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冷冻平衡液及保护剂的不同组合对小鼠未成熟卵母细胞OPS法冷冻效果的影响
超低温冷冻保存小鼠卵母细胞的研究开始于20世纪50年代,此后研究者对各种动物的卵母细胞冷冻保存进行了探索,但其效果远不及胚胎冷冻水平.自从1998年Vajta等[1]发明了OPS法(open pulled straw, OPS)成功地冷冻保存了牛卵母细胞和囊胚以来,OPS法已成功地应用于小鼠成熟卵母细胞[2]、原核胚[3]、2-cell胚[4]等的冷冻保存,认为该冷冻方法是一种比较理想的玻璃化冷冻法.本实验采用改良的OPS法,以解冻后形态正常率和成熟率为判定指标,探讨冷冻溶液的不同组合、两种渗透性抗冻保护剂的配比对小鼠未成熟卵母细胞冻后生存性的影响,以期为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供有效的动物模型试验.
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囊胚期胚胎玻璃化冷冻技术的临床应用研究(附一例成功分娩报道)
总结本中心囊胚期胚胎玻璃化冷冻方法在临床应用结果,探讨该冷冻方法临床应用的意义.一、资料与方法1.对象:对本中心2003年10月3日至11月28日17周期进行53 个囊胚期行玻璃化冷冻,其中6周期16个囊胚解冻,目前还有37个囊胚继续冻存中.2.囊胚期胚胎的培养和玻璃化冷冻保存:在行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)或卵母细胞体外成熟(IVM)周期中,如患者在取卵后3 d,优质胚胎数＞5个时,分两种情况进行囊胚期胚胎培养:(1)于取卵后3 d,胚胎移植,然后对剩余胚胎继续培养,再对形成的囊胚进行玻璃化冷冻;(2)对所有的胚胎继续培养到囊胚,再将移植后剩余的囊胚进行玻璃化冷冻.如果本周期移植失败,待以后的自然周期或激素替代周期进行囊胚期胚胎解冻移植.
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人成熟卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行ICSI-ET的妊娠结局
目的 回顾性分析卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)的妊娠结局,为卵母细胞玻璃化冷冻的临床应用提供参考. 方法 收集2013年5月至2015年1月于我中心行辅助生殖助孕治疗、女方取卵当日无精子可用的6对夫妇为研究对象,收集6例女性的成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻,复苏后行ICSI-ET,观察6例患者的卵母细胞复苏率、受精率、卵裂率、临床妊娠率等. 结果 6例女性患者的6个取卵周期共获得成熟MⅡ卵母细胞94枚,均行玻璃化冷冻.择期复苏64枚,存活62枚,复苏率为96.8％.行ICSI授精后观察到正常受精卵43枚,卵裂40枚,获得可利用胚胎28枚,优质胚胎19枚,可利用胚胎率和优质胚胎率分别为70.0％和47.5％.鲜胚移植获得临床妊娠3例,孕囊5个;冻融胚胎移植1例,孕囊1个,均足月分娩,新生儿状况及Apgar评分良好. 结论 玻璃化冷冻卵母细胞技术可以在有适应证的患者中应用,并可获得较好的临床妊娠结局.但仍需更大样本量的临床研究予以验证.
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冻融卵母细胞显微授精后冻融胚胎移植成功并分娩一例报道
本文报道1例患者经玻璃化方法冷冻卵母细胞,解冻后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)获得胚胎,部分胚胎行玻璃化冷冻,冻融胚胎移植后获得临床妊娠并分娩1正常男婴.为卵母细胞及胚胎多次冷冻后的临床应用及应用可行性提供一定的参考.
