嗅鞘细胞移植促进神经修复的研究与进展

嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是分布于嗅觉系统嗅球和嗅上皮基底膜的一种特殊的胶质细胞.研究表明,嗅鞘细胞在中枢和周围神经系统内均能够促进损伤神经轴突的再生和类髓鞘的形成,促进受损神经功能的修复.中枢源性与周围源性的嗅鞘细胞具有相似的生物学特性,鼻黏膜活检可以是嗅鞘细胞自体移植的来源.本文就近年来嗅鞘细胞在神经损伤修复中的应用研究的现状和进展做一综述.

小鼠嗅上皮增殖细胞和表皮生长因子受体的免疫组化定位

大鼠嗅上皮神经干细胞培养及鉴定

胚胎及成年神经干细胞(neural stem cell, NSC)的成功培养为中枢神经系统疾病治疗带来了新的策略.从颅外组织如嗅上皮获取NSC可能是自体NSC移植的理想途径.研究表明,成年人及小鼠的嗅上皮中含有NSC[1-3].本研究观察新生及成年大鼠嗅上皮NSC的增殖及分化特性,为嗅上皮NSC的进一步研究提供参考.

周围神经的MRI技术进展

各种原因所致的周围神经疾病在临床工作中占有相当的比例。如何直接、有效地显示颅神经及其病变，是影像学研究的重要内容。近年，磁共振技术迅速发展，为12对颅神经及脊神经的影像学研究提供了较为广阔的发展空间。 一、嗅器 嗅器由嗅上皮、嗅球、嗅束和嗅皮质组成。嗅上皮位于鼻穹窿，其内有感觉性神经细胞，其中枢突聚集成15～20条嗅丝,穿过筛板进入嗅球。嗅球是1个小的类圆形的灰质块，位于鸡冠两侧、嗅沟前部的嗅窝内。嗅球向后发出扁平的嗅束，后行至前穿质处扩展成为嗅三角。嗅三角向后发出内、中、外3条嗅纹进入嗅觉皮质传导嗅觉。

镧对仔鼠嗅感觉神经元超微结构和嗅功能的影响

目的 观察发育期氯化镧暴露对仔鼠嗅感觉神经元超微结构及嗅功能的影响.方法 将24只健康8周龄清洁级妊娠2d的Wistar大鼠按体重随机分为3组,分别为对照(蒸馏水)组和低(2.5 g/L)、高浓度(5.0 g/L)氯化镧染毒组,每组8只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒50 d.仔鼠出生4d后,统计仔鼠存活数和性别情况,并计算生存率和雌雄比；并开始观察并记录仔鼠体重.仔鼠出生后25～27 d,采用嗅觉行为学方法(埋藏食物小球试验)检测嗅觉功能；于出生后28 d,采用透射电镜技术观察仔鼠嗅上皮嗅感觉神经元超微结构并测定嗅球镧含量.结果 各组仔鼠体重、生存率、性别比间比较,差异均无统计学意义.与对照组比较,各氯化镧染毒组仔鼠寻找食物所需时间较长,嗅球镧含量较高,差异均有统计学意义(P＜0.05)；且随着氯化镧染毒浓度的升高,仔鼠寻找食物所需时间均呈延长趋势,嗅球镧含量呈上升趋势.但所有测试均未出现超出400s以上的情况.另外,随着测试天数的增加,仔鼠寻找食物的时间均呈逐渐缩短的趋势.病理学观察结果显示,氯化镧染毒可造成仔鼠出生后嗅感觉神经元隆起增大,形状不规则,部分与嗅上皮表面分离,且顶端的纤毛数减少.结论 氯化镧可损伤子代大鼠的嗅觉功能,这可能与镧损害嗅上皮嗅感觉神经元的超微结构有关.

