首页 > 文献资料
-
DAP玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存
目的 探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术.方法 选择3个品系(C57BL/6、ApoE-/-、NOS3--)SPF级4周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果.结果 C57BL/6、ApoE-/-、NOS3-/-3个品系小鼠超数排卵平均值分别为42.98个/只、27.93个/只、23.11个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68.79％、32.70％、23.08％,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72.77％、80.87％、83.33％,存活率分别为56.92％、54.84％、70％,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72.37％、60.78％、25％.结论 选择4周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术.
-
卵母细胞冷冻的临床应用进展
人类卵母细胞冷冻作为生育力保存的一种方式,在辅助生殖技术中起关键作用,目前已在辅助生殖领域得到越来越广泛的应用,并成为生殖医学的研究热点之一.卵母细胞冷冻技术经过多年的发展也取得了较大的进步,冷冻方法上新兴的玻璃化冷冻法逐步取代了传统的程序化慢速冷冻.但不同成熟期人卵母细胞冷冻保存的研究仍有诸多争议.卵母细胞的冷冻保存不论冷冻方法还是冷冻技术如何,都有与年龄相关的婴儿出生率下降的趋势.
-
人卵巢组织玻璃化冷冻技术研究进展
卵巢组织的玻璃化冷冻技术是一项极有希望的保护生殖能力的技术,特别是对于接受放疗化疗后出现月经紊乱、闭经和不孕的女性肿瘤患者.这一技术的广泛接受,要求其具有安全、易于操作、效果理想的特点.通过对国内外的研究进展进行综述,对卵巢组织玻璃化冷冻的方法和应用的优缺点进行分析.
-
温度、冻存液体积和操作时间对小鼠卵子Cryotop玻璃化冻融复苏率的影响
目的 探讨Cryotop法中冷冻操作环境温度、加载覆盖的保护液微滴体积以及投入液氮前暴露于高浓度冷冻保护剂(CPA)的时间对小鼠MⅡ期卵子玻璃化冻融效果的影响.方法 对6周龄KM系小鼠促排卵、脱颗粒细胞以获得形态良好的MⅡ期卵子,用Cryotop法对其进行玻璃化冻融,卵母细胞随机分组后实验方案如下:根据冷冻环境温度的不同,设置37℃操作组和22℃操作组;根据薄膜上包被的保护液微滴体积的不同,设置＜0.1 μL组、0.1 ～0.5 μL组和＞0.5～1.0 μL组;根据与CPA的接触时间的不同,将冷冻卵子分为30～40 s暴露组、＞40～90 s暴露组和＞90～180 s暴露组.随后对各组卵母细胞的复苏率进行统计比较.结果 22℃操作组小鼠卵子的复苏率为81.4％,显著高于37℃操作组的50.7％,差异有高度统计学意义(P＜0.01).选择22℃的操作环境,＜0.1 μL组、0.1～0.5 μL组、＞0.5～1.0 μL组复苏率(85.7％、90.5％、83.2％)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).＞90～180 s CPA暴露组的卵子复苏率为74.7％,低于30～40 s暴露组(83.3％)和＞40～90 s暴露组(78.9％),差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用Cryotop法冻融卵母细胞时,不必刻意追求＜0.1 μL的保护液加载体积.卵子在高浓度CPA中的暴露时间不宜过长,且控制在30～90 s内对其存活率无明显影响.在常温(22℃)环境下进行操作可改善复苏结局.
-
白藜芦醇对冻融后小鼠成熟卵母细胞氧化应激水平和线粒体功能的影响
目的 探讨白藜芦醇(Res)对冻融后小鼠成熟卵母细胞活性氧(ROS)水平和线粒体功能的影响.方法 根据是否在冷冻复苏培养液中添加Res,将解冻后存活的卵母细胞分为两组:Res组和对照组.二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测ROS水平,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位(△Ψm).结果 卵母细胞玻璃化冷冻解冻的存活率为89.0％(267/300),其中125、142枚分别进行ROS和△Ψm检测.Res组的ROS水平(0.64±0.17)较对照组(1.00±0.26)明显降低(P＜0.01),Res组的△Ψm(1.16±0.40)较对照组(0.87±0.28)明显增加(P＜0.01).结论 Res能降低小鼠冻融卵母细胞的氧化应激水平并增加其线粒体功能,可能有助于卵母细胞的损伤修复.
