CagA+幽门螺杆菌与疣状胃炎的关系研究

目的探讨细胞毒素相关蛋白(CytotoxinAssociated geneA,CagA)阳性株幽门螺杆菌感染在疣状胃炎中的意义.方法 分别观察50例疣状胃炎伴有、60例慢性浅表性胃炎伴有幽门螺杆菌感染的病人中CagA的阳性率.结果疣状胃炎组CagA的阳性率为88%,慢性浅表性胃炎组CagA的阳性率为61.7%,两组比较有显著的差异(P＜0.01).结论 CagA+的幽门螺杆菌在疣状胃炎的发病中起重要作用,需进行HP的根治.

广东地区胃窦溃疡患者幽门螺杆菌CagA基因型与中医证型相关性分析

目的:研究广东地区胃窦溃疡患者幽门螺杆菌感染情况,探讨该地区胃窦溃疡患者中医证型的分布规律,分析中医证型与幽门螺杆菌CagA基因型的相关性.方法:收集广州军区广州总医院及广州中医药大学第一附属医院消化内科同期经胃镜下活检,病理诊断为“胃窦溃疡”和“慢性浅表性胃窦炎”的病例各150例,分别进行14C呼气试验,明确幽门螺杆菌感染情况;应用聚合酶链式反应(PCR)对Hp阳性标本进行CagA基因检测;同时对入选病例按中医“胃脘痛”进行辨证分型.结果:①胃窦溃疡组患者幽门螺杆菌感染率为80.67％,明显高于慢性浅表性胃窦炎组的39.33％(P＜0.05);②胃窦溃疡组中医证型以“脾胃湿热证”为主,占39.33％,明显高于其他证型(P＜0.05);③感染Hp的“脾胃湿热证”患者CagA阳性率为96.43％,明显高于其他证型组(P＜0.05).结论:广东地区胃溃疡患者以“脾胃湿热证”常见,其幽门螺杆菌感染率、CagA基因阳性率明显高于其他证型.

幽门螺杆菌jhp947和cagA的检测及jhp947真核表达载体的构建

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp) cagA和可塑区jhp947基因与胃及十二指肠疾病的关系;构建jhp947真核表达载体,为进一步研究jhp947的功能奠定基础. 方法 从消化性疾病患者胃粘膜活检组织中分离培养Hp,PCR分离cagA和jhp947基因,分析基因与疾病的关系;从Hp国际标准株J99中获取jhp947全长基因,克隆至pcDNA3.1/myc-His A载体并鉴定. 结果 分离获得108株Hp,目的 基因在胃炎、溃疡、胃癌组织中的检出率分别为:jhp947 3.2%、32.2%和33.3%,cagA 74.2%、93.5%和86.7%,jhp947检出率胃癌、溃疡组与胃炎组比较差异有统计学意义(χ2值分别为12.04和8.64,P均<0.01).jhp947和cagA的检出率无显著相关性(P>0.05).经鉴定jhp947真核表达载体构建正确. 结论 jhp947与胃癌和消化性溃疡的发生密切相关,jhp947和cagA在致病过程中可能没有协同作用,成功构建jhp947真核表达载体.

幽门螺杆菌东、西方株CagA的结构差异及其基因表达研究

目的 比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东、西方株CagA蛋白的结构差异,探讨其致病性差异的原因. 方法 微需氧培养Hp东、西方株各3株,获取cagA全长序列,用DNA Star和MEGA6进行氨基酸序列和构成比对.PT-PCR和Western blot检测东、两方株中CagA和尿素酶及其基因的表达.RT-qPCR检测东、西方株中8个基因的表达并进行分析. 结果 成功培养并鉴定Hp临床株4株,3株为东方株,1株为西方株.序列比对分析东、西方株中CagA氨基酸全长序列有明显差异.丙氨酸、精氨酸和苏氨酸在东方株中显著高于两方株:分别为88和83(t=5.303,P=0.006)、32和25(t=3.528,P=0.025)、57和50(t=3.951,P=0.017);组氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺和缬氨酸在东方株显著低于西方株:分别为13和1 7(t=8.485,P=0.001)、1 37和147(t=11.72,P=0.000)、12和20(t=9.449,P=0.001)、59和63(t=4.472,P=0.011)、59和63(t=6.5,P=0.003).尿素酶α基因在6株Hp中均有表达,但有2株Hp不表达CagA和尿素酶β.定量PCR结果显示,东方株尿素酶α基因、LPS合成蛋白基因及鞭毛钩蛋白FlgE基因高表达,而西方株中尿素酶辅助蛋白Ureh基因、鞭毛合成蛋白 FlhA基因及膜蛋白基因高表达(P＜0.05).结论 Hp东、西方株在CagA结构及基因表达存在差异性,推测可能是Hp东方株致病性更强的原因之一.

