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钙视网膜蛋白在全结肠无神经节细胞症不同肠段的表达及临床意义
目的 研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)在全结肠无神经节细胞症(total colonic aganglionosis, TCA)不同肠段的表达,探讨其临床意义.方法 收集华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院2010至2016年TCA行回肠结肠根治手术病例9例,另选取9例因其他疾病切除肠管的正常手术切断缘作为对照.对其进行常规HE及免疫组织化学EnVision法染色,观察CR在结肠、回肠及TCA不同肠段中的表达模式,并对黏膜固有层及黏膜肌层内CR阳性纤维进行计数,同时应用图像分析软件(Image-Pro-Plus)判定CR阳性染色在黏膜固有膜内的平均吸光度,分析其在不同肠段中的表达差异.结果 CR在回肠和结肠中的染色模式相似,含神经节细胞的回肠和结肠黏膜固有膜和黏膜肌层均可见CR染色阳性纤维,其数量差异无统计学意义(P>0.05);无节细胞的回肠和结肠CR阳性纤维数量显著少于对照组和切断缘(P<0.01);回肠移行段黏膜CR阳性神经纤维数量明显少于回肠切断缘(P<0.01),其黏膜下及肌间可见小的神经丛,CR神经纤维呈不连续的束状染色.结论CR在TCA含节细胞肠段和无节细胞肠段的表达存在显著差异,具备辅助诊断TCA的潜在价值,有望成为诊断TCA的重要方法.
关键词： 肠疾病 Hirschsprung病 免疫组织化学 钙视网膜蛋白 -
钙视网膜蛋白在先天性巨结肠不同肠段的表达差异及其临床意义
先天性巨结肠是以远端肠道神经节细胞完全缺如为特征的先天性畸形，结肠黏膜病理活检是术前确诊先天性巨结肠的重要的手段。钙视网膜蛋白（ calretinin，CR）是一种重要的钙结合蛋白， CR参与神经细胞胞内的调节。国外文献报道［1－2］，CR在先天性巨结肠不同肠段的表达模式存在差异，提示CR免疫组织化学染色可能作为临床诊断先天性巨结肠的一种新的手段。国内马能强［3］及张艳［4］等使用数字分析软件发现先天性巨结肠肠管痉挛段和扩张段黏膜下层及肌间区CR存在差异。我们拟使用免疫组织化学技术对含节细胞及无节细胞的肠管进行CR染色，并分析其染色模式，了解CR在先天性巨结肠患儿切除肠段中的表达，为临床使用CR免疫组织化学染色诊断先天性巨结肠打下基础。
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胆囊恶性腹膜间皮瘤一例
患者女，68岁，因腹部胀痛不适2个月加重伴突发右上腹剧痛2h入院。患者于2个月前无明显诱因出现腹部胀痛不适，以右上腹为重，伴腹部胀满，无发热，伴纳差、食欲不振。2h 前突发右上腹持续性剧痛，阵发性加重，向后背部放射，并伴恶心、呕吐等，无寒战发热。既往37年前有石棉接触史。入院查体：体温36．0℃，脉搏80次／min，呼吸20次／min，血压130／80 mmHg （1 mmHg＝0．133 kPa）。痛苦病容，心肺无明显异常，腹部饱满，全腹压痛，右上腹为重，无反跳痛，肝区叩击痛，Murphy征阳性，肝脾未及，移动性浊音可疑阳性，肠鸣音正常，双下肢无水肿。辅助检查：胸片未见异常。上腹部CT：胆囊不大，底部壁明显增厚，胆囊及胆总管内可见多发类圆形高密度影，肝内、外胆管扩张，腹腔可见少量腹腔积液（图1）。