-
采用不同载体的玻璃化冷冻对人卵巢组织冻存效果的比较研究
目的 比较采用不同载体的玻璃化冷冻方案对人卵巢组织的卵泡形态、冻融后体外培养时卵泡生长和激素分泌能力的影响,寻找临床上简便易行且保存效果上佳的人卵巢组织玻璃化冷冻方案.方法 将16例患者的卵巢组织切割成皮质小条后随机分配到新鲜组和不同载体玻璃化组,包括冷冻管组、小微滴组、不锈钢网筛组和固相表面玻璃化组.观察各组卵巢组织卵泡形态;冻融后的卵巢组织行体外培养,比较卵泡生长情况以及培养液中雌二醇和孕酮的浓度.结果 冻融后各组原始卵泡正常形态率均低于新鲜组,差异有统计学意义(P < 0.05).冷冻管组、小微滴组、不锈钢网筛组和固相表面组,原始卵泡形态正常率分别为(64.57±11.84)%、(78.36±7.62)%、(77.21±6.51)%和(84.70±5.03)%.固相表面组原始卵泡形态正常率明显高于其他玻璃化组(P < 0.05).体外培养液中雌二醇和孕酮的平均水平随培养时间逐渐升高.固相表面玻璃化组两种激素平均浓度明显高于其他玻璃化组.培养后卵巢组织中原始卵泡所占比例均较新鲜组下降,生长卵泡比例升高.固相表面玻璃化组培养后生长卵泡比例明显高于其他玻璃化组.结论 固相表面玻璃化冷冻可以保存大部分原始卵泡的正常形态,并能较好地保存其体外生长和性激素分泌功能.该技术简便易行且冷冻效果好,适合人卵巢组织玻璃化冷冻的临床使用.
-
玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织的影响
目的 探讨玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织内卵泡形态及卵巢组织激素分泌功能的影响.方法 将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢组、去势组和玻璃化冷冻组,应用乙二醇(EG)和二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织.冷冻前后取部分小鼠卵巢组织行组织学观察;同时将部分新鲜和复苏组织自体移植入小鼠肾被膜下.移植术后5 d开始观察小鼠的动情周期,术后30d测定小鼠血清雌激素浓度.结果 冻融卵巢组织内存活的原始卵泡和初级卵泡与新鲜组织无显著差异(P＞0.05);而次级卵泡的存活率显著下降(P＜0.01).移植术后玻璃化冷冻组和新鲜卵巢组小鼠均出现动情周期,两组动情周期出现时间无明显差异(P＞0.05).移植术后第30天两组小鼠血清雌激素浓度无显著差异(P＞0.05).结论 玻璃化冷冻法可以较好地保存小鼠卵巢组织内的原始卵泡和初级卵泡,且不影响卵巢组织的激素分泌.
-
HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究
目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果,为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础.方法采用乙二醇作为冷冻保护剂,以野生型P21+/+小鼠为对照,用OPS法对P21HBsAg/HBsAg及P21HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3.5 d的胚胎进行玻璃化冷冻,并比较不同基因型小鼠的超数排卵数,胚胎的复苏率及发育率.结果 P21+/+、P21HBsAg/HBsAg及P21HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27.89、15.56、9.14枚;复苏率分别为88.7%、81.1%、80.3%;发育率分别为82.6%、79.4%、56.6%.结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数,解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别,而解冻后发育率,P21HBx/HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠.结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响.
