床指标的相关性.方法 采集44例慢性乙型肝炎,29例健康人外周血,多色流式分析Treg的频率,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的频率.所有病例均经酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量及肝功能的检测.结果 慢性乙型肝炎组Treg的频率(5.02%±2.07%)显著高于正常对照组(3.35%±1.51%,P＜0.05);Foxp3在Treg上特异性表达,慢性乙型肝炎组CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的频率(2.05%±1.03%)显著高于正常对照组(1.30%±0.68%,P＜0.05);慢性乙型肝炎组Treg的频率与病毒载量呈正相关.结论 Treg在慢性乙型肝炎感染者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素.
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用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究
目的 以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒.方法 对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变.PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体.该重组质粒与PR8进行"7+1"组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞.结果 经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒.结论 利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.
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禽流感病毒血凝素H5特异性单克隆抗体的制备及ELISA捕获法的建立
目的 制备和鉴定禽流感病毒(H5N1)血凝素(H5)特异性单克隆抗体(mAb),建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.方法 以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制(HI)实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.结果 获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1:100～1:51 200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性.结论 建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断.
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免疫荧光双重染色的激光共聚焦显微镜样品制备及观察
目的 详尽介绍免疫荧光双标染色方法,为激光共聚焦显微镜观察提供理想的样品.方法 大鼠腹腔注射Brdu,40g/L多聚甲醛灌注固定,取脑组织冰冻切片,用抗GFAP多克隆抗体孵育和FITC荧光标记二抗染色,再用抗Brdu单克隆抗体孵育和Cy3荧光标记二抗染色,在激光共聚焦显微镜下连续断层扫描,图像叠加.结果 清晰可见处于增殖期(S期)细胞胞核呈红色荧光,星形胶质细胞胞质呈绿色荧光.结论 影响免疫荧光双重标记样品效果的环节和因素很多,其中重要的因素是2个一抗的搭配和协调.
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小鼠FGFR3可控性RNAi载体的构建和抑制效率验证
目的 构建小鼠成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)可控性RNAi载体及RNAi载体,并在体外验证后者效率.方法 以含有pLoxPneo基因的pBSK/U6载体为骨架,首先构建针对FGFR3的可控性RNAi载体pBSU6/FGFR3i,然后经Cre重组酶去除neo基因后得到RNAi载体FGFR3-RNAi.将FGFR3-RNAi与FGFR3表达载体分别共转染RAW264.7和HEK293T细胞株,经半定量RT-PCR和Western blot分别检测FGFR3 mRNA和蛋白表达情况.结果 成功构建针对FGFR3的可控性敲低载体和RNAi载体;FGFR3载体在细胞水平可明显降低FGFR3 mRNA的丰度及蛋白表达.结论 为进一步获得FGFR3可控性敲低的小鼠模型奠定基础.
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中国人群CTLA-4基因多态性与系统性红斑狼疮及类风湿性关节炎的相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)与类风湿性关节炎(RA)是常见的自身免疫性疾病,病因未明.研究发现,除了HLA基因的相关性以外,还可能存在其它重要的敏感基因[1].近年来发现CTLA-4基因在自身免疫性疾病发病中的作用,本文检测SLE及RA病人CTLA-4基因多态性,进一步探讨SLE及RA的发病机制.
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FcγRⅡb与狼疮性肾炎病理活动的相关性
肾脏是系统性红斑狼疮(SLE)常累及的脏器,肾小球、肾小管、肾间质和肾血管均可受累,迄今为止仍是SLE的主要致死原因之一.狼疮性肾炎(LN)的发生机制不十分清楚.FcγRⅡb为免疫球蛋白超家族成员,是低亲和力的FcγR,本研究旨在探讨LN患者肾组织中FcγRⅡb的表达及其与LN活动性的关系.
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透皮免疫的应用进展
近年在新型疫苗投递技术的研究中,透皮免疫已作为一种非注射性免疫的发展方向,已证明是一种简便、安全、有效的免疫途径.现对国外透皮免疫途径的免疫机制、免疫佐剂和在疫苗上的应用进展综述.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
