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辛伐他汀改善小鼠卵巢组织自体移植的效果
目的:探索辛伐他汀在小鼠卵巢组织自体移植中的效果和机制.方法:选择6～8周雌性ICR小鼠80只.10只小鼠制备新鲜卵巢组织(新鲜卵巢组),另取10只小鼠切除双侧卵巢组织,玻璃化冷冻(冷冻-解冻卵巢组).余下的60只小鼠切除双侧卵巢玻璃化冷冻-解冻后自体移植至背部肌肉,随机分成2组(各30只),移植后第1天开始分别以生理盐水(生理盐水组)和辛伐他汀(5 mg/kg,辛伐他汀组)灌胃至移植后第7天.2组分别在移植后第3,7,21天,每组每时间点各处死5只鼠(共处死30只),回收卵巢组织和血清.光学显微镜下观察HE染色的卵巢组织,免疫组织化学检测细胞核增殖性抗原ki67和CD34,原位末端标记法(Tunel法)计数Tunel阳性细胞数,血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)浓度,2组分别在移植后第3,7天,每组每个时间点各处死5只鼠(共处死20只)测定卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量.本实验中移植术后小鼠死亡4只,灌胃死亡2只,终剩余4只脱颈处死按动物伦理处理尸体.结果:冷冻-解冻卵巢组比新鲜卵巢组的窦卵泡数减少,Tunel阳性细胞数增加(均P<0.05).新鲜卵巢组织和冷冻-解冻卵巢组织均可见ki67表达.移植后第3,7天辛伐他汀处理组比生理盐水组原始卵泡数多、凋亡细胞数少(均P<0.05).移植后第21天卵巢组织生长良好,2组都可见窦卵泡,辛伐他汀组原始卵泡数和窦卵泡数比生理盐水组多(均P<0.05).移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织血管数比生理盐水组多(均P<0.05).辛伐他汀组在移植后第21天血清E2高于生理盐水组(P<0.05);血清FSH水平在第21天比生理盐水组低(P<0.05).移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织MDA低于生理盐水组,SOD高于生理盐水组(均P<0.05).结论:辛伐他汀通过抗氧化、促血管再生改善小鼠卵巢组织自体移植的效果.
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玻璃化冷冻技术的研究进展
玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注.该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小,操作简单等优点,能够提高冷冻复苏后的存活率和妊娠成功率.玻璃化冷冻技术在临床应用中主要受到冷冻保护剂的类型和浓度、冷冻温度、冷冻速度及冷冻承载工具等一系列因素的影响.由于冷冻对象的不同,所实施的具体方法也不尽相同.该技术目前尚未成熟,如何优化人卵母细胞、胚胎及卵巢组织的玻璃化冷冻方案仍需要进行深入的研究.
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玻璃化冷冻卵母细胞及卵巢组织研究进展
玻璃化冷冻技术近年已广泛应用于生殖领域,尤其是在女性生育力的储备方面展示其特有的优势.目前胚胎玻璃化冷冻已较成熟,并应用于临床.首次卵母细胞玻璃化冷冻的成功以及实验动物卵巢组织成功移植并获得分娩给研究带来无限希望,但目前仍处于实验阶段,研究者企图从不同角度解决难题.卵母细胞冷冻后,细胞结构的易损伤性造成的低复苏率.以及对卵巢组织玻璃化冷冻的可行性探索,对生殖领域提出新挑战.由于卵巢组织冻存与卵母细胞的冻存有着密不可分的联系,就两者国内外新进展做综述.
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冷冻保存对卵母细胞影响的研究进展
随着辅助生殖技术的发展,人卵母细胞的冷冻技术受到了广泛关注并被广泛应用.但与早期胚胎的冷冻保存相比,卵母细胞的冷冻保存具有复苏后成活率低、受精率低、胚胎发育潜力差、妊娠率低、流产率高等特点.冷冻和解冻过程以及冷冻保护剂等均会对卵母细胞造成一系列形态学、细胞学以及生理、生化方面的影响.如:冷冻保护剂、冻融过程等可对卵母细胞的纺锤体、细胞骨架、细胞内钙离子、蛋白质组、细胞代谢以及卵母细胞的活性和发育潜力造成不同程度的影响.研究卵母细胞特殊的生物学特性以及冷冻对其造成的影响,有助于改进卵母细胞的冷冻方法,提高成功率.
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卵子冷冻在女性生育力保存中的作用研究进展
自1986年世界首例冷冻卵子冻融复苏后行体外受精一胚胎移植(IVF-ET)获得妊娠成功后,卵子冷冻在辅助生殖技术领域掀起热潮.卵子冷冻为女性的生育力保存开辟了新前景,但由于技术及条件的制约,卵子冷冻及其应用一直在摸索中发展.随着冻融技术、胞浆内单精子注射及未成熟卵体外培养技术的发展,卵子冷冻近年取得一定进展.已在临床应用,为女性生育力保存奠定了基础.但冻融后的卵子存活率、受精率、胚胎着床率及临床妊娠率仍明显低于常规体外受精-胚胎移植,有待进一步研究.就近年来卵子冷冻的进展及其应用综述.
