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人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究
热休克蛋白(heat shook protein,Hsp)为幽门螺杆菌(Hp)共同的抗原成分,分为A(HspA)、B(HspB)两个亚单位.目前,通过细菌培养获得大量Hp,并从中纯化出足量的亚单位抗原非常困难.因此,我们采用基因工程技术构建重组HspA基因工程菌,并对HspA重组蛋白纯化条件及免疫学活性进行研究.
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以埃索美拉唑为基础的三联疗法根除老年人幽门螺杆菌的疗效观察
幽门螺杆菌(HP)感染是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素,并与胃癌有密切关系,因此根除HP已成为防治这些疾病的主要措施之一.我国新的<幽门螺杆菌感染共识报告>中指出凡有HP感染的消化性溃疡均应予根除HP治疗,仍推荐质子泵抑制剂(PPI)加两种抗生素的三联疗法为根除HP的一线方案[1].近年随着根除治疗的普及,特别是老年人使用抗生素的机会相对增加,HP的耐药性增强,导致HP根除失败,本文对两组以埃索美拉唑为基础的三联根除方案进行比较,旨在探索根除老年人HP的理想方案.
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幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达
目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.
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人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆、表达及抗原性研究
目的:构建含人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A编码基因的重组载体、进行核甘酸序列分析,并在E. coliBL21中表达,研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法:利用分子克隆技术从Hpylori DNA染色体中,扩增热休克蛋白A编码基因片段;将目的基因与载体pET32a(+)同时经kpnⅠ、BamH Ⅰ双酶切、纯化、连接后,转化含有目的基因的重组载体;以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达;表达产物经纯化后,用Western blot法检测其抗原性.结果:经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hpylori热休克蛋白A编码基因,与GenBank报道的相比较,有1.6%的碱基(bp)发生变异,1.6%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白Mr为33×103,其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103,可溶性表达产物占全菌总蛋白的18.96%.重组蛋白经Ni+-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上.用Westernblot方法检测显示,该重组蛋白可被Hpylori阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论:成功地克隆并表达了H pylori热休克蛋白A码基因,为Hpylori蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的基础.
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携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白活减毒鼠伤寒沙门菌口服重组DNA疫苗株的构建
目的:构建携带人幽门螺杆菌(Hpylori)中性粒细胞激活蛋白HP-NAP)基因(napA)的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA疫苗.方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌.结果:重组质粒经PCR及双酶切,证实成功构建了携带HP-NAP基因的重组真核表达质粒pIRES-napA,后者成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207.所克隆435bp napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均为98%.结论:成功构建并鉴定了携带HP-NAP基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA疫苗,为多价抗Hpylori口服DNA疫苗的研制奠定了基础.
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我公司煤矿工人幽门螺杆菌感染分析
幽门螺杆菌(HP)感染是慢性胃病的主要致病因素.感染后能否致病,主要取决于产毒菌株,主要有细胞毒素相关蛋白A(CagA)及细胞空泡变性毒素(VacA)HP菌株[1,2],这2种毒力型菌株具有很强的致病毒力,其产生的细胞毒素,能导致机体产生免疫答应,从而产生胃黏膜及机体的损害.为此,笔者进一步研究HP产毒菌株CagA、 VacA 与慢性胃病关系,从而为预防和减少多种慢性胃病乃至胃癌的发生,具有重要临床意义.
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中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见(2014年4月·长沙)
一、引言
胃癌系起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,是危害我国人民健康的重大疾病之一。我国幅员辽阔、人口众多,成人幽门螺杆菌( Helicobacter pylori,Hp)感染率高达40%~60%[1],属于胃癌高发国家,每年胃癌新发病例约40万例,死亡约35万例,新发和死亡病例均占全世界胃癌病例的40%[2],降低我国胃癌的发病率和死亡率是亟待解决的重大公共卫生问题。 -
人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的基因克隆及序列分析
新近研究表明:幽门螺杆菌(Hp)的尿素酶B亚单位(UreB)、热休克蛋白A亚单位(Hsp A)和空泡细胞毒素(Vac A)均是有效的抗原成分。由于Hp属微需氧菌,培养条件要求高,难以获得大量天然来源的Ure B,Hsp A,Vac A等成分。我们运用PCR技术克隆Hp hsp A基因,并构建载体对其进行序列分析。
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住院麻风病人幽门螺杆菌感染调查
麻风病人作为一个特殊的群体,大部分都存在不同程度的上消化道症状,现代医学研究表明幽门螺杆菌(HP)是引起消化道疾病如胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌的致病因子.1994年国际癌症研究中心(IARC)已把HP列为Ⅰ类致癌物.1HP感染不仅与胃肠道疾病有关,而且还涉及许多胃肠道外疾病.为了解住院麻风病人幽门螺杆菌感染的情况,于2010年1~3月开展此项调查.另外本调查还将探索幽门螺杆菌感染与性别、麻风型别、抗麻风治疗方案、麻风溃疡、既往有无上消化道病史、近期有无上消化道病史、病区居住时间、进餐方式的关系.
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小儿幽门螺杆菌相关性疾病
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是全球常见的感染源之一.近年来,来自成年人的流行病学资料显示,50%以上成人幽门螺杆菌相关疾病患者是在儿童期感染了幽门螺杆菌,人的一生中感染幽门螺杆菌的主要年龄阶段是儿童期,尤其是生后初几年[1],所以儿童是Hp感染危险的易感人群.而其与多种疾病的相关性已受到许多人的重视,现将与小儿Hp感染相关的一些疾病作一简要综述.
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幽门螺杆菌感染与偏头痛发作的临床研究
幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)自1982年发现以来,各国学者在近十多年里对其进行了大量的研究.目前的研究表明Hp是慢性活动性胃炎的直接原因,与胃、十二指肠溃疡和胃癌密切相关,但与偏头痛的关系目前研究甚少.我们通过内窥镜活检以了解偏头痛病人幽门螺杆菌的感染状况,从而明确幽门螺杆菌感染与偏头痛之间的关系.
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人幽门螺杆菌基因组研究概述
随着人类基因组计划的启动和实施,作为模式生物的微生物基因组研究得到了快速发展.幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一重要病原微生物,它的基因组研究在一开始就被作为重要的突破口.1997年由Jcan-F Tomb等人顺利完成26695菌株全基因组的测序工作.1999年又由Richard A,Alm等人完成了J99菌株的测序工作.