嗅神经鞘细胞移植治疗中枢神经系统损伤的研究进展

中枢神经系统损伤后的治疗一直是神经科学研究中的一大难题.嗅神经鞘细胞是分布于嗅觉系统中嗅球和嗅上皮基底膜的一种特殊的胶质细胞.大量的研究表明:嗅神经鞘细胞在中枢神经系统内能长距离的迁移,能促进轴突的再生和髓鞘的形成.不管是中枢性还是周围性的嗅神经鞘细胞均能促进损伤神经元的再生.鼻腔是嗅神经鞘细胞自体移植供体的来源.本文综述了近年来嗅神经鞘细胞移植治疗中枢神经系统损伤再生的研究现状和进展.

人体的有趣数据

眼睛像一架奇特的照相机,它能在光谱上区分150多种颜色,其内含有1200万个视杆细胞和650万个视锥细胞;耳朵的鼓膜,其表面积有50~90平方毫米;鼻子能闻出2000多种不同的气味,嗅觉接受器——嗅上皮的表面积为500平方毫米.

嗅感觉神经元的凋亡

与其它神经元不同,成年哺乳动物的嗅感觉神经元(Olfactory Receptor Neuron,ORN)有自发、持续更新的能力[1].1996年Murrell等报道成年人的嗅上皮仍保持神经再生和分化能力[2].ORN这种神经再生和更新的特殊性引起了神经科学和耳鼻喉科学者的广泛关注,他们通过各种方式研究ORN死亡和再生规律,并从不同水平探索再生机制.目前认为,ORN的生长周期为30天左右,位于上皮深层的球基细胞(Globose Basal Cell)作为神经元前体细胞增殖、分化而成ORN[3,4].ORN这种自我更新能力与通过凋亡(Apoptosis)机制来维持机体细胞数量自身稳定的特性极其相似,而且ORN的死亡与神经元前体细胞的增殖分化存在反馈调节作用[5],由此学者们开展了对ORN凋亡的研究,试图从另一侧面探索ORN自我更新机制.

体外培养的嗅上皮神经干细胞具有多潜能性

目的:探讨成体嗅上皮神经干细胞(olfactory epithelium neural stem cells)的培养方法及其体外分化的多潜能性.方法:使用中性蛋白酶和Ⅰ型胶原酶分阶段酶解消化嗅上皮,富集嗅上皮神经干细胞,扩增细胞,用加入生长因子bFGF和EGF的无血清培养液促使其形成神经球.血清诱导神经球分化并用免疫细胞化学染色方法鉴定分化细胞.结果:原代培养的嗅上皮神经干细胞呈集落样增殖,集落中的细胞表达在体分子标记GBC2和细胞角蛋白5.传代细胞用含生长因子的无血清培养液培养可增殖形成神经球.用含血清的培养液可诱导神经球分化;从神经球迁移出的分化细胞具有很高的异质性,其中包含有TUJ1阳性的神经元、P75NGFR阳性的嗅鞘细胞、GFAP阳性的星形胶质细胞和NG2阳性的寡突胶前体细胞,同时也存在有nestin阳性的神经干细胞.结论:成体嗅上皮神经干细胞可体外培养增殖形成神经球,神经球细胞具有向神经元、星形胶质细胞和寡突胶前体细胞分化的潜能.

成纤维生长因子-2在慢性鼻窦炎嗅觉障碍嗅上皮中的表达

目的:探讨慢性鼻-鼻窦炎嗅觉功能障碍的发病机制和成纤维生长因子-2 (fibroblast growth factors 2, FGF2)在嗅上皮表达中的意义.方法:应用免疫组织化学技术检测32例慢性鼻窦炎患者和11例对照嗅黏膜FGF2的表达.结果:和对照组相比,慢性鼻窦炎患者嗅粘膜FGF2的表达明显减少(P＜0.05).结论:慢性鼻-鼻窦炎嗅粘膜中促进再生因子FGF2明显减少.

慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮细胞凋亡及相关基因BCL-2,BAX的表达

目的:探讨慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮中细胞凋亡和BCL-2,BAX基因的表达.方法:用免疫组化S-P法测定28例慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮和10例正常对照组嗅上皮凋亡抑制基因BCL-2,凋亡促进基因BAX的表达;同时应用dUTP缺口末端标志法(TUNEL法)测定上述两种组织中细胞原位的凋亡.结果:(1)慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症组嗅上皮中BCL-2,BAX表达显著高于嗅觉正常组(P<0.05),但是,嗅觉障碍组嗅上皮中BAX表达显著高于BCL-2(P<0.05);(2)失嗅症组嗅上皮中细胞凋亡指数(AI)高于嗅觉正常组(P<0.05).结论:慢性鼻窦炎鼻息肉嗅上皮细胞凋亡显著,BCL-2和BAX在此过程中起了重要的调控作用.

慢性鼻窦炎嗅觉障碍嗅上皮中IGF-1R和Ki-67的表达及意义

目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎嗅觉功能障碍的发病机制和胰岛素样生长因子-1R(insulin-like growth factor 1R,IGF-1R)和Ki-67在嗅黏膜中表达的意义.方法 取32例慢性鼻-鼻窦炎患者作为失嗅组,11例单纯鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术者作为对照组,应用免疫组织化学技术检测IGF-1R和Ki-67在两组嗅黏膜表达的分布.结杲与对照组相比,实验组嗅黏膜Ki-67和IGF-1R表达明显减少(P<0.05).结论 慢性鼻-鼻窦炎嗅黏膜的再生能力明显减弱,与IGF-1R减少有关.

功能性鼻内镜手术对慢性鼻窦炎患者嗅觉的影响

目的 研究慢性鼻窦炎伴嗅觉障碍患者行功能性鼻内镜手术前后嗅觉功能的改变,探讨慢性鼻窦炎嗅觉功能与鼻内镜手术的关系,并用透射电镜观察手术对嗅区黏膜超微结构的影响,为临床治疗慢性鼻窦炎患者的嗅觉障碍提供理论依据.方法 对慢性鼻窦炎伴嗅觉功能障碍患者行功能性鼻内镜手术.于术前及术后6个月观察嗅觉功能变化并切取嗅区黏膜于透射电镜下观察超微结构.结果 术后嗅觉及嗅上皮的超微结构均有不同程度的改善,主观嗅觉改善率为9r7%;异常超微结构由术前的100%降为20%.结论 炎症导致的嗅上皮细胞由表及里各层的超微结构异常与嗅觉功能减退有关.功能性鼻内镜手术改善通气功能后及黏膜炎性反应消除后,随着嗅上皮超微结构的恢复,嗅觉也会有不同程度的改善.

ZnSO4损伤昆明鼠嗅上皮致抑郁行为的评估

将40只昆明鼠随机均分为对照组、不可预知性应激(CUMS)模型组(I组)、ZnSO4损伤嗅上皮组(Ⅱ组)、假手术组(Ⅲ组),分别于试验前,试验24h、1周后行自身抑郁行为评估;比较Ⅰ组、Ⅱ组抑郁行为.结果显示,Ⅰ、Ⅱ组试验前后自身抑郁行为比较有统计学差异(P<0.05);与对照组比较,Ⅰ、Ⅱ组均建模成功,可达到同样的抑郁效果.提示嗅上皮损伤可作为抑郁症(MD)建模的理想方法,嗅觉通路与MD存在一定关系.

嗅神经鞘细胞的特性和应用研究进展

嗅神经鞘细胞(OECs),简称嗅鞘细胞,是位于嗅觉系统的一种大神经胶质细胞,主要分布在嗅上皮、嗅神经和嗅球.在传统的解剖学和组织学中只是简单提及.由于嗅神经是中枢神经系统中唯一具有终生再生的神经,所以近十年来,OECs的性质和功能再次引起人们的关注.在我国OECs被人们认识和接受只是近两年的事情,但目前我国却领先将嗅鞘细胞应用于临床试验中.本文着重讨论这一细胞的特性并综述国内外的研究进展.

嗅上皮神经干细胞在内耳干细胞移植中的应用现状

感音神经性聋是困扰人类健康常见的问题之一,随着人口老龄化的加剧,这种情况越加严重.多数感音神经性聋是由毛细胞和螺旋神经元损伤或退化造成的.因此,恢复毛细胞和螺旋神经元的结构和功能对提高听力有决定性意义.利用干细胞移植来补充损失的毛细胞和螺旋神经元不仅能够恢复内耳的生物学基础结构,而且植入的干细胞可分泌营养因子,对内耳组织有营养和保护作用,是治疗耳聋的理想选择[1].