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卵母细胞玻璃化冷冻损伤相关因素及进展
卵母细胞玻璃化冷冻损伤的机制及影响因素的研究是近年来关于生殖能力贮存的研究热点.近年来随着细胞生物学及分子生物学的迅速发展,对卵母细胞冷冻损伤的影响因素研究取得了巨大进展.综述冷冻保护剂、卵母细胞特点及发育阶段、降温速率、卵母细胞的外围结构、冷冻方法等因素对卵母细胞冷冻损伤的影响机制及降低卵母细胞冷冻损伤的近进展.
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海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究
海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法.海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说.在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征.目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能.
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雄性生殖细胞冷冻保存研究进展
随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展，雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容，为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前，雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻；冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤，根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类；冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。
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玻璃化冷冻人类卵细胞的研究进展
随着人类辅助生殖技术的发展,卵细胞体外保存已经成为关注的课题.玻璃化冷冻人类卵细胞有其可行性和优势,但该技术有待进一步完善.根据近5年有关文献对玻璃化冷冻人类卵细胞现况、低温下卵细胞损伤机制、卵细胞玻璃化技术的改进、现状及应用前景等做一综述.
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如何优化胚胎冻存方案改善患者妊娠结局
目的：探讨如何优化胚胎冻存的方案以提高胚胎解冻移植的成功率，降低多胎率，增加一次取卵的累积妊娠率。方法回顾性分析1166个冻融胚胎移植（FET）周期的临床资料，分为玻璃化冷冻组（445）和慢速程序冷冻组（721）；445个玻璃化冷冻FET周期分为单胚组（28个周期）、双胚组（71个周期）、三胚组（346个周期）。0～1个优胚为O0～1组（235个周期）、2个优胚为O2组（80个周期），3个优胚为O3组（130个周期）。比较各组之间的妊娠结局（着床率、临床妊娠率、流产率及活产率）。结果（1）玻璃化冷冻组的胚胎复苏成活率（98.3%vs 73.1%）、无损伤胚胎复苏率（83.3%vs 62.1%）、着床率（36.8%vs 29.9%）、临床妊娠率（57.1%vs 44.0%）及活产率（47.9%vs 34.5%）高于慢速程序冷冻组（P＜0.05）。（2）三胚组的临床妊娠率（62.7%vs 39.4%vs 32.1%）、多胎率（37.6%vs 10.7%vs 0）及活产率（52.6%vs 31.0%vs 21.4%）明显高于单胚和双胚组（P＜0.05）。（3）O2~3组的着床率（33.0%vs 27.1%）、临床妊娠率（65.2%vs 48.1%）、多胎率（38.0%vs 20.4%）及活产率（56.2%vs 39.2%）高于O0~1组（P＜0.05）。（4）O3组的着床率（36.8%vs 26.3%）和多胎率（46.7%vs 21.3%）高于O2组（P＜0.05）；但两组间临床妊娠率（69.2%vs 58.8%）、流产率（15.6%vs 10.6%）、异位妊娠率（0 vs 0）、活产率（58.5%vs 52.5%）及早产率（26.3%vs 14.3%）差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论采用玻璃化冷冻技术可以提高临床妊娠率和活产率、降低多胎率，且每管冻存2个优胚效果好。
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玻璃化冷冻保存时间对冻融胚胎移植结局的影响
目的：探讨玻璃化冷冻保存不同时间对冻融胚胎移植结局的影响。方法选择以长方案和超长促排卵治疗获得胚胎行玻璃化冷冻并在2013年1月—2014年12月解冻的2493个冻融周期为研究对象，根据冷冻保存时间不同将冻融周期分为5组：≤180 d为1组（952周期），＞180～360 d为2组（985周期），＞360～720 d为3组（383周期），＞720～1080 d为4组（84周期），＞1080 d为5组（89周期），比较各组解冻胚胎的复苏存活率、临床妊娠率、胚胎种植率、流产率的差异，同时比较不同冷冻保存时间对卵裂期胚胎及囊胚期胚胎的影响差异。结果卵裂期各组的复苏存活率、临床妊娠率、胚胎种植率、流产率比较差异均无统计学意义（P均＞0．05）；囊胚期各组复苏存活率、流产率比较差异均无统计学意义（P均＞0.05），但45，组临床妊娠率、胚胎种植率与1，2，3组比较差异有统计学意义（P均＜0．05）。结论卵裂期胚胎玻璃化冻存时间对临床妊娠结局无明显影响，但冻存时间延长，临床妊娠率有下降趋势，而囊胚期胚胎冻存时间＞721 d将出现临床妊娠率、胚胎种植率的明显下降。
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不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响
目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05)；两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。
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人类卵母细胞冷冻现状的研究进展
20世纪后半段,人类辅助生殖技术已经显著进步.卵母细胞冷冻是辅助生殖技术领域的一项重要成就.这项技术对于生育期妇女生育力的保存提供了更有效的解决办法.卵母细胞冷冻技术主要有慢速冷冻(slow cooling)和玻璃化冷冻(vitrification).卵母细胞冷冻前后的细胞质量是评价冷冻方法效果的基本指标.MⅡ期卵母细胞一般以细胞形态、极体的位置和大小,是否存在细胞质空泡和其他异常情况来评价其细胞的质量.卵母细胞冷冻复苏后的质量关系到胚胎或囊胚的发育,因此在冷冻卵母细胞之前选择合适的方法至关重要.