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囊胚期胚胎二次冷冻复苏移植1例的出生结局和儿童发育情况随访
囊胚玻璃化冷冻能够很好地保存胚胎,但是二次冷冻的安全性还有待于商榷.本文旨在分析囊胚二次玻璃化冷冻复苏移植后的出生结局和儿童发育情况.此患者在我中心常规促排卵后玻璃化冷冻2枚囊胚,新鲜移植未孕,进行冷冻胚胎复苏移植,移植前一日当日解冻胚胎,移植日患者突发急性阑尾炎不能移植,在患者知情同意前提下再次冷冻保存,6个月后患者再次行复苏胚胎移植,成功妊娠,足月后分娩一健康女婴.记录女婴出生状况并随访至12岁.此女婴足月分娩,体长52 cm,体重3 550 g,儿童期体格发育正常,智力发育正常.因此认为囊胚二次冷冻后胚胎仍可能具有较好的种植潜能和发育潜能,但此病例仅为个例报道,临床工作中仍应尽可能避免胚胎的反复冻融.
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全胚冷冻的临床指证
在体外受精(IVF)治疗中,全胚冷冻越来越常用,但是全胚冷冻的适用人群尚不明确,不同生殖中心有不同的治疗策略.因此,需要针对全胚冷冻策略制定规范性指南来指导临床实践.本文采用态势分析法(SWOT)对全胚冷冻的优势、劣势、机遇和挑战进行分析,探讨全胚冷冻的适用人群以及是否应该扩大其适应证,以期指导临床合理的应用全胚冷冻技术.
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玻璃化冷冻技术与单胚胎移植
随着辅助生育技术(ART)开展的越来越普遍,妊娠率的逐渐提高,多胎妊娠已成为除卵巢过度刺激综合征(OHSS)外主要的并发症.为了降低多胎率,越来越多的中心开始实施单胚胎移植.比利时已制定单胚胎移植的法律.提高单胚胎移植的成功率的方法之一是单囊胚移植,而要实现单胚胎移植,特别是单囊胚移植,首先必须要改善培养条件提高囊胚的形成率,另一方面是必须要有可靠和简便的冷冻方法,以保证剩余胚胎能安全的冻存,以确保患者的累积妊娠率.而囊胚体积大,细胞数量、种类多,有囊胚腔,程序化冷冻容易产生冰晶[1].近10年来出现的玻璃化冷冻明显地改善了囊胚和卵母细胞的冷冻效果.玻璃化重复冷冻的动物实验和临床研究结果都表明,卵母细胞和囊胚的冷冻效果已与新鲜周期无异.
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冻融周期单囊胚移植的影响因素
人类辅助生殖技术的终目的是让不孕不育夫妇获得一个健康的孩子.多胎妊娠被认为是一种并发症,而不是成功的助孕结果.如何有效避免双胎妊娠同时维持总体妊娠率一直是辅助生殖治疗中面临的重要挑战之一.选择性单囊胚移植是即能降低多胎率又能有效维持总体临床妊娠率的有效手段[1-6].胚胎冷冻保存作为人类辅助生殖技术不可缺少的一部分,在增加移植机会、提高每个取卵周期的累积妊娠率、减少卵巢过度刺激等方面起着重要作用.然而,目前关于冻融周期如何降低多胎率的报道甚少,许多问题有待深入研究.
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卵裂期胚胎解冻移植结局的影响因素探讨
影响冻融胚胎移植结局的因素很多,包括患者年龄、冷冻胚胎的质量、内膜准备方式和冷冻方法等.传统的程序化冷冻在临床已使用20余年,虽经不断改进,解冻存活率仍在70％左右.玻璃化冷冻不需要程序化冷冻仪,且简便、快速,仅数分钟即可完成,消耗液氮量少,正逐渐广泛应用于辅助生殖实验室[1-4].数据显示玻璃化冷冻囊胚和卵子解冻后的存活率均高于慢速冷冻方法[5,6].