诊断：胆囊及胆总管多发结石，胆囊炎穿孔并腹腔积液。血常规、肝功能正常。肿瘤标记物：CEA 1．2 mg／L，CA19-95．0 mU／L；腹腔积液常规：总细胞4．88×109，有核细胞1．24×109，多核细胞0．02，未见肿瘤细胞。入院后予以抗炎治疗，效果不佳，行剖腹探查术。术中见：肝表面光滑无结节，胆囊化脓与周围组织粘连，可见少量脓液，大网膜增厚，散在分布大小不等灰白色结节，胆囊床与周围组织粘连，将胆囊充分游离，钳夹胆总管，切除，并行大网膜切除术。术后病理示：（胆囊）恶性上皮型间皮瘤（图2，3），局部瘤组织侵及黏膜层，部分组织凝固性坏死及炎细胞浸润，免疫组织化学染色：波形蛋白抗体（Vimentin）（＋）（图4，5），钙视网膜蛋白（Calrentinin ）（＋）（图6，7），间皮细胞（mesothelialcell，MC）（＋）（图8，9），细胞角蛋白抗体（cytokeratin，CK）（＋）（图10，11），CEA （－）（图12），肝细胞（－）（图13）。患者术后再次出现腹腔积液，未行进一步治疗，自动出院。术后4个月随访，患者死于肠梗阻。
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阴茎根部血管肌纤维母细胞瘤一例报告
患者，19岁。因发现阴茎右侧根部无痛性包块并进行性增大4年余于2014年10月22日入院。4年前患者无意间发现阴茎右侧根部一包块，呈绿豆大小，无不适，未诊治，包块进行性长大如鸽蛋大小。查体：右侧阴茎根部可见一圆球形隆起，质韧，活动度良好，无粘连，无红肿、压痛。行Valsalva动作后隆起无明显增大，平卧后隆起不能回纳腹腔。泌尿系彩色多普勒超声检查未见异常。术前诊断：阴茎右侧根部占位性质待查。行肿物切除术。术中切开皮肤和浅筋膜后见一灰褐色肿物，大小约5．0 cm ×2．5 cm ×0．5 cm，有完整包膜，质软，与筋膜无明显粘连，未累及阴茎海绵体。游离周围组织，完整取出肿物。病理结果：肉眼见灰褐色结节样肿物一个，大小约5．0 cm ×2．5 cm ×0．5 cm，似有完整包膜，切面灰红、灰褐相间，质软，局部略呈胶冻样；镜下见肿瘤细胞纤细，呈上皮样，排列紧密，围绕在薄壁血管周围。免疫组化：肾母细胞瘤蛋白（部分＋）， CD34（＋）， Ki-67（约2％＋），结蛋白（灶＋），平滑肌肌动蛋白（灶＋），细胞角蛋白、人类上皮膜蛋白、D2-40、钙视网膜蛋白、S-100、CD68、雌激素受体、孕激素受体（-），提示符合血管肌纤维母细胞瘤。术后随访3个月，未见复发和转移。
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钙视网膜蛋白的结构与功能
钙视网膜蛋白(Calretinin)是钙结合蛋白(CaBP)家族成员,是神经细胞内重要的活性物质,对细胞质内Ca2+浓度具有缓冲作用.Ca2是细胞内重要的第二信使,在细胞内激活许多具有生理功能的酶或蛋白质,如依赖于Ca2+的蛋白激酶C和钙结合蛋白,参与多种代谢、骨骼肌/心肌收缩、神经反应冲动传导.Calretinin优势表达于中枢神经组织,此外还表达在睾丸(主要在Leydig细胞)、卵巢、肾上腺等合成类固醇的器官.Calretinin表达于不同的部位,其功能亦有异同,在细胞质调节激素合成,在细胞核内对细胞分化、发育、增殖、凋亡等也有调节作用.因此,Calretinin在生殖内分泌领域的作用逐步受到重视.