神经元核心抗原在小鼠嗅球和嗅上皮发育中的表达

目的:探讨神经元核心抗原(NeuN)在嗅球和嗅上皮发育过程中的表达特性和意义.方法:在小鼠胚胎发育9.5、11.5、14.5、17.5 d,出生当天和3个月成年个体的头部切片标本中,以免疫荧光染色方法检测NeuN的表达.结果:刚出生小鼠嗅球内层状结构尚不明显,NeuN表达于嗅球周边区域.在3个月大成年小鼠,嗅球的层状结构已清晰可见,NeuN表达阳性的成熟神经元主要聚集于接近嗅球中心的颗粒细胞层.位于嗅上皮的双极嗅感觉神经元在小鼠胚胎和成年个体中均未见NeuN表达.结论:NeuN通常被认为表达于几乎所有部位的成熟神经元.但在嗅球和嗅上皮中,NeuN只表达于成熟嗅球中的颗粒细胞层.小鼠出生到发育为成熟个体的过程中,NeuN表达阳性的成熟神经细胞由周边逐渐向嗅球中心迁移,可能与气味模式的形成有关.

大鼠嗅上皮神经干细胞的分离及培养

目的:从新生及成年大鼠嗅上皮分离培养嗅上皮神经干细胞(NSC),研究其增殖及分化特性.方法:采用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养液,分离、培养生后第3天和硫酸锌原位创伤后6 d的成年大鼠嗅上皮NSC,应用间接免疫荧光染色鉴定培养的NSC及分化的特异性神经细胞类型,四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定嗅上皮NSC的生长曲线及生长因子的影响.结果:从生后第3天和成年大鼠嗅上皮分离、培养出巢蛋白免疫反应阳性而细胞角蛋白免疫反应阴性,并能分化为神经元和星形胶质细胞的NSC.生后第3天和成年大鼠嗅上皮NSC生存能力的差异无统计学意义(P＞0.05),细胞克隆形成率为0.05%～0.10%.碱性成纤维细胞生长因子可以显著促进嗅上皮NSC的增殖.结论:从生后第3天和成年大鼠嗅上皮可培养出具有自我复制和多向分化潜能的NSC.

放射线损伤对小鼠嗅上皮细胞凋亡及再生的影响

目的 研究放射线损伤后小鼠嗅上皮细胞凋亡和再生情况,探讨放射治疗后嗅觉障碍的致病机制.方法 以4 Gy的X射线照射小鼠鼻部,建立放射线损伤小鼠嗅黏膜的动物模型分别于照射前及照射后第1,3,6,12,60天分批处死动物取材;TUNEL法检测嗅上皮中细胞凋亡.BrdU掺入免疫组化检测基底细胞再生.结果 放射线损伤后小鼠嗅上皮凋亡细胞显著增多(P<0.01),基底细胞再生也相应增多(P<0.01),但再生细胞少于凋亡细胞(P(0.01).结论 放射线损伤可促进嗅上皮细胞凋亡及基底细胞再生,但再生细胞少于凋亡细胞,二者失衡可能是放射治疗后嗅觉障碍的致病机制之一.

嗅觉通路神经干细胞研究进展

干细胞是能自我更新增殖和分化的细胞,能够产生表现型与基因型和自身相同的子细胞,同时还能分化为祖细胞.神经干细胞指来自神经系统并可以经过自我更新或者不对称分裂,产生除自身以外的其它细胞,可向特定类型的神经元或星形胶质细胞和少突胶质细胞分化[1].研究发现,从发育中甚至成年中枢神经系统组织中,可以分离出具有多潜能干细胞,并能在体外培养成永生的神经祖细胞系,这有望成为合适的体外转基因载体之一,为中枢神经系统先天性、创伤性和退行性疾病的治疗提供新策略.