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Cryoleaf和Cryoloop冷冻载体冻融胚胎移植结局
目的:比较Cryoleaf和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体对冻融胚胎移植(FET)周期妊娠结局的影响.方法:采用回顾性研究方法,将本中心不同冷冻阶段(day3分裂期胚胎,day5/6囊胚期)的胚胎,根据冷冻载体不同分为Cryoleaf组和Croloop组,比较FET的妊娠结局.结果:分裂期胚胎,Cryoleaf组的胚胎存活率、着床率和临床妊娠率均低于Cryoloop组(P＜0,05);囊胚期Cryoleaf组的胚胎着床率低于Cryoloop组(P＜0.05),胚胎存活率和临床妊娠率与Cryoloop组比较无差异(P＞0.05).结论:FET周期中,采用cryoloop作为冷冻载体较Cryoleaf能获得更好的妊娠结局.
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不同载体和冷冻保护剂用于人胚胎玻璃化冷冻的初步研究
目的:比较分析冷冻环、自制叶片、冰珠3种载体,以及5.5mol/L EG、15%PROH+15%EG 2种冷冻保护剂用于人胚胎玻璃化冷冻的效果.方法:①选择131个6～10细胞,Ⅰ～Ⅱ级胚胎,按载体不同随机分为3组,将胚胎解冻后用于移植,比较3组的复苏率、植入率、临床妊娠率;②部分患者成功妊娠分娩后,自愿放弃剩余冻存胚胎,选择6～10细胞,Ⅰ～Ⅱ级,以叶片为载体冷冻的胚胎52个,按照冷冻溶液的不同分为2组,解冻后将胚胎继续培养3天,比较2组的复苏率和囊胚形成率.结果:①冰珠组的复苏率显著低于冷冻环和自制叶片组,3个组的植入率、临床妊娠率无明显差异;②15%PROH+15%EG冻存的胚胎解冻后复苏率和囊胚形成率显著高于5.5mol/L EG.结论:冷冻环和自制叶片是较为理想的冷冻载体,二者用于玻璃化冷冻效果相近,自制叶片具有成本低的优点;联用15%PROH+15%EG能降低冷冻保护剂对胚胎的毒性,玻璃化冷冻效果好于5.5mol/L EG.
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冻融优质胚胎体外培养时间对临床结局的影响
目的:探讨玻璃化冷冻复苏后优质胚胎的培养时间对临床结局的影响.方法:采用回顾性研究方法,将2011～ 2012年在本院实施冻融胚胎移植(FET)的1061例分为3组,其中冷冻胚胎复苏后的优质胚胎培养2～4h移植为A组(96例);培养＞4～8 h移植为B组(615例);培养＞8 h移植为C组(350例),比较各组胚胎植入率、临床妊娠率、流产率及活产率.结果:3组患者年龄、不孕年限、体重指数、移植日子宫内膜厚度、移植胚胎个数无统计学差异(P＞0.05);胚胎植入率(24.7％、23.4％、28.2％)、临床妊娠率(43.8％、40.8％、44.9％)、早期流产率(4.8％、10.4％、12.1％)、活产率(40.6％、32.7％、37.4％)均无统计学差异(P均＞0.05).结论:玻璃化冷冻胚胎复苏后培养时间对FET周期临床结局无明显影响,可根据临床和患者情况,具体安排胚胎移植时间.
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玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用
目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值.方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻.比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P＜0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P＞0.05).E组的成熟卵子率较D组提高(P＜0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和＞2细胞数方面无差异(P＞0.05).结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果.
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激光人工皱缩在玻璃化冷冻法保存人类囊胚中的效果分析
目的:评估囊胚玻璃化冷冻前用激光对囊胚腔进行皱缩的临床效果.方法:激光打孔使囊胚腔皱缩后将囊胚玻璃化冷冻(皱缩组)或直接将囊胚玻璃化冷冻(对照组),比较两组的临床效果.结果:317个囊胚解冻周期均进行了移植.其中对照组178例和皱缩组139例,两组年龄、不孕年限、内膜厚度、平均移植胚胎数、优质囊胚率、流产率、多胎妊娠率和异位妊娠率比较未见差异(P＞0.05);对照组的临床妊娠率(44.9％)、种植率(34.4％)均低于皱缩组(66.9％、48.5％)(P=0.001).结论:囊胚玻璃化冷冻前使用激光打孔人工皱缩可显著提高临床妊娠和着床率,值得临床探索应用.
