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乳铁蛋白酶免疫分析法的建立及乳品含量检测的初步应用
目的:建立乳铁蛋白(LF)酶免疫分析法,检测LF在血清及乳汁中的水平.方法:用人源的LF多次免疫兔,获得高效价的抗体.纯化后包被成固相酶标板,以识别并结合待测标本中的LF.用生物素标记抗原(Bio-AS),同辣根酶标记亲和素(HRP-A)可特异结合.向固相酶标板中同时加入Bio-AS和不同浓度的标准品,37℃反应1.5h.洗涤后以HRP-A为探针,经酶底物显色后可获得良好的ELISA竞争抑制曲线.结果:该法测定范围:(0.36~9.00)μg/ml,低检出量0.25μg/ml,批内和批间误差分别为<6.3%和7.4%.用该法测正常献血员(40名)血清LF水平为(0.438±0.183)μg/ml;人初乳(5名)水平为(7.82±0.51)ms/ml.血清和初乳中的LF经65℃30min处理后活性不变,经100℃ 3min处理明显降解.结论:该法稳定、简便、特异适于检测人血清和乳汁中的LF水平.
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化学发光法测定血清SCC正常参考值的调查
鳞状细胞癌抗原(SCC)在原发性和复发性鳞状细胞癌,特别是对于耳、鼻、咽喉区域肿瘤中对病程和疗效的监测有很大的临床意义.SCC的常用测定方法有放射免疫分析、酶联免疫分析、免疫比色法和化学发光法,各种方法的正常人群参考值有所不同.随着化学发光法的日益推广,SCC的临床应用日渐受到重视.我们应用美国Abbott公司i2000型化学发光仪测定了1229例正常人的SCC值,旨在建立化学发光法检测的正常人群参考值,以供临床参考.
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两种检验AFP方法的相关与回归分析
在定量免疫分析中,一个指标往往有多种检测方法,如放射免疫分析、酶联免疫分析、(电)化学发光免疫分析,等等,在试剂来源方面更是五花八门.于是,同一个指标不同检测之间的相关性研究在学术期刊中经常见到,其中多的是直线相关与回归分析.
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空腹胰岛素放射免疫分析与发光酶免分析的结果比较
我们用放射免疫分析和化学发光酶联免疫分析,同时检测150名健康人,61例非糖尿病和62例糖尿病患者的空腹胰岛素(FINS)水平,现将结果报道如下.
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IgG3酶联免疫分析方法的建立及初步应用研究
目的:建立IgG3酶联免疫分析(ELISA)方法,探讨IgG3在炎症性疾病患者血清中的水平变化.方法:用兔抗人IgG3的多克隆抗体包被成固相酶标板,以识别结合待测标本中的IgG3,再用此多克隆抗体标记生物素(Bio-Ab),用亲和素标记辣根过氧化物酶(HRP-A),向固相酶标板中加入标准品或待测品,反应、洗涤后,加入Bio-Ab,反应、洗涤后,加入HRP-A,反应、洗涤后,酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物,加酶底物显色,用酶标仪在相应波长下测定光密度(OD值),根据标准曲线,计算出待测标本中的IgG3含量.结果:该法测定范围为(1.875~60)ng/ml,低检出量1.5ng/ml,批内和批间误差分析<8%和10%.用该法测得正常青年人血清IgG3含量为(12.91±4.25)ng/ml(n=64),风湿病患者为(11.23±4.64)ng/ml(n=64),肺部感染患者为(9.32±2.00)ng/ml(n=24),后两组血清IgG3水平均显著低于正常青年人(P<0.05).结论:我们建立的IgG3 ELISA方法稳定、简便,特异性和灵敏度高,适于检测人血清IgG3水平的变化.