威海地区幽门螺杆菌cagA基因3'端多态性分析

目的 研究威海地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp)临床分离株cagA基因的3'端多态性. 方法 采用PCR法扩增Hp临床分离株的cagA基因3'端并测序,用DNAStar 5.0软件对其进行编码氨基酸序列的比对分析.结果 63株Hp临床分离株均cagA阳性(cagA+),其中93.7％(59/63)为东亚型(EPIYYA-ABD),6.3％(4/63)为西方型(EPIYYA-ABC).3.4％(2/59)的东亚型菌株EPIYA-B突变为ESIYA-B,4株西方型型均突变为EPIYT-B.胃癌患者分离株中88.9％ (16/18)为东亚型,11.1％ (2/18)为西方型;非胃癌分离株中95.6％(43/45)为东亚型,4.4％(2/45)为西方型.2株分离自胃癌患者的西方型Hp EPIYA-A后的第一个氨基酸残基由赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E).结论 威海地区Hp cagA基因以东亚型为主,但东、西方亚型Hp的致病性无显著差别,两型都存在cagA基因3'端编码氨基酸序列的改变.

幽门螺杆菌TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立用于幽门螺杆菌快速定量检测和分型的TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR方法. 方法 采用Primer Premier 5软件分析设计引物和探针,采用双重荧光定量PCR扩增幽门螺杆菌CagA和VacA基因片段,建立循环数与拷贝数关系的标准曲线.检测临床标本中所含幽门螺杆菌的循环数,用该方法对临床胃黏膜标本进行检测并与标准曲线对比,计算所含幽门螺杆菌的拷贝数. 结果 建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR方法检测幽门螺杆菌质粒的线性范围是102～108拷贝/μl,CagA和VacA基因标准曲线的相关系数分别是0.977 8和0.990 4.29份临床胃黏膜标本的CagA和VacA基因循环数Ct值分别在29～35和30～35之间,幽门螺杆菌拷贝数分别在1.0×101.39～1.0×103.87和1.0×103.06～1.0×103.91之间,且临床标本中的幽门螺杆菌均为Ⅰ型. 结论 建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR法具有敏感、精确、快速的特点,可用于幽门螺杆菌的快速定量检测与分型鉴定.

幽门螺杆菌毒素相关蛋白CagA上调胃泌素基因表达

目的 对幽门螺杆菌分泌的cagA蛋白能否调控胃泌素基因表达及作用机制进行研究.方法 用含有cagA基因的真核表达载体——pcDNA3.1ZEO(-)/cagA7转染AGS和SGC-7901细胞;同时培养幽门螺杆菌NCTC11637后感染AGS和SGC-7901细胞;加入JAK2信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126,实时荧光定量PCR检测转染和感染细胞中胃泌素mRNA的表达.结果 用PeDNA3.1ZEO(-)/eagA7转染和NCTC11637感染胃癌细胞AGS和SGC-7901后胃泌素mRNA表达显著增加(P＜0.05),但加入AG490和U0126后胃泌素mRNA的表达量显著降低(P＜O.05).结论 cagA上调胃泌素基因的表达,ERK/MAPK和JAK/STAT信号通路参与了CagA对胃泌素表达的调控.

新疆地区汉族人群感染幽门螺杆菌vacA亚型分布特征

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)毒素相关蛋白基因(cagA)和细胞空泡毒素基因(vac4)是Hp的重要致病基因[1],本研究对新疆地区汉族慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃溃疡、胃癌患者感染Hp的vacA基因型进行测定,探讨新疆地区汉族人群Hp vacA基因型分布及与胃疾病的关系.

