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044 伏马毒素B1酶联免疫分析方法研究
伏马毒素B1是由串珠镰刀菌属产生的毒性较大的一种真菌毒素,国内外对检测伏马毒素B1的酶联免疫吸附分析方法进行了许多研究.本文主要对酶联免疫分析中的完全抗原制备、抗体的制备以及酶联免疫检测形式进行概述.
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谷物中伏马毒素B1化学发光酶免疫检测
伏马毒素是20世纪80年代末期发现的一类由串珠镰刀菌(Fusarium moniliform Sheldon)产生的真菌毒素,主要存在于谷物中,以玉米居多.伏马毒素与马脑白质软化症、猪肺水肿症侯群以及人类食道癌等人畜疾病有关.化学发光酶免疫测定(chemiluminescent enzyme immunoasssay,CLEIA)属于酶免疫测定,通过加入增强剂以增强发光和延长发光时间的增强化学发光反应(enhanced chemiluminescence,ECL),比传统的酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有更高的灵敏度,且检测所需时间短、费用低.
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伏马毒素B1时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制
目的:为快速检测食品中的伏马毒素B1 (fumonisin B1,FB1),制备抗FB1的单克隆抗体并利用该抗体研制基于时间分辨免疫荧光分析方法的检测试剂盒.方法:在建立抗伏马毒素B1单克隆杂交瘤细胞株的基础上,采用小鼠腹腔注射法生产大量腹水,经Protein A亲和层析柱分离纯化、透析后得到单克隆抗体,利用所得抗体建立间接竞争性时间分辨免疫荧光分析试剂盒并优化各参数:线性范围、检出限及与黄曲霉毒素(aflatoxins,AFB1)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)和载体蛋白BSA等的交叉反应性；对试剂盒稳定性采用37℃破坏实验；采用3个浓度的加标回收试验确定回收率；对19份样品及FB1玉米盲样进行检测,并同时用市售ELISA试剂盒进行验证.结果:所研制试剂盒的低检出浓度为2 ng/mL,检测线性范围为2～512 ng/mL,线性方程为Y=-0.644X+12.872 (R2=0.998),50％抑制浓度为10.07 ng/mL,加标提取后,玉米样品3个加标水平的回收率在78.32％～116.76％之间,与AFB1、DON和BSA均无交叉反应性,试剂盒常温下可保存315 d以上.结论:本研究建立了快速、敏感检测FB1的时间分辨免疫荧光检测试剂盒.
