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不稳定型心绞痛患者CD4+T淋巴细胞miRNA的差异表达
目的 通过检测不稳定型心绞痛患者循环血CD4+T淋巴细胞基因中miRNA的表达谱,筛选与正常对照者差异表达的miRNA,寻找对CD4+T淋巴细胞具有调控作用的miRNA,为进一步阐明miRNA在不稳定型心绞痛发病机制中的作用提供基础.方法 利用密度梯度离心法分离出不稳定型心绞痛患者和对照者外周血中的单个核细胞,免疫磁珠法进一步分离出CD4+T淋巴细胞.采用miRNA基因芯片技术检测CD4+T淋巴细胞miRNA的表达谱,通过分析软件筛选出不稳定型心绞痛患者和对照者CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA.实时荧光定量聚合酶链反应对差异表达的miRNA进行验证.结果 miRNA基因芯片筛选结果显示,相对于对照者,不稳定型心绞痛患者外周血CD4+T淋巴细胞中表达显著上调的miRNA有miR-155、miR-21、miR-424和miR-127-3p,显著下调的有miR-30b和miR-181a.实时荧光定量聚合酶链反应验证结果与芯片筛选结果一致.结论 筛选得到的不稳定型心绞痛患者循环血CD4+T淋巴细胞miRNA差异表达谱,可能参与了不稳定型心绞痛的发生发展.
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微小核糖核酸与心血管系统的生理病理关系
微小核糖核酸参与人体的多种生理、病理活动.近的研究表明,一些微小核糖核酸仅存在于心肌和骨骼肌中,病变心脏或血管申的微小核糖核酸表达谱与正常组织有较大差异.微小核糖核酸1、微小核糖核酸133和微小核糖核酸221/222等一些微小核糖核酸与心脏或血管的生成、形态发育及功能密切相关,在心血管系统生理和病理中发挥重要的作用.
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血清miR-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤诊断价值的研究
目的 分析血清miR-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤(RB)的诊断价值.方法 采用实时定量PCR法检测20例RB患儿、20名健康对照者的血清miR-17-92基因簇表达水平,分析其在不同分期RB患儿的表达差异及综合治疗前后的变化,并采用ROC曲线判断其对RB的诊断价值.结果 RB患儿血清中miR-17-92基因簇成员miR-17-3P、miR-17-5P、miR-18a和miR-20a的相对表达量均高于健康对照组,以miR-18a升高更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05);两组miR-19a、miR-19b-1和miR-92a-1相对表达量的差异无统计学意义(P>0.05).miR-17-5P、miR-17-3P、miR-18a和miR-20a表达量在早中期和晚期RB患儿之间的差异均无统计学意义(P>0.05),但综合治疗后表达量显著降低(P<0.05).miR-17-3P、miR-17-5P、miR-18a和miR-20a对RB诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.755、0.828和0.665,以miR-18a的AUC大,并具有较好的灵敏度(90%)和特异度(65%).结论 miR-17-92基因簇的miR-17-3P、miR-17-5P、miR-18a和miR-20a在RB患儿血清中高表达,miR-18a有可能作为RB诊断的新指标.
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MicroRNA 与头颈部肿瘤
MicroRNA(miRNA)是一类非编码的小RNA分子,在哺乳动物中表达非常丰富,对基因的翻译后调节有重要作用.microRNA在肿瘤细胞的发生与发展过程中起到多种作用,包括影响肿瘤细胞的分化,凋亡和增殖等.研究表明20%-3O% 的人类基因都受到microRNA的调控[1-2],目前已经得到精确验证的microRNA有400多种[3],约为人类编码蛋白基因数量的1%-2%,还有大量预测的microRNA基因需要通过实验验证.近年来,microRNA在头颈肿瘤中正逐渐得到广泛的研究,本文对这一方面的研究成果作简要综述.
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慢性不可预知温和应激小鼠脑内和血清miR-124表达的研究
目的:本研究旨在探究慢性应激对小鼠脑内和血清miR-124表达的影响.方法:通过每天随机给予小鼠束缚、潮湿垫料等应激原,持续8周,建立慢性不可预知温和应激模型.通过强迫游泳、蔗糖偏好动物行为学试验评估应激组和对照组小鼠抑郁样行为,通过qPCR检测小鼠大脑皮层和血清中miR-124的表达.结果:在造模6周和8周后,应激组小鼠蔗糖偏好率均显著低于对照组小鼠,不动时间均显著高于对照组小鼠.造模8周后,应激小鼠的大脑皮层和血清miR-124表达显著上调.结论:出现抑郁样行为的慢性应激小鼠脑内及血清的miR124表达显著上调.