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胞浆中央颗粒化卵细胞来源的胚胎经玻璃化冻融后发育潜能的研究
目的：探讨玻璃化冻融对胞浆中央颗粒化人卵母细胞（CLGC）来源的胚胎发育潜能的影响。方法回顾性分析卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植（ICSI-ET）治疗且获卵均为 CLGC 卵的106周期。其中研究组58周期，D3胚胎行玻璃化全胚冷冻，三个月后行玻璃化解冻胚胎移植。对照组48周期，D3胚胎行新鲜胚胎移植。计算研究组胚胎复苏存活率、完整胚胎率、卵裂球部分退化率，并比较两组的临床妊娠率、种植率、及流产率。结果研究组与对照组之间的年龄、基础 FSH、促排方案均无统计学差异。研究组玻璃化冷冻复苏58个周期，胚胎复苏存活率为80.3％，完整胚胎率为61.8％，卵裂球部分退化率为18.5％；研究组移植54周期，临床妊娠率29.6％，种植率18.3％，流产率25.0％。对照组移植48周期，临床妊娠率为35.4％，种植率29.4％，流产率11.8％。研究组的种植率低于对照组，差异有统计学意义，两组的临床妊娠率、流产率无统计学差异。结论CLGC 胚胎经玻璃化冻融后发育潜能明显下降，对 CLGC 胚胎的移植应尽可能地采取新鲜胚胎移植策略或探索损伤更小更合适的冻融方法。
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玻璃化冻融胚胎移植与新鲜胚胎移植的妊娠结局
目的：比较玻璃化冻融胚胎移植、新鲜胚胎移植与自然受孕的妊娠结局及新生儿情况。方法回顾性分析2009年1月-2012年12月在冻融胚胎移植及新鲜胚胎移植（统称IVF-ET）的妊娠结局及新生儿情况，以同期自然受孕组作对照，比较分析新鲜周期与冻融周期移植的种植率、妊娠率、流产率、早产率、多胎妊娠率、宫外孕率、出生缺陷率、新生儿体重及男女性别比等，同时分析IVF-ET妊娠与自然受孕新生儿的差异，进一步明确IVF治疗的安全性。结果新鲜胚胎移植妊娠率（52.84％）高于冻融周期（45.83％），种植率（34.04％）高于冻融周期（30.87％），冻融移植巨大儿率（9.88％）高于新鲜移植（5.22％），差异均有统计学意义；流产率、宫外孕率、多胎率、新生儿出生缺陷率、死亡率差异无统计学意义。IVF的早产率（18.20％）、多胎率（32.63％）显著高于自然受孕（13.74％、3.63％），极低出生体重儿（1.53％）高于自然妊娠（0.82％），差异均有统计学意义；出生缺陷率、新生儿死亡率及巨大儿率差异无统计学意义。结论新鲜胚胎移植妊娠率及种植率高于冻融胚胎移植，冻融移植巨大儿率高于鲜胚移植，IVF-ET治疗不增加新生儿出生缺陷率、新生儿死亡率、男女性别比。
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卵子玻璃化冷冻与妊娠结局的相关分析
目的 探讨卵子玻璃化冷冻与妊娠结局的关系. 方法 收集2013年1月1日-2013年12月31日在本院生殖中心进行卵子玻璃化冻融后行卵母细胞胞质内单精子注射的175例,分析卵子玻璃化冷冻与妊娠结局的关系,并与新鲜卵子ICSI周期者相比较. 结果 冷冻组临床妊娠率为26.3％,自然流产率为13.0％;对照组临床妊娠率为43.1％,自然流产率为12.8％.冷冻组临床妊娠率低于对照组,差异有统计学意义;两组自然流产率比较,差异无统计学意义. 结论 卵子玻璃化冷冻会降低临床妊娠率,但不增加自然流产风险.