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美满霉素对沙鼠急性脑缺血后脑皮质钙视网膜蛋白表达的影响
目的:观察美满霉素对蒙古沙鼠短暂性脑缺血再灌后前额皮质中钙视网膜蛋白Calretinin(CR)表达的影响,为进一步研究其生理功能及治疗提供参考.方法:42只健康雄性蒙古沙鼠随机分为:正常组对照组、缺血再灌组,美满霉素治疗组.夹闭蒙古沙鼠双侧颈总动脉10 min诱导前脑缺血后,动物分别存活1天、3天或7天.用免疫组化方法检测前额皮质中CR的表达,用图像分析仪测定灰度值.结果:与正常组相比,缺血再灌组与美满霉素治疗组中前额皮质中CR表达均先减少后升高再下降.缺血再灌1天组,CR表达显著减少(P<0.05);3天组CR表达达到高峰(P<0.05);7天组CR表达减弱,但仍高于正常组(P<0.05).美满霉素治疗各组中的CR表达均弱于对应的缺血再灌组(P<0.05).结论:美满霉素能抑制蒙古沙鼠脑缺血再灌注后脑皮质中CR的表达来发挥脑保护作用.
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Calretinin在先天性巨结肠中的表达及其意义
目的 探讨钙视网膜蛋白(calretinin,CR)在先天性巨结肠(HD)中的表达及其意义. 方法对18例HD扩张段结肠和痉挛段结肠行免疫组织化学染色.利用图文分析系统观察染色表达情况. 结罘CR在HD患儿扩张段肠壁神经节细胞及神经纤维内表达,免疫反应强阳性,CR蛋白表达稳定.而HD患儿痉挛段CR蛋白表达明显减弱,近乎缺失. 结论CR可以作为HD诊断的一个辅助指标.
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直肠黏膜活检组织行钙视网膜蛋白、S100及PGP9.5联合染色对先天性巨结肠症的诊断价值
目的 评估直肠黏膜负压吸引活检组织行钙视网膜蛋白(CR)、S100蛋白(S100)及蛋白基因产物9.5 (PGP9.5)染色诊断先天性巨结肠症(HD)的准确性.方法 2014年6月至2017年1月,华中科技大学同济医学院附属协和医院就诊的疑似HD患儿318例,在进行详细的病史调查及体检后行直肠黏膜负压吸引活检,取得的标本进行CR、S100、PGP9.5免疫组织化学染色,观察是否有神经节细胞及粗大增生的神经纤维来诊断HD,并与术后病理检查结果比较,评估其诊断HD的准确性.结果 318例患者进行该诊断方法,其中219(69％)例显示有神经节细胞,99例(31％)缺乏神经节细胞,在这99例中,S-100蛋白及PGP9.5染色分别显示有92％和93％的患儿含有黏膜下粗大的神经纤维.132例患者终行结肠切除术,其中,99例术后病检证实了HD.该方法的准确性和特异性分别为97.0％ [95％可信区间(CI):88.0％ ～99.0％]和100.0％ (95％ CI:97.0％～100.0％),阳性预测值为94.3％ (95％ CI:87.0％ ～ 99.0％),阴性预测值为99.1％ (95％ CI:95.0％～100.0％).结论 CR、S-100和PGP9.5染色之间能通过优势互补,提高直肠黏膜负压吸引活检诊断HD的精准性.