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玻璃化冷冻羊皮生物敷料的初步研究
为大面积烧伤病人的救治提供一种价格低廉的生物敷料,对玻璃化冷冻技术做进一步了解.玻璃化冷冻技术的研究主要集中在各种胚胎细胞研究上,对羊皮生物敷料研究至今甚少.目前对羊皮生物敷料的研究尚处于初步阶段,有待于我们进一步深入研究.
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卵巢组织冷冻保存及移植技术进展
背景:生育力保存技术可以为因肿瘤或肿瘤治疗相关原因失去卵巢功能的女性患者提供恢复内分泌功能和生殖功能的机会.目的:阐述了卵巢组织玻璃化冷冻以及冻融卵巢组织自体移植等技术在重建卵巢功能方面取得的进展和存在的问题.方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1999-01/2011-12关于卵巢早衰的文章,在标题和摘要中以"卵巢早衰,玻璃化冷冻,卵巢移植"或"premature ovarian failure,vitrification freeze,ovary transplantation"为检索词进行检索.终选择关于卵巢玻璃化冷冻和自体移植的40篇文献进行综述.结果与结论:对于重建肿瘤相关性卵巢早衰患者卵巢功能,卵巢组织玻璃化冷冻保存和自体原位移植具有广泛临床应用前景.不仅能够恢复自然生育力、生殖功能及内分泌功能,而且不存在免疫排斥,也没有伦理学争议,安全方便.可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻移植技术将越发成熟,为更多的女性肿瘤患者保存生育力和内分泌功能带来福音.
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卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展
背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存.目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展.方法:由第一作者检索1995/2011 PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献.结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤.但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序.影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等.随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性.到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成.
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关节软骨的玻璃化冷冻与保存
1研究背景
关节软骨损伤的治疗一直是骨科与运动医学领域的难题。关节软骨组织高度水合、细胞含量极低且无血管，无论何种原因造成其损伤都很难修复，几乎无能力再生。 -
不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较
背景:卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案.目的:探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响.方法:采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响.结果与结论:不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组(P＜0.05),二甲基亚砜组低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义.体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P＜0.05),至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致.培养14d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占主要的.新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组(P＜0.05),二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P＜0.05).提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定.
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冻融后单囊胚移植临床分析
目的 探讨冻融后单囊胚移植的临床结局及可行性分析.方法 回顾性分析2010年1月至2012年12月在云南省第一人民医院生殖医学中心接受冷冻囊胚移植的1959个周期的资料,将冻融后单囊胚移植(single frozen-thawed blastocyst transfer,SFBT)与双囊胚移植(double frozen-thawed blastocyst transfer,DFBT)分组比较,统计分析两组临床结局.结果 两组间比较胚胎种植率、流产率、异位妊娠率差异无统计学意义(P＞0.05);临床妊娠率46.3％ vs.59.5％,活产率33.3％ vs.44.1％,双胎率0.6％ vs.23.5％,早产率1.4％ vs.4.5％,低体重儿率1.2％ vs.5.2％,SFBT组均低于DFBT组,差异有统计学意义(P＜0.05).SFBT妊娠组与非妊娠组间比较年龄、胚胎的发育速度、碎片比例、卵裂球均匀度,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 为避免多胎妊娠,降低母婴并发症,实施SFBT是一项有效可行的措施.年龄和D3胚胎形态对SFBT的临床结局无显著影响.
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玻璃化冷冻对小鼠囊胚线粒体DNA及线粒体相关基因表达影响研究
目的 探讨玻璃化冷冻对小鼠囊胚线粒体DNA(mtDNA)和线粒体相关基因mRNA表达的影响.方法 本研究于2015年6月至2016年1月中山大学北校区实验动物中心完成.将180个小鼠囊胚分成玻璃化冷冻组(n=90)和新鲜组(n=90),每组30个胚胎用于mtDNAD环(D-loop)区测序分析;30个胚胎用于实时荧光定量PCR测mtDNA拷贝数;剩余胚胎用于实时荧光定量PCR检测线粒体转录因子A(Tfam)和DNA聚合酶γ(Polg1和Polg2)的mRNA表达,比较2组碱基突变率和mtDNA拷贝数及线粒体相关基因mRNA表达.结果 对照组和玻璃化冷冻组均未发现碱基突变;对照组和玻璃化冷冻组的胚胎mtDNA平均拷贝数分别为2.9×10(s=1.4×105)和3.2×105(s=1.8×105),差异无统计学意义(P＞0.05);两组胚胎的3个线粒体相关基因mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05),玻璃化冷冻组的3个基因mRNA表达均上调.结论 玻璃化冷冻对小鼠囊胚mtDNA没有影响,但是会引起线粒体相关基因mRNA的表达上调.