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冠心病患者血浆BNP、HCY、CRP水平变化分析
目的:检测冠心病患者血浆中BNP、HCY、CRP水平变化,探讨冠心病发病机制及不稳定性心绞痛治疗前后对其影响.方法:用化学发光和酶联免疫分析,对146例冠心病患者和30例正常对照者血浆BNP、HCY、高敏-CRP水平变化及相关性进行研究,同时对52例UAP经皮冠状动脉成形术(PTCA)治疗前后对上述三项指标的变化进行分析.结果:冠心病患者与正常对照组比较BNP水平有显著性差异(p<0.01),尤其是AMI和UAP组比SAP组升高更明显;CRP水平比正常对照组明显增高(p<0.05),特别是不稳定心绞痛和急性心肌梗塞组升高明显(p<0.001);AMI组血浆中HCY水平明显高于正常和其它两组,HCY、CRP、BNP三项在UAP组中治疗前后比较差异显著(p<0.05).结论:BNP、CRP、HCY参与了冠心病的发病过程,并可预测心肌梗塞病人远期心功能恢复的情况,UAP组经PTCA支架术后三项指标均明显降低,可作为疗效观察的一个重要参数,HCY参与了冠状动脉粥样硬化的全过程及急性心肌梗塞的发病始末.但其参与的机制有待进一步探讨.
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弓形虫抗原、抗体测定对慢性头痛的临床意义探讨
本文对60例有猫狗密切接触的慢性头痛患者进行了血清弓形虫循环抗原(CAg)、抗体(IgA、IgM、IgG)酶联免疫分析检测,并对测定结果予以讨论,以探讨此法对弓形虫感染引致慢性头痛的临床诊断意义.材料和方法一、病例选择:60例患者均按<中国医学百科全书@神经医学>头痛章节的标准诊断为慢性头痛[1],其疼痛主要特点和性质类似于"肌收缩性头痛"或"功能性及精神性头痛",并经包括脑CT或MRI等检查,排除了偏头痛、脑血管疾病头痛、颅内压力改变性头痛,脑肿瘤性、脑外伤性、颅内感染性、癫痫性头痛及头面部、五官疾病、颅骨及颈椎病变等引起的典型头痛.其中男33人、女27人;年龄为19~60岁,平均31.5岁.头痛病程1~30年,均具有与宠物(猫与狗)密切接触史.另对门诊30名(男17,女13)无饲养动物史的健康体检者(年龄20~62岁,平均33.2岁),作为对照进行检测.
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两种测定视黄醇结合蛋白方法的比较
尿视黄醇结合蛋白在正常人尿中含量甚微,当肾小管蘑吸收功能受到损伤时,其含量会明显增加,且升高的程度与肾小管损伤程度密切相关.目前对其检测方法有多种,如放射免疫分析法(RIA),酶联免疫分析法(ELISA),免疫透射分析法,免疫散射分析法等.
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不同因素对酶联免疫法测定破伤风免疫球蛋白活性的影响
目的 考察不同因素对酶联免疫法(ELISA)测定破伤风免疫球蛋白生物活性的影响.方法 将破伤风免疫球蛋白加入不同pH的缓冲液、不同浓度的氯化钠、硫酸铵以及聚乙二醇(PEG,相对分子质量为1 000,6 000和10 000)溶液,采用ELISA法测定其活性.结果 pH 5~9的缓冲溶液对活性测定的影响不大,而pH≤4和≥10的缓冲溶液都会使测定值显著降低,当pH<2或pH>12时,活性下降到正常值的10%以下.随氯化钠浓度的增加测定值先下降到正常值的37.3%,后回升到41.2%,再下降;随硫酸铵浓度的增加测定值先下降到正常值的67%,后回升到99.4%,再下降.PEG对活性测定有较大影响,随PEG浓度的增加活性测定值降低.结论 缓冲液pH、盐以及PEG对破伤风免疫球蛋白活性测定有影响.
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抗癌胚抗原单克隆抗体的制备和初步应用
[目的]生产抗癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体(McAb),制备检测血清CEA含量的酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒.[方法]用亲和层析法纯化的CEA抗原免疫BALB/C小鼠,经细胞融合挑选出两株适用于CEA ELISA试剂盒的McAbs进行重点鉴定.用ELISA法测定亲和力常数和免疫球蛋白亚类,用中和抑制法和免疫印迹电泳法鉴定特异性.[结果]两株McAbs均为鼠IgG1亚类,其亲和力常数分别为1.03×10-9M和2.25×10-9M,只有CEA阳性血清能抑制McAbs与包被CEA的反应,免疫印迹电泳显示两株McAbs只与200kDa的CEA形成一条带,所组成的试剂盒与放射免疫分析试剂盒比较,其灵敏度为96.60%,特异性为99.11%,总符合率为98.52%.[结论]两株McAbs具有较好的特异性和亲和力,用该两株McAbs组成的ELISA试剂盒可以应用于临床检测CEA.