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钙视网膜蛋白和乙酰胆碱酯酶在新生儿先天性巨结肠症直肠黏膜活检病理诊断中的应用
目的 探讨钙视网膜蛋白(calretinin,CR)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)在新生儿先天性巨结肠症(Hirschsprung's disease,HSCR)直肠黏膜活检病理诊断中的应用价值.方法 收集2015年1月至2016年1月新生儿直肠黏膜活检标本62例.此62例患儿均有出生后反复出现腹胀、便秘、胎便延迟和/或呕吐等症状,临床诊断或疑诊HSCR.其中,男47例,女15例;年龄为3～28 d,平均17 d.在显微镜下观察黏膜下神经节细胞和神经纤维直径,免疫组织化学标记CR和酶组织化学染色AchE.根据直肠黏膜活检标本黏膜下HE染色有、无神经节细胞将患儿分为非HSCR组和HSCR组,比较两组CR和AchE的表达.结果 HSCR组(49例)无髓鞘神经纤维直径在30～70μm,平均49.6μm;其中直径≥40μm 42例(85.7％),<40μm 7例(14.3％,30～38μm).CR无阳性表达患儿.AchE阳性45例(91.8％),阴性4例(8.2％).非HSCR组(13例)无髓鞘神经纤维直径<25μm者12例(92.3％);神经纤维直径35μm者1例(7.7％).CR阳性13例(100％);AchE阳性1例(7.7％),阴性12例(92.3％).CR表达在HSCR诊断中的敏感性和特异性为100％(12/12),98.0％(49/50);阳性预测值为92.3％(12/13),阴性预测值为100％(49/49).AchE在HSCR诊断中的敏感性和特异性分别为93.9％(46/49)和100％(12/12),阳性预测值100％ 为(46/46),阴性预测值为75.0％(12/16).结论 直肠黏膜活检HE染色结合CR和AchE的病理诊断,有助于提高新生儿HSCR病理诊断准确率,具有较好的应用价值.
关键词： Hirschsprung病 钙视网膜蛋白 乙酰胆碱酯酶 -
钙视网膜蛋白在先天性巨结肠肠壁的表达及其意义
目的 本研究应用免疫组织化学染色方法,观察对照组肠壁、先天性巨结肠症(Hirschsprung's disease,HD)患儿有神经节细胞段和无神经节细胞段肠壁神经组织中钙视网膜蛋白(Calretinin,CR)的表达结果,目的在于了解HD的病理生理改变以及寻找诊断先天性巨结肠的简便有效的方法.方法 收集苏州大学附属儿童医院小儿外科2005至2008年手术切除HD标本54例,包括HD扩张段与痉挛段.以15例年龄与之相符的无HD患儿的手术切除结肠标本作为对照组.分别对HD痉挛段、扩张段、对照组肠壁组织切片进行CR的免疫组织化学染色和HE染色,计算机成像系统照相存盘,用图像分析软件(Image-Pro-Plus)分别判定CR在HD扩张段与痉挛段神经丛中阳性染色面积百分比.所得数据用SPSS 12.0统计软件包进行处理分析.结果 ①无论是HE或免疫组化染色HD的扩张段神经节细胞皆存在,肌层神经纤维有不同程度的排列改变,神经节细胞大小不等；痉挛段均未见神经节细胞；②在正常结肠及HD扩张段肠壁免疫组化染色可见钙视网膜蛋白在肌间及黏膜下神经丛中对神经节细胞呈强阳性表达,神经纤维也呈阳性反应；而HD痉挛段肠壁的免疫组化染色则可见钙视网膜蛋白在肌间神经丛及黏膜下神经丛大多表达阴性(90.7％),仅少量呈弱阳性表达(9.3％)；③定量分析:CR分别在HD痉挛段之间神经丛中阳性染色面积百分率(0.00665±().00387)与其在HD扩张段神经丛中阳性染色面积百分率(0.26483±0.14626)存在差异,有显著统计学意义(P＜0.01).结论 钙视网膜蛋白免疫组化染色可很好的显示正常结肠及HD扩张段肠壁的神经节细胞及神经纤维,而在HD痉挛段该指标免疫组化染色结果呈阴性或弱阳性表达.钙视网膜蛋白可能作为诊断HD的神经标志物之一.