CagA(+)幽门螺杆菌感染与心血管疾病

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)不仅与多种胃部疾病有着密切的关系,在其它疾病中也发挥重要的作用.其中细胞毒素相关基因(cytotoxin associated gene,CagA)阳性的HP对心血管疾病的影响是目前研究的热点之一.CagA是HP重要的毒力标志物,其表达水平与心血管疾病的发生、发展及疾病严重程度密切相关.CagA(+)HP感染是心血管疾病的独立危险因素之一[1].本文就CagA(+)HP的检测技术及与心血管疾病的关系研究进展做一简要综述.

消化性溃疡及胃癌患者血清CagA VacA抗体研究

细胞毒素相关蛋白(cytotoxin associated protein,CagA)和空泡形成毒素(vacuolating cytotoxin,VacA)是幽门螺杆菌(Hp)相应的CagA,VacA基因编码产生的两种蛋白质,是Hp的重要致病因子,也作为Hp毒力分型的标志[1],与消化性溃疡(PU)、胃癌有密切关系[2,3],由于Hp菌株类型的分布存在明显的地区差异[4.5].我们检测了本地区PU和胃癌患者的血清CagA,VacA抗体.旨在探讨我国东南沿海地区CagA,VacA与PU及胃癌的关系.1材料和方法1.1材料PU76例,男52例,女24例,年龄18岁～74岁;胃癌31例,男28例,女3例,年龄43岁～75岁;慢性胃炎33例,男21例,女12例,年龄24岁～56岁,所有患者均经内镜及病理证实.另设非消化科同期住院患者且无胃病史、近期无消化道症状者28例为对照组,男17例,女11例,年龄33岁～64岁.

幽门螺杆菌CagA基因与消化系疾病关系的研究进展

有关幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)毒力基因致病性的探讨,近些年来是消化系疾病研究的热点之一.大量研究表明H.pylori 与反流性食管炎、功能性消化不良、慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌及肝病的关系密切,而值得关注的是H.pylori CagA基因在这些疾病发生发展中的作用更为重要.本文综述了CagA与上述疾病相关性的研究进展.

西安地区幽门螺杆菌cagA, iceA基因与其所致疾病的相关性

目的: 研究幽门螺杆菌( H pylori) cagA、iceA基因及其不同组合对H pylori感染结局的影响, 探讨西安地区H pylori的优势致病基因型.方法: 用快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)筛选出H pylori阳性胃黏膜标本101例,细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA, 用聚合酶链反应(PCR)扩增尿素酶C( ureC)基因的方法筛选出H pylori阳性标本91例. 经PCR及琼脂糖凝胶电泳对cagA, iceA的基因亚型进行检测, 用χ2检验以及Fisher精确检验分析各基因及其不同组合与疾病的相关性.结果: cagA基因的阳性率为79.1%, iceA的总检出率为75.82%, 其中iceA1为50.5%, iceA2为38.5%, cagA+/ iceA1+的检出率高于其他组,单一基因及其不同组合在各疾病组中分布没有显著差异. iceA与cagA存在相关性. iceA2分别发现有229、334、439、549 bp以及229bp+334 bp的基因片段.结论: cagA+/ iceA1+是西安地区H pylori的优势致病基因型, cagA、iceA1、iceA2各单一基因以及其不同组合与感染的临床结局无关. iceA与cagA基因可能存在协同作用, 该地区iceA2基因有较大的变异性.

AIM To investigate the diagnostic value of CagA IgG in serum.METHODS Seventy three patients with peptic ulcer infected with HP were eradicated by antibioticstherapy. At pretreatment, wk9 and wk20 after treatment, the detection of Hp in gastric muscosa bybacteriologic method were performed, and CagA and whole-cell antigen of HP igG in serum by ELISAmethod were also performed at the same time.RESULTS The IgG titres of Hp CagA and whole-cell antigen changes in accordance with the efficacy ofHp eradicated. The former with an earlier appearance and a greater number of cases decreased to normallevel in comparison with the latter.CONCLUSION CagA IgG is a better index for observing the effectiveness of the eradication of Hp.

