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巨大血小板综合征的流式细胞术分析方法
巨大血小板综合征(bernard-Soulier syndrome, BSS)系常染色体不完全显性遗传的血小板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)Ib-Ⅸ复合物(CD42b-CD42a)先天缺陷所造成的血小板病, 其特征是血小板形态巨大、功能异常[1,2].检测血小板膜上GPIb和GPIX复合物的缺陷可从分子水平上特异性诊断BSS.本文介绍用两种荧光-单抗直接标记外周全血, 通过多参数流式细胞术分析诊断BSS的方法.
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免疫组化技术(二)
2 免疫组化理论2.1 免疫组织化学免疫组织化学是一项用抗原-抗体相互作用鉴别细胞或组织成分(抗原)的技术,抗体连接的位点可通过抗体直接标记或使用二级标记法鉴别.
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应用间期荧光原位杂交技术探讨cyclin D1 基因在乳腺癌中的扩增
本研究将用间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization，FISH)技术研究cyclin D1基因在乳腺癌中的变化，为乳腺癌的术后治疗与预后评估提供新的生物学信息。 1．材料与方法：（1）试验材料:选取40例经手术切除治疗而病理诊断为乳腺癌的肿瘤组织，按国际TNM分期法(UICC 1988年)临床上属Ⅰ、Ⅱ期患者20例,Ⅲ、Ⅳ期患者20例。（2）细胞悬液的制备:制备单个细胞悬液，在杂交前2～4 d，将单细胞悬液滴在经处理过的玻片上，自然风干备用。(3)探针的制备：Cyclin D1探针购自Vysis公司(Fluoro-phore直接标记，呈红色)。(4)间期荧光原位杂交检测方法:玻片用100 μl RNA酶(100 μg/ml)37 ℃消化1 h，于70%甲酰胺2×SSC中(73±1)℃变性5 min后脱水，风干；同时将探针混合液(Lysis 杂交Buffer 7 μl，探针1 μl，2 μl纯净水)置(73±1)℃水浴箱内变性5 min，然后将变性探针混合液加于变性的细胞玻片上，封闭，置37 ℃温箱杂交过夜。将盖玻片取下，放入45 ℃ 50% 2×SSC甲酰胺内10 min共3次，然后再放入2×SSC液中洗10 min，后在室温放入加入0.1% NP-40的2×SSC内洗5 min和1 min（室温）凉干，加4′,6-二联脒-2-吲哚苯(DAPI)补染，在荧光显微镜下观看结果。（5）观察结果分析标准：在荧光显微镜下，选取肿瘤细胞分析，观察细胞核内荧光杂交信号并计数。每例计数100～200个细胞核。信号4～10为轻度扩增，10以上为
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活体干细胞标记与示踪方法研究进展
干细胞(SC)是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞,广泛存在于血管、骨髓、脐带血、胎盘和脂肪等组织.因其具有良好的多分化潜能、伤口趋向性以及产生各种生长因子的能力,在心血管损伤、脊髓损伤、骨髓损伤、软骨损伤、肺损伤、肾病、糖尿病、自身免疫性疾病以及肿瘤等治疗中,具有良好的潜在应用价值[1-4].近文献[5]报道,间充质干细胞还具有癌灶趋向性,并表现出一定的抗癌作用.Sun等研究[6]发现,间充质干细胞可以抑制乳腺癌的生长及肺癌的扩散,可能应用于肿瘤的靶向治疗.因此,进行活体干细胞标记与示踪,了解干细胞移植人宿主体内后的走行、分布、分化情况,将有助于干细胞治疗技术的深入研究和应用.现将干细胞标记与示踪方法研究进展综述如下.
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正电子发射断层显像对药物研究及开发的价值
随着正电子发射断层显像(PET)技术的迅速发展,其对药物研究及开发的价值正越来越受到重视.PET可以定量测量药物在活体内的分布及随时间的变化.既可以用发射正电子的核素直接标记药物进行研究,也可以用间接的方法研究药物与受体的竞争结合,以及对各种功能和代谢的影响.在药物发现及开发过程中的各阶段PET都有潜在的应用价值.本文在简介PET原理的基础上,重点对以上方面的应用价值予以综述.