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脂蛋白对培养巨噬细胞表达噬巨细胞移动抑制因子的实验研究
目的:探讨不同脂蛋白对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子基因和蛋白水平的影响.方法:28SC人巨噬细胞株用含有1×105 U·L-1青霉素、100mg·L-1链霉素和10%FBS的RPMI-1640培养基于37℃,5%的CO2中培养.以每孔1 × 104个细胞接种于6孔板中,每孔2ml培养液,加入终浓度为150 mg·L-1的不同脂蛋白,于37℃共同孵育24h收集细胞和培养介质.采用RT-PCR和ELISA分别测定MIF mRNA和蛋白表达水平.结果:巨噬细胞有MIF表达,低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂组诱导巨噬细胞MIF mRNA和蛋白表达水平,试验组较正常对照组升高(P<0.05);而高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白组诱导巨噬细胞MIF mRNA和蛋白表达水平,试验组与正常对照组变化相近(P>0.05).结论:不同脂质对巨噬细胞MIF mRNA和蛋白表达作用不同.MIF可能参与了低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂所致的动脉粥样硬化进程.
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肝病患者餐后2小时血清总胆汁酸测定的临床应用价值
血清总胆汁酸测定是一个灵敏的肝功能指标,反映肝实质性损伤,是唯一可以反映肝脏分泌状态、肝脏合成与代谢、肝细胞损伤三方面的血清学指标[1].测定TBA的技术较多,有气相色谱、高效液相色谱、放射免疫分析、酶联免疫分析及普通酶比色法[2].
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氩氦刀治疗前列腺癌对特异性细胞免疫功能的影响
研究氩氦刀治疗前列腺癌后,血清前列腺特异性膜抗原(PSMA)水平变化及特异性激活细胞毒性T淋巴细胞的效应.12例确诊前列腺癌患者,氩氦刀治疗前后EIA法检测PSMA,混合淋巴细胞反应检测特异性细胞毒性T淋巴细胞的增殖.结果表明:氩氦刀治疗后,血清PSMA升高,并可显著刺激特异性T淋巴细胞增殖,与对照组比较具有显著性差异(P<0.01).说明氩氦刀治疗可有效激活机体PSMA特异性的T细胞.
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CD163与2型糖尿病视网膜病变的相关性研究
目的:探讨外周血单核细胞表面血红蛋白清道夫受体(CD163)及血红素氧合酶-1(HO-1)的表达血与2型糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法:选择经确诊为2型糖尿病患者无视网膜病变组(NDR)60例;背景期DR组(BDR)58例;增殖期DR组(PDR)62例。同时选择50例老年单纯白内障患者做对照组。应用流式细胞仪检测全血单核细胞表面CD163表达水平,采用酶联免疫分析法对血液的HO-1进行检测。结果:T2DM患者CD163、HO-1随着病程的进展逐渐升高,同对照组比较有显著性差异(<0.05);CD163及HO-1与DR病程均呈正相关,相关系数分别为r=0.578(<0.05)和r=0.536(<0.05);各患者组之间比较亦有明显差异(<0.05)。结论:CD163和HO-1与糖尿病视网膜病变有关,能促进视网膜病变的发生发展。
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电化学发光法检测肿瘤标记物的探讨
肿瘤标志物(Tumor Marker)顾名思义是反应肿瘤各项指标的物质。肿瘤标志物一般不存在于正常的人体组织,仅见于胚胎组织,由于肿瘤细胞的无限增殖使其原始细胞增多,这些肿瘤标志物也超出了正常组织的含量,从而提醒了肿瘤存在的形态、方式、肿瘤的分化情况及愈后情况等[1]。故检测人体中肿瘤标志物的含量可以监测病人病情以及观察治疗的效果。临床实验室用于检测肿瘤标志物的方法主要包括酶联免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析等,而电化学发光免疫分析测量技术,具有更高灵敏度、稳定性和无放射性污染等优点,相对于其他传统方法具有较大的优势。下面从几个具体的试验比如回收实验和精密度实验,并采用对10份合格血清标本的AFP含量进行对比实验检测,并对检测结果进行了统计分析和比较,旨在进一步了解电化学发光免疫分析法对肿瘤标志物检测的影响[2]以及EcLIA和其他传统的检测方法的差异,从而提高肿瘤标志物的检测率,以提高服务的质量。