幽门螺杆菌毒素相关蛋白A对胃泌素基因启动子的调控作用

目的 研究幽门螺杆菌(HP)毒素相关蛋白A(CagA)对胃泌素基因启动子(GP)的调控作用及其信号传导机制,进一步阐明胃癌发生、发展的相关机制.方法 采用双酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序技术,鉴定CagA表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA和胃泌素报告基因载体PGL/GP.采用pcDNA3.1ZEO(一)/CagA+PGL/GP瞬时共转染AGS和SGC-7901细胞,同时用PGL/GP转染AGS和SGC-7901细胞,36 h后用HP感染细胞.在感染与转染细胞的同时,加入JAK2信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126.以未经处理的胃癌细胞和转染空载体的细胞为对照,通过检测荧光素酶活性,测定转染和感染细胞中GP转录活性的改变.TaqMan(R)实时荧光定量PCR测定胃泌素mRNA的表达.结果 与对照组、pcDNA 3.1 ZEO(-)/CagA+PGL3/Basic共转染组和pcDNA3.1ZEO(-)+PGL/GP共转染组相比,pcDNA3.1ZEO(-)/CagA+PGL/GP共转染组的萤光素酶活性在AGS细胞分别升高到251.3倍、106.1倍和2.4倍,在SGC-7901细胞分别升高到35.8倍、22.7倍和13.4倍(P<0.05).与对照组、PGL3/Basic+HP感染组和PGL/GP转染组相比,PGL/GP转染+HP感染组的萤光素酶活性在AGS细胞分别升高到1673.2倍、33.5倍和1.4倍,在SGC-7901细胞分别升高到1180.2倍、72.2倍和1.5倍(P<0.05).pcDNA3.1ZEO(-)/Cag,A+PGL/GP共转染组加入信号通路抑制剂AG490或U0126后,萤光素酶活性明显降低,在AGS细胞分别下降了33.0%和95.7%,在SGC-7901细胞分别下降了86.2%和94.8%(P<0.05).而在PGL/GP转染+HP感染组加入AG490或U0126后,萤光素酶活性明显降低,在AGS细胞分别降低了25.8%和24.6%,在SGC-7901细胞分别降低了14.1%和57.3%(P<0.05).在AGS和SGC-7901细胞中,HP感染组的胃泌素mRNA表达量分别是对照组的3.0倍和4.5倍,pcDNA3.1ZEO(-)/CagA转染组分别是对照组的10.8倍和10.9倍,是pcDNA3.1ZEO(-)组的2.3倍和16.2倍,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CagA能够增强GP转录活性,上调胃泌素基因的表达,是调控胃泌素基因表达的重要蛋白之一.ERK/MAPK和JAK/STAT信号通路参与了CagA对GP的调控.

幽门螺杆菌及其相关毒素与口腔扁平苔藓关系的研究

目的 探讨口腔扁平苔藓与幽门螺杆菌及其相关毒素CagA和VacA之间的关系.方法 快速尿素酶检测法检测口腔扁平苔藓患者与正常对照组龈下菌斑中幽门螺杆菌的表达.酶联免疫吸附试验法检测口腔扁平苔藓患者与正常对照组血清中幽门螺杆菌及相关毒素CagA和VacA的表达.结果 60例扁平苔藓患者龈下菌斑中Hp的阳性表达数明显高于正常对照组(P＜0.05),差异有统计学意义;60例扁平苔藓患者血清中Hp-IgG抗体、CagA-HpIgG抗体、VacA-HpIgG抗体阳性表达数明显高于正常对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 口腔扁平苔藓的发生与可能与Hp感染及CagA、VacA基因相关.

幽门螺杆菌细胞毒素的鉴定方法

目的:探讨幽门螺杆菌临床分离株的毒素鉴定方法.方法:临床分离幽门螺杆菌HB1菌株,以国际标准株NCTC 11637(VacA+ CagA+)和NCTC 11639(VacA- CagA+)为参照,运用细胞培养、PCR、Western blot等技术对HB1进行细胞毒素鉴定.结果:HB1菌株可诱导HeLa细胞发生空泡变性,经PCR检测含cagA基因,Western blot显示87×103及130×103处有蛋白条带.结论:HB1菌株为VacA+ CagA+菌株.