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钙视网膜蛋白在肠无神经节细胞症诊断中的应用
目的：分析钙视网膜蛋白在小儿肠无神经节细胞症诊断中的应用意义。方法回顾性分析本院自2011年1月1日至2014年12月31日收治的确诊小儿肠无神经节细胞症、肠神经节细胞发育异常症患儿术前直肠黏膜活检标本中钙视网膜蛋白的表达情况和 HE 染色结果、根治术或造瘘术后病变段钙视网膜蛋白表达情况和病理检查 HE 染色结果。结果①肠无神经节细胞症中术前直肠黏膜活检检查钙视网膜蛋白的表达在所有病例中阴性表达111／114例，HE 染色未见神经节细胞112／114例；根治手术后痉挛段肠壁中钙视网膜蛋白均呈阴性表达133／133例，HE 染色未见神经节细胞133／133例，而在扩张段的肠壁中钙视网膜蛋白的表达均呈阳性表达133／133例，HE 染色可见发育正常的神经节细胞133／133例；②肠神经节细胞发育异常症中术前直肠粘膜活检钙视网膜蛋白表达阴性4／4例，HE 染色见到发育不良神经节细胞1／4例，其余3例均未见到神经节细胞；根治术或造瘘术后病变段钙视网膜蛋白表达阳性42／42例，HE 染色见到神经节细胞发育异常或减少42／42例。结论钙视网膜蛋白染色可以作为肠无神经节细胞症的诊断依据之一，但仍然有假阳性及假阴性结果可能，特别是在术前直肠粘膜活检的应用中。
关键词： 钙视网膜蛋白 Hirschsprung 病 免疫组织化学 -
Calretinin和PGP9.5在先天性巨结肠诊断中的应用
目的:探讨Calretinin和PGP9.5在先天性巨结肠(HD)临床病理诊断中的应用.方法:将2015年1月至2017年12月在广东省妇幼保健院确诊的48例HD患者和20例非HD患者作为研究对象,分别在扩张段HD和狭窄段HD、非HD组织中行Calretinin和PGP9.5免疫组化染色.结果:48例HD扩张段中,40例可见成熟神经节细胞,8例见不成熟神经节细胞,Calretinin和PGP9.5均表达阳性.HD狭窄段Calretinin阳性1例,阴性47例;PGP9.5显示增粗神经纤维46例,无增粗2例.20例非HD中Calretinin表达阳性19例,1例神经纤维阳性,未见神经节细胞;PGP9.5均呈阳性表达.狭窄段HD与非HD中Calretinin阳性率、PGP9.5标记的增粗神经纤维比较,差异有统计学意义(P<0.05).初始诊断灵敏度和特异度分别为95.65％(95％CI,0.84-0.99)和95％(95％CI,0.73-0.997).结论:病理形态学诊断联合Calretinin和PGP9.5检测对于HD的诊断和鉴别诊断更加准确.
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钙视网膜蛋白在先天性巨结肠中的诊断价值
目的 探讨钙视网膜蛋白(calretinin,CR)诊断先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)的概率及意义.方法 收集我院2008年1月至2014年10月经病理检查确诊为HD病例共495例资料,包括钡剂灌肠(contrast enema,CE)、直肠肛管测压(anorectal manometry,ARM)、经直肠黏膜吸引活检(rectal suction biopsy,RSB)等结果,通过上述各项检查阳性率来比较其在诊断HD中的价值,并分析出现CR阴性结果原因.结果 495例HD患儿中,435例术前CE,265例术前ARM,254例CR检查,其中术前经RSB 112例,术后142例.CE、ARM及CR诊断阳性率分别为81.1％、90.6％、99.6％,其中CR阳性率术前为98.2％,术后达100％.结论 诊断HD需依靠病史、典型的临床表现及辅助检查,特殊辅助检查中CR阳性率术前为98.2％,术后达100％,因此CR可广泛用于临床,作为术前HD诊断的重要指标.
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钙视网膜蛋白在先天性巨结肠病理诊断中的应用
目的 研究钙视网膜蛋白( calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用.方法 采用回顾性研究的方法对比163例直肠黏膜活检CR免疫组织化学染色与AchE染色诊断HD准确性及敏感性.研究26例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检标本中,CR免疫组织化学染色辅助病理诊断的准确率.结果 在年龄＜3个月的病例组中,CR免疫组织化学染色敏感度显著高于AchE染色.CR免疫组织化学染色能够准确诊断21例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检HD病例.结论 CR免疫组织化学染色是一种优于AchE染色的直肠黏膜活检诊断HD的必要辅助方法.