-
两种玻璃化胚胎冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻效果比较
目的 探讨EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻的效果.方法 6个品系小鼠(KM、ICR、BALB/c、C57BL/6J、OB/OB、LAP/aTA0F59)的2-cell胚胎分别用EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法进行冷冻和复苏,比较两种冷冻方法的胚胎复苏率和着床率.结果 6个品系小鼠冷冻胚胎EFS方法的平均复苏率为69.97％ (47.9％～83.6％),DAP方法的平均复苏率47.23％ (26.3％ ～76.7％),EFS方法明显优于DAP方法.其中KM、ICR和BALB/c小鼠EFS方法的冷冻复苏率显著高于DAP方法(P＜0.01)；冻融胚胎移植后EFS方法的平均着床率27.23％(1.75％ ～45.0％),DAP方法的平均着床率31.43％(7.0％～46.3％).除KM、ICR小鼠外,其他4个品系小鼠的着床率DAP方法高于EFS方法.结论 KM和ICR远交群小鼠胚胎适合用EFS方法冷冻保存；C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59三个品系小鼠DAP方法优于EFS方法,但差异不大；BALB/c小鼠两种玻璃化冷冻方法的冻融胚胎着床率均较低,需进一步研究.
-
卵巢组织玻璃化冷冻的研究进展
玻璃化冷冻法是在急速降温过程中使溶液行成一种无冰晶的玻璃化状态，可以大程度避免冰晶形成对细胞膜及细胞骨架结构的损伤。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡方法、冷冻载体等。卵巢组织结构较复杂，尚未形成统一的玻璃化冷冻程序。提出了目前存在的问题。
-
一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体
目的 探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性.方法 以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法(GMP)为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响.结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异(92.80%vs 93.11%,49.80%vs 51.67%,36.73%vs 35.83%,12.65%vs 14.17%%;P>0.05).结论 封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞.
-
不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的初步研究
目的：比较不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的效果。方法选择冰珠、自制叶片、冷冻环这三种载体，分别用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻后移植，比较不同组合的复苏率、临床妊娠率、植入率。结果冰珠组的复苏率、妊娠率、植入率为明显低于自制叶片组和冷冻环组，差异具有统计学意义(P<0.05)；自制叶片组和冷冻环组的复苏率、妊娠率、植入率差异无统计学意义(P>0.05)。结论冷冻载体选择自制叶片和冷冻环均可以取得较满意的冷冻效果，其中自制叶片的成本更低，所以应用自制叶片于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻效果好且更经济。
-
玻璃化冷冻技术在保存人类不同发育阶段卵细胞和胚胎中的应用
玻璃化冷冻技术已逐渐成为辅助生育技术中重要的应用技术之一,在保存未成熟卵细胞、成熟卵细胞、原核期胚胎、卵裂早期胚胎及囊胚方面均取得成功,并相继有临床妊娠分娩的报道.本文总结了玻璃化冷冻技术在保存人类不同发育阶段卵细胞和胚胎方面的应用.
-
人类卵母细胞冷冻技术研究进展
卵母细胞冷冻作为现代辅助生殖技术的一项重要组成部分,是女性生育力保存及卵子馈赠的重要手段.玻璃化冷冻方法的不断改进使卵母细胞冷冻的解冻复苏率和临床妊娠率显著提高.如何更好地降低冷冻保护剂毒性、减少冷冻损伤及提高冷冻安全性成为现阶段研究的关注点.本文将对卵母细胞冷冻技术的应用范围、冻存方法、现阶段的难点及问题进行综述.
-
人卵母细胞玻璃化冷冻的临床应用及成功分娩
目的 探讨人卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法 将从促排卵周期获得的人的卵母细胞用冷冻环进行玻璃化冷冻保存,复苏后行卵细胞浆内单精子注射-胚胎移植,观察复苏后卵母细胞形成胚胎的发育能力.结果 冷冻后融解235个卵母细胞,存活169个(71.9%,169/235),受精122个(72.2%,122/169).移植11例,获得临床妊娠2例.第1例于2005年12月15日妊娠35+2周行剖宫产,为双胎女婴,均发育正常.第2例为单胎妊娠,现妊娠16周,目前胎儿及孕妇健康.结论 卵母细胞玻璃化冷冻是一种较理想的保存女性生育力的方法,但是其技术应用于临床有待进一步研究和实践.