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系统性红斑狼疮患者血小板活化的流式细胞术检测
系统性红斑狼疮（SLE）特别是肾脏受累者常伴发高凝状态，易引起肾内微小血栓形成，是影响SLE患者预后的重要因素之一。我们以检测全血中血小板表面P-选择素的阳性表达率和血小板大聚集率（PAmax），了解SLE患者体内血小板活化程度，并初步探讨其临床意义。对象和方法 一、对象：SLE组，按美国风湿病学会1982年制定的SLE诊断标准确诊，32例住院病人，男3例，女29例，年龄21～38岁，平均26.7岁；其中有肾脏受累21例。14例曾用糖皮质激素、环磷酰胺（CTX）或骁悉（MMF）及抗凝、抗血小板聚集等治疗，18例初发者未用上述药。所有患者均无明显感染并除外可引起高凝、血栓形成性疾病及其它免疫性疾病。对照组，体检健康的本院工作人员20例，男7例，女13例，年龄18～48岁，平均35.9岁。 二、方法：（1）P-选择素测定：分别吸取磷酸缓冲液（PBS）100μl至对照管、测定管中，各加入2％EDTA（Na2）抗凝全血5μl，然后对照管加入异硫氰酸荧光素（FITC）直接标记的小鼠IgG1，测定管加入FITC直接标记的抗CD62P（GMP-140）单克隆抗体（法国国际免疫技术有限公司生产），室温下避光孵育25～30分钟，加入2ml PBS，流式细胞仪（美国Coulter公司生产，EPICS XL）检测，P-选择素的表达率以阳性细胞百分比表示。（2）PAmax测定：3.8％枸橼酸钠抗凝的肘静脉血2ml，ADP诱导比浊法（浓度0.5μmol／L），TYXN-91型智能血液凝集仪（上海通用电机厂生产），按操作程序2小时内测定。（3）数据以±s表示，显著性用t检验。
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125I标记CD44v5胃癌单抗的实验研究
本实验采用125I直接标记CD44v5单抗，对裸鼠的胃癌转移模型进行显像研究及125I-CD44v5单抗裸鼠体内脏器的分布研究，报道如下。材料和方法 一、试剂及仪器：胃低分化腺癌细胞株系GC-803细胞株，上海细胞所提供；8周龄的 BALB／C裸鼠，体重20g左右，上海肿瘤所提供；无载体Na125I，放射性活度14.6GBq／ml，中国核动力研究设计院产品；Iodogen，美国Pie rce公司产品；CD44v5单抗，北京中山生物有限公司提供；放射性活度测量仪，NE-1612英国核仪器公司产品；SPECT为德国西门子公司的EL-370 0型。 二、CD44v5单抗的125I标记及标记化合物的纯化：125 I标记CD44v5单抗采用Iodogen法［1］，用三氯醋酸沉淀法测定放射化学纯度及检查125I-CD44v5单抗的体外稳定性。 三、裸鼠胃癌转移模型的建立：将胃低分化腺癌细胞系GC-803细胞株，置于含10％胎牛血清RPMI-1640培养液中，在5％CO2、37℃培养箱中培养传代，取第三代细胞，于每只裸鼠颈部皮下注射2×106个肿瘤细胞，共注射10只裸鼠，6周后观察有8只颈部皮下出现平均直径0.6cm、体积约0.3cm3大小的肿块，裸鼠一般状况较好。于注射125I-CD44v5单抗前三天开始口服0.3％的碘化钾溶液以封闭甲状腺。
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移植后细胞示踪的研究进展
当前主要的细胞标记示踪研究的方法主要有:侵入性的病理学标记示踪和非侵入性显像模式,后者包括直接标记示踪(磁共振显像和放射性核素显像)和报告基因显像,可以为个人受试者提供实时监测.
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188Re直接标记抗体方法研究
以2-巯基乙醇作为抗体的还原剂,葡萄糖酸钠作为中间弱配体,在pH5.0的条件下,以SnCl2快速还原188ReO4-,进行了单克隆抗体IgG的直接标记.探讨了影响标记率的因素.结果显示,优化后的标记条件为pH5.0,室温下标记3 h, SnCl2用量2.66 μmol, 葡萄糖酸钠用量80 μmol.该方法操作步骤简单方便,标记率较高,为94.4%±0.7%,标记物不需分离纯化,且有良好的体外稳定性,室温下可稳定保存8 h.
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188Re直接法标记抗人结肠癌单克隆抗体CL-3的研究
本工作对188Re直接标记抗人结肠癌单克隆抗体CL-3的方法进行了详细的研究.以抗坏血酸作为抗体的还原剂,以SnCl2-柠檬酸还原188ReO4-溶液,进行抗体的直接标记.本方法操作简单、方便;标记率高(>95%)胶体含量小(<5%);标记完后不需纯化分离;标记物有良好的体外稳定性和较高的免疫活性,具有药盒化的前景.
关键词： 188Re 直接标记 抗人结肠癌单克隆抗体CL-3 -
188Re直接标记单克隆抗体TGLA及其生物学评价
单克隆抗体TGLA是一种特异性靶向CD20的嵌合抗体,能有效杀伤肿瘤细胞和抑制肿瘤细胞增长,已用于B细胞淋巴瘤的临床治疗.本研究采用直接标记法,制备188 Re-TGLA,并优化了标记条件.在佳标记条件下,标记率可达93％,体外放置24 h后,放化纯度≥85％,体外稳定性良好.荷淋巴瘤裸鼠体内分布结果表明,188 Re-TGLA在肿瘤的摄取较高,在24 h时为(6.46±2.01)ID％/g,提示188Re-TGLA可以作为一种有效的显像剂,但是为了更好的显像效果,可使用抗体片段进行标记,以缩短抗体的体内半衰期,更好地与188 Re匹配.