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Bcl-2、钙视网膜蛋白在发育异常肠壁神经节细胞中的表达
目的 探讨Bcl-2和钙视网膜蛋白(calretinin,CR)在不同发育程度肠壁神经节细胞中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学染色观察Bcl-2、CR在40例先天性巨结肠病(hirschsprung disease,HD)、10例先天性巨结肠类缘病(hirschsprung's allied disease,HAD)和对照组肠壁神经节细胞的表达情况.结果 Bcl-2表达于发育较差的神经节细胞,在发育成熟的神经节细胞不表达.CR表达于发育成熟的神经节细胞,在发育较差的神经节细胞不表达或弱表达.结论 Bcl-2和CR在肠神经节细胞的特异性表达,有助于判断神经节细胞的成熟程度.Bcl-2在发育异常肠壁神经节细胞的功能维持和恢复上可能起到了重要作用.
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192例0～3个月先天性肠无神经节细胞症婴儿临床分析
目的：探讨钙视网膜蛋白在3个月内婴儿先天性肠无神经节细胞症（HD）的临床诊断价值；对采用经肛门直肠结肠斜形切除吻合术治疗3个月内婴儿HD进行随访及疗效评价。方法2008年1月至2014年10月该院确诊并行了经肛门直肠结肠切除斜形吻合术或肠造瘘术治疗3个月内婴儿HD 192例，收集其病案资料，并行根治术中期随访，评价其肛直肠功能及生活质量。结果192例 HD患儿中，139例行经肛门直肠结肠切除斜形吻合术，53例行肠造瘘术。术前诊断依据典型病史、体格检查及辅助检查，包括钡剂灌肠、直肠肛管测压和直肠吸引活检钙视网膜蛋白免疫组织化学染色，阳性率分别为80．1％、92．1％、97．9％。66例（60．5％）获中期随访，小肠结肠炎2例（3．0％），污粪2例（3．0％），无便秘复发、大小便失禁、肛门狭窄，男性患儿均有阴茎勃起现象，生长发育与正常婴幼儿相当。门诊随访25例，生化检查均在正常范围，15例钡剂灌肠检查显示肠道形态恢复良好；直肠肛管测压11例，10例（90．9％）肛门松弛反射恢复正常，1例未见松弛反射。结论钙视网膜蛋白免疫组织化学染色检查可作为3月内婴儿 HD术前诊断的金标准；经肛门直肠结肠斜形切除吻合术设计符合生理，并发症少，中期疗效满意，适合0～3个月小婴儿根治术。
关键词： 神经节 肠 婴儿 新生 先天性肠无神经节细胞症 钙视网膜蛋白 经肛门直肠结肠切除斜形吻合术 中期随访 -
Calretinin在新生儿先天性巨结肠中的表达及其意义
目的 探讨钙视网膜蛋白(CR)在新生儿先天性巨结肠(HD)中的表达及其意义.方法 选择10例新生儿因其他非肠神经节病变而行结肠手术的患儿结肠全层的病理标本作为对照组,50例新生儿HD狭窄段结肠肠壁作为实验组,分别行CR、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、S-100蛋白(S-100)免疫组织化学染色,显微镜下观察染色表达情况.结果 CR在对照组肠壁神经节细胞及神经纤维内表达强阳性,即正常肠壁黏膜下层和肌间层神经丛神经节细胞内呈棕黄色,弥漫分布于细胞胞浆,结肠黏膜细胞及肠壁肌细胞不着色;而CR在新生儿HD患儿痉挛段表达缺失.实验组患儿CR的检出率为100％,明显高于NSE检出率的86％和S-100检出率的94％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过CR免疫染色标记新生儿HD肠壁,对其诊断的敏感性大大提高,CR免疫染色可以作为新生儿HD诊断的一个辅助指标.