-
卵巢组织玻璃化冷冻的研究进展
冷冻保存胚胎、卵母细胞或者卵巢组织是目前保存女性生殖内分泌功能的可选途径.相比之下,卵巢冷冻的优越性是卵母细胞或胚胎冷冻无可比拟的.传统的冷冻技术已经在临床推广应用,但由于操作过程复杂、医疗仪器昂贵、耗费时间长等,使其在一般的实验室无法推广应用.玻璃化冷冻操作简单、省时省力、且能减小传统慢冻所造成的冰晶组织损伤,注定其必将为人所关注并将渐渐被推广.但迄今为止,玻璃化冷冻尚未形成一个完整的标准体系.综合近几年玻璃化冷冻研究进展,展望其研究前景和目前存在的问题,努力思考如何建立卵巢组织的玻璃化冷冻.
-
囊胚玻璃化冷冻的研究进展
随着序贯培养液的出现,囊胚移植被认为是提高胚胎种植率、降低多胎妊娠率的有效方法,因此囊胚冷冻愈显重要.囊胚的玻璃化冷冻因其简化了冷冻过程;避免细胞内冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤;并且在冷冻过程中可迅速通过临界温度区,减轻了胚胎冷冻中常见的冻伤现象,使存活率提高等优点,近几年得到逐步发展.现对囊胚玻璃化冷冻(vitrification)的原理、要领、现状及应用前景进行综述.
-
卵巢组织玻璃化冷冻研究进展
卵巢组织冷冻是保存女性生殖功能的重要方法之一.近20年来,玻璃化冷冻法作为一种新兴的生物冷冻保存方法,在冷冻人类及动物的卵巢组织中取得了很大进步.相对于传统的程序化冷冻,玻璃化冷冻方法较简单,耗资少.然而,玻璃化冷冻法方案尚无与程序化冷冻方案一样的统一标准.综述国内外新型的玻璃化冷冻方法的研究进展,探讨如何选择合适的冷冻方法.
-
两种冷冻方法对人卵巢组织冻存效果的分析
目的:比较程序化冷冻与玻璃化冷冻人卵巢组织的冻存效果.方法:收集19例人卵巢组织标本,每例分成2份,1份应用程序化方法冷冻,另1份应用玻璃化方法冷冻,复苏后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下.38只重症联合免疫缺陷(SCID)裸鼠(移植宿主)随机分为2组:A组19只,移植程序化冷冻复苏的人卵巢组织;B组19只,移植玻璃化冷冻复苏的人卵巢组织.以去除移植宿主双侧卵巢日为D0,移植人卵巢组织日为D21,整个实验过程中,每日通过阴道脱落细胞学检查观察移植宿主动情周期变化,分别于D0、D21、D42、D63取裸鼠静脉血,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清AMH浓度.结果:切除卵巢后移植宿主动情周期消失,D63共有14只裸鼠恢复动情周期,2组间差异无统计学意义(A组8只,B组6只,P＞0.05),但A组恢复时间显著少于B组[(16.38±1.60)d vs.(18.33±1.21)d,P＜0.05].2组间AMH水平在D0、D21、D42、D63差异均无统计学意义(P＞0.05),但A组、B组D21 AMH水平均显著低于D0,差异有统计学意义(P＜0.05).恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63逐渐回升但未恢复至D0水平,未恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63均未回升但仍低于D0.结论:程序化冷冻和玻璃化冷冻均能有效保存卵巢组织.在冷冻的卵巢组织经解冻-移植后宿主恢复动情周期方面,程序化冷冻要优先于玻璃化冷冻,但仍需进一步研究.
-
人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究
目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射一胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力.根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P＞0.05),但是受精率存在显著性差异(P＜0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),但受精率存在显著性差异(P＜0.05).成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P＜0.05).程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例.获得1例生化妊娠.结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力.玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势.