关键词： 慢性不可预知温和应激 抑郁症 微小核糖核酸 糖皮质激素受体 -
循环微小核糖核酸在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用
微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)是新发现的基因表达调控因子,由长约21～25个核苷酸的单链RNA分子构成,是非编码小型RNA.它可以通过与特定的信使RNA (messenger RNA,mRNA)的3’非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)相结合,抑制mRNA编码蛋白质的翻译过程来调控基因表达.近研究发现多个miRNA与动脉粥样硬化的发生、发展有关.本文主要综述了miRNA对动脉粥样硬化进程的调节作用,旨在阐明miRNA成为动脉粥样硬化诊断与治疗新靶点的重要意义及探讨miRNA作为早期急性心肌梗死的诊断生物标志物的价值.
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微小核糖核酸和心血管疾病
微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,microRNAs,miRNAs或miRs)是一类进化上高度保守的单链非编码RNA小分子,含18～25个核苷酸,主要通过抑制信使RNA(mRNA)翻译或促进其降解调控基因表达.近年研究发现,miRNAs在心血管系统病理状态下有显著的表达量变化.在离体和在体条件下,获得性和缺失性研究都表明,miRNAs在心血管系统发育、疾病发生过程中的调控作用.近年这个领域的研究飞速发展,本文对miRNAs在心血管系统的发育和疾病过程中的作用做一综述.
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siRNA沉默乙型肝炎病毒表达对HepG2.2.15细胞生长的影响
目的 探讨应用siRNA抑制乙型肝炎病毒表达对HepG2.2. 15细胞生长的影响.方法 我们将siRNA转入含HBV病毒基因的肝癌细胞中(HepG2.2.15),测定上清中HBsAg表达及HBV DNA拷贝数;用MTT法评估其增殖能力.结果 实验发现siRNA能有效减少HBsAg分泌和HBV DNA拷贝数,其中HBsAg抑制率高至83.9%,HBV DNA拷贝数抑制率从高至73.4%.MTT法发现抑制率高的siRNA转染细胞后,第五天其增殖能力均较空白组明显减弱,而其他组与空白组无明显区别.结论 siRNA能有效减少HBV复制及蛋白表达;抑制HBV表达后能抑制HepG2.2.15细胞的增殖能力.
关键词： 微小核糖核酸 肝癌 HepG2.2.15 乙型肝炎病毒 -
MicroRNA-155在免疫调控方面的研究进展
微小核糖核酸(micro RNA,miRNA)是在真核生物中发现的一类具有调控功能的内源性非编码核糖核酸(RNA),大小约19～23个核苷酸.成熟的miRNA是由较长的初级转录产物(Pri-miRNA)经过一系列核酸酶的剪切加工产生,随后组装入RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)中,通过碱基互补配对的方式识别靶RNA,并根据互补程度的不同,指导RISC降解靶RNA或者阻碍靶RNA的翻译[1].1993年Lee等[2]发现了首个miRNA,直到2003年后,这种miRNA分子的众多重要功能才被人们所发现.研究显示,miRNA大约可以调控30％的真核生物基因,具有高度保守性、细胞特异性、位相特异性和时相特异性等特点,在免疫细胞的产生和分化、免疫应答的调控中发挥着重要的作用[3-5].
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新的非侵入性生物标志物microRNA在器官移植中的应用研究
外科技术和免疫抑制治疗的发展已经显著改善器官移植患者术后的近期生存率.然而,仍有诸多因素影响患者的长期预后,如免疫抑制剂的不良反应、原发病复发、感染、急性与慢性排斥反应、新发恶性肿瘤及代谢性疾病等,而这些影响移植物和患者长期存活的不利因素都直接或间接与免疫抑制剂有关.
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外周血 miRNA 在肾移植术后急性排斥反应中的作用
急性排斥反应（AR）是肾移植术后的主要并发症之一。早期诊断对于提高移植肾存活率非常重要。目前临床上常用的诊断方法均存在不同程度的缺陷。检测外周血微小核糖核酸（miRNA）是近年来新发现的相对无创的方法，本文从 miRNA 的特点入手，对外周血 miRNA 在肾移植术后 AR 中的作用研究进展作一综述。
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重度阿尔茨海默病血清差异表达microRNA靶基因功能初步分析
目的 分析重度阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)表达谱,为深入探讨miRNA与AD发病机制的关联及寻找AD生物标志物提供依据.方法 使用高通量测序技术对7例重度AD患者和5名正常对照者血清miRNA表达谱进行检测,并进行gene ontology(GO)功能富集和Kyoto encyclopedia of gene and genomes(KEGG)通路富集等生物信息学分析.结果 与对照相比,重度AD患者血清中差异表达miRNA(differentially expressed miRNA,DEmiRNA)共有112个,其中上调57个,下调55个,差异均有统计学差异(P<0.05).GO功能富集分析显示DEmiRNA参与蛋白结合、离子结合、转运金属结合、细胞器与细胞膜生物代谢和调节等过程,KEGG通路富集分析发现PI3K-Akt信号通路是靶基因的重要作用通路.结论重度AD患者血清miRNA表达发生变化,其中可能存在AD潜在的生物标志物,并且DEmiRNA的靶基因与AD病理改变密切相关.