幽门螺杆菌的cagA基因和iceA基因与胃十二指肠疾病的关系

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)cagA基因及iceA基因的存在情况与胃十二指肠疾病的关系.方法:用PCR方法检测174例临床病人胃粘膜活检标本中Hp的cagA基因及iceA基因的存在情况.结果:cagA的检出率为89.7%(156/174),iceA1的检出率为62.1%(108/174),iceA2的检出率为32.2%(56/174),7例为iceA1 和iceA2皆阳性,3例未能检测到iceA等位基因型.各疾病组间cagA、iceA1、iceA2的检出率无统计学差异.结论:cagA基因及iceA基因不能作为本地区Hp毒力增强的标志.

应用免疫印迹法探讨血清幽门螺杆菌抗体谱与上消化道疾病的关系

目的：用免疫印迹法检测幽门螺杆菌（Hp）感染中不同血清分型与慢性浅表性胃炎（CSG）、慢性萎缩性胃炎（CAG）、消化性溃疡（PU）和胃癌（GC）的关系。方法：选取确诊为Hp感染的上消化道疾病患者205例，用Western blot法（免疫印迹法）测血清幽门螺杆菌抗体谱，检测Hp抗体分型，分析CagA和/或VacA抗体阳性的表达情况。结果：在Hp现症感染中，CSG、CAG、PU、GC患者的HpⅠ型感染比例明显高于Ⅱ型感染（P<0.01）；PU及GC中HpⅠ型感染率高于CSG（P<0.05）。不同年龄段及不同性别中HpⅠ型感染比例均高于Ⅱ型感染（P<0.01）。各组的Hp I型感染者中以CagA+VacA抗体为主，检出率为77.4%；其中以CSG组低（70.4%）、GC组高（81.8%）。各组CagA+VacA抗体检出率显著高于单一CagA/VacA抗体检出率（P<0.01）。结论：应用免疫印迹法进行幽门螺杆菌血清学分型检测对于上消化道疾病的判断有临床指导意义，Ⅰ型Hp感染更需要进行根治。

幽门螺杆菌基因分型及耐药检测寡核苷酸芯片的制备及鉴定

目的 探讨应用寡核苷酸芯片简单快速检测幽门螺杆菌(HP)感染并对其致病性相关的基因型及耐药性同时进行检测的方法,并进行鉴定.方法 根据Hp的致病性将其分为cagA+和cagA-两种基因型,通过检测23S rRNA基因是否发生点突变判断其对克拉霉素的耐药性.应用寡核苷酸芯片技术对临床标本的Hp进行基因分型和耐药性检测,并制备相应的寡核苷酸芯片.通过构建的野生型模板和突变模板证实制备的寡核苷酸芯片的准确性.结果 制备的寡核苷酸芯片可准确地将Hp分为cagA+和cagA-两种基因型,并能够通过检测23S rRNA基因中4种常见的、与克拉霉素耐药性密切相关的点突变,判断幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性.结论 应用寡核苷酸芯片可快速检测Hp感染并同时对其致病性相关的基因型及耐药性进行检测.

幽门螺杆菌专题系列讲座(四)Hp的致病因子及遗传多态性(下)

3 Hp致病因子近年研究进展3.1cag致病岛(PAI)1996年Censini等在研究Ⅰ型(VacA阳性,CagA阳性)和Ⅱ型(VacA阴性,CagA阴性)Hp菌株的遗传学差异与致病关系时发现,Ⅰ型Hp菌株具有细菌致病岛的典型特征,因此称其为cag致病岛.其特征为:①含有许多毒力基因;②存在于致病菌株,在无毒株及弱毒株上不存在或很少出现;③其G+C含量与宿主菌不同;④占据较大的染色体区域(通常大于30kb);⑤为一紧密、明确的遗传学单位,两端通常为直接重复序列;⑥其侧面与tRAN基因和(或)插入序列相连;⑦载有(通常为隐性的)"可移动"基因;⑧具有不稳定性.