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酶联免疫分析法测定水产品中氯霉素残留量
目的:建立测定水产品中氯霉素残留量的ELISA分析法.方法:对不同样品采用不同的前处理方法,用ELISA方法进行检测.结果:方法检测限为0.01μg/kg;在0.5μg/kg和2.μg/kg两个添加水平,样品加标平均回收率分别为72%~116%和86%~108%;重复性实验:RSD分别为1.8%~6.2%和6.5%~7.8%;重现性实验RSD分别为3.8%和5.9%.结论:本方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于水产品中氯霉素残留量的快速检测.
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酶联免疫分析法测定水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量
目的:建立测定水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量的ELISA分析法.方法:对不同样品采用不同的前处理方法,用ELISA方法进行检测.结果:方法检测低限为:10 ug/kg;在10 ug/kg和20 ug/kg两个添加水平,样品加标平均回收率分别为74.0%~100.0%和82.0%~102.0%;重复性试验:RSD分别为3.5%~4.9%和4.5%~5.8%;重现性试验:RSD分别为5.4%和4.9%.结论:本方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量的快速检测.
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VEGF、TNF-α、Cys C、脂联素联合检测对2型糖尿病肾病患者早期诊断的观察与研究
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及抗体、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胱抑素C(Cys C)、脂联素(adiponectin)、空腹血糖(FPG)联合检测对2型糖尿病肾病患者早期诊断的临床应用价值.方法 选择确诊为2型糖尿病肾病患者146例为糖尿病组同时选择40例健康正常人为对照组.应用酶联免疫分析法(ELISA)对VEGF及抗体、TNF-α、脂联素进行检测,采用日立公司7600自动生化分析仪检测Cys C、FPG.结果 糖尿病组VEGF、VEGF抗体、TNF-α、Cys C表达显著上调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与病情的进展呈正相关;而脂联素浓度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),随病程进展血清脂联素含量呈递增趋势,脂联素与FPG水平呈负相关.结论 VEGF是血管和淋巴内皮细胞的生长和分化及正常和异常血管新生的重要的调节因子,在生理和病理性血管新生中起重要作用.TNF-α是重要的炎性反应因子,与Cys C、脂联素共同参与糖尿病肾病的发生、发展,联合检测有助于2型糖尿病肾病患者病情及预后的判断.
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林蛙卵雌二醇的超声波辅助提取及酶联免疫分析检测
目的 以长白山林蛙卵为原料,利用超声波辅助提取雌二醇.方法 在单因素试验的基础上,采用Design-Expert软件中的Central-Composite中心组合设计,确定林蛙卵提取雌二醇的佳工艺条件,建立回归数学模型.结果 曲面回归方程拟合性好,雌二醇提取的佳工艺条件:提取时间60min;乙醇浓度为80%;超声功率250W;提取温度70℃;料液比1∶10.在此试验条件下,采用酶联免疫分析-(ELISA)检测得到雌二醇含量为62.39 ng/L.结论 实验为林蛙卵资源的综合利用和天然雌激素的开发与应用提供了理论依据.
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分子印迹聚合物的制备及其在临床药物分析中的应用进展
本文综述了近年来以分子印迹材料为基础的药物分析新方法及其在临床样本(血浆、尿液)中的应用,详细评述了基于分子印迹技术的固相萃取、固相微萃取、磁性固相萃取、传感器和酶联免疫分析等新进展,为我国临床药物分析新方法研究提供参考.