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囊胚玻璃化冷冻对子代发育行为和生殖能力评价
目的 通过观察囊胚玻璃化冷冻对复苏移植后小鼠的生长发育、神经功能、行为学和生殖能力的影响,评估该技术的长期安全性. 方法 通过促排卵收集性成熟期前C57BL/6雌鼠囊胚,玻璃化冷冻,复苏移植到ICR代孕鼠.仔鼠出生后,观察产仔数和有无外观畸形,记录新生鼠不同时期的生理指标;以正常C57BL/6小鼠为对照,通过转轮、水迷宫和社交试验检测小鼠的运动协调、学习记忆和社交习性;8周龄后检测生殖力. 结果 囊胚玻璃化冷冻鼠发育指标和行为学各项测试结果与对照小鼠对比差异没有统计学意义;囊胚冷冻雄鼠的生殖力(37.5％)和每胎产仔数[(6.7±2.5)只]与对照组[35.0％,(6.5±1.9)只]差异没有统计学意义. 结论 囊胚玻璃化冷冻出生的小鼠在生长发育、行为学特征和生殖力等方面和对照鼠无明显差异,表明小鼠囊胚玻璃化冷冻技术是安全和可靠的.
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冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响
目的 探讨慢速冷冻和玻璃化冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响.方法 回顾性分析2011年1月～2015年12月在北京大学第一医院进行卵裂期冷冻胚胎移植的1331个周期,包括慢速冷冻周期431个和玻璃化冷冻周期900个,比较两种不同冷冻方法的胚胎复苏率、完整胚胎率、临床妊娠率、种植率、流产率等各项指标,并分析卵裂球损伤对胚胎发育潜能的影响.结果 玻璃化冷冻的胚胎复苏率(92.53％)、完整胚胎率(75.43％)、临床妊娠率(45.72％)、种植率(27.41％)高于慢速冷冻(76.93％、48.46％、39.52％、19.88％,P＜0.05);而流产率分别为12.20％、12.56％ (P ＞0.05);周期取消率分别为3.71％、1.33％ (P ＜0.05).慢速冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:36.2％、37.7％、42.0％、44.3％(P＞0.05);玻璃化冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:20.5％、42.3％、48.8％、54.1％(P ＜0.05).结论 玻璃化冷冻法更适合于人卵裂期胚胎冷冻保存,其冷冻胚胎移植周期的妊娠结局要优于慢速冷冻法;卵裂球损伤对玻璃化冷冻复苏胚胎的发育潜能影响较大.
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两种冷冻方法冻融人卵巢组织异种移植后血管生成素-2表达变化的比较
目的 通过检测血管生成素-2(Ang-2)的表达,探讨两种冷冻方法对人卵巢组织的冻融及异种移植后的效果.方法 共收集16例人卵巢组织标本,每例分成2份,其中1份应用程序化冷冻方法进行冷冻,另1份应用玻璃化冷冻方法进行冷冻.解冻后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下.32只SCID裸鼠随机分为两组:A组16只,移植以程序化方法冷冻复苏的人卵巢组织;B组16只,移植以玻璃化方法冷冻复苏的人卵巢组织.解冻后及移植6周后观察两组卵巢组织中始基卵泡的存活及颗粒细胞Ang-2的表达情况.结果 解冻后,A组Ang-2的阳性率明显高于B组(P＜0.05),始基卵泡正常率两组相比差别不明显(P＞0.05).移植后,始基卵泡正常率及Ang-2的阳性率两组相比均无明显差别(P＞0.05).解冻后和移植后相比,两组的Ang-2阳性率及A组的始基卵泡正常率差别均不明显(P＞0.05),B组移植后始基卵泡正常率明显低于解冻后(P＜0.05).结论 与玻璃化冷冻相比,程序化冷冻对人卵巢组织始基卵泡颗粒细胞Ang-2的表达影响更小.将解冻后的人卵巢组织进行异种移植不影响Ang-2的表达.