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hsa-miR-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化
目的 明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能.方法 分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h后分别按相应体系转染细胞,再培养48 h后取六孔板内细胞提取总RNA和总蛋白,进行实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting,取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测.结果 当hBMSCs中hsa-miR-654-5p过表达时,BMP2的mRNA和蛋白表达水平均发生明显下调；双荧光素酶报告基因检测提示,BMP2的预测靶位点直接受hsa-miR-654-5p的抑制调控,该靶位点被突变后hsa-miR-654-5p对BMP2的抑制作用消失.结论 hsa-miR-654-5p可通过作用于BMP2的特定靶位点而直接抑制BMP2的mRNA和蛋白表达.hsa-miR-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用.
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miRNA-196a-2基因多态位点rs11614913与胃癌易感性的关联研究
目的:探讨miRNA-196a-2的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点rs11614913与胃癌易感性的关系.方法:采用病例-对照研究设计,研究对象为232例经组织学确诊的胃癌病例和250例按年龄、性别进行匹配的无肿瘤史的社区对照人群.采用探针法SNP基因分型技术检测miRNA-196a-2基因的C/T 多态的基因型,计算rs11614913多态位点基因型在病例与对照中的分布情况,采用logistic回归计算校正相对危险度(odds ratio,OR)和95%置信区间(95% confidence interval,95% CI),评价基因型对胃癌易感性的影响.结果:miRNA-196a-2基因多态位点rs11614913 CC、CT 和TT基因型在胃癌人群中的分布频率为44.0%、47.0% 和9.0%,与对照组(28.8%,54.4%和16.8%)相比差异有统计学意义(均P＜0.05);与CC基因型相比,携带TT或CT基因型的个体胃癌发病危险度降低(OR=0 369,95%CI:0.204~0.659;OR=0.564,95%CI:0.387~0.830);携带突变T碱基(CT/TT)的胃癌患者发生淋巴结转移的危险度降低(OR=0.618,95%CI:0.438~0.795;P=0.010).讨论:miRNA-196a-2基因的C/T 多态性与中国汉族人群胃癌的遗传易感性相关.
关键词： 胃癌 单核苷酸多态性 微小核糖核酸 microRNA-196a-2 -
基于多能干细胞的Alport综合征的microRNA差异性表达与碱基编辑功能分析
目的 分析Alport综合征(AS)的诱导多能干细胞(iPSCs)全基因微小核糖核酸(microRNA)的表达谱,筛选出具有差异性表达的microRNA与发生碱基突变的microRNA.方法 收集1例AS患者与1例健康人的尿液,从尿液中分离尿肾脏管细胞,尿肾脏管细胞分化诱导成iPSCs.运用高通量测序方法对iPSCs的microRNA进行测序与表达量测定,比较分析两人microRNA的表达差异,寻找具有特异性的microRNA靶点.同时,将mi-croRNA序列与miRBase数据库(http://www.mirbase.org/)中已知成熟microRNA序列进行比对,比较两标本mi-croRNA碱基编辑数量,找出发生了碱基突变的microRNA.结果 在两人标本中发现30个microRNA具有显著的差异性表达,其中19个microRNAs表达上调,11个microRNA表达下调.has-miR-3117-3p的倍比值(log2 Ratio)为7.79,在表达上调的microRNA具有特异性;has-miR-544b的倍比值为-9.09,在表达下调的microRNA具有特异性.同时在两标本中共有208个microRNA发生了碱基突变,其中104个microRNA,AS患者发生碱基编辑概率比健康人大;77个microRNA,健康人发生碱基编辑概率比AS患者大.结论 AS患者与健康人肾脏组织中的microRNA存在差异性,AS发生碱基编辑引起基因突变的microRNA比健康人更常见.这些差异性表达的microRNAs与microRNA碱基突变的概率可能在AS发病机制中起重要作用.
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MicroRNAs调控白色脂肪棕色化研究进展
主要探讨棕色脂肪组织及白色脂肪棕色化对机体能量代谢的调节作用,以及microRNAs对棕色脂肪组织及白色脂肪棕色化的调控及其可能机制.大量研究表明,microRNAs参与调控棕色脂肪组织的激活及白色脂肪棕色化进程.然而,只有少数microRNAs对棕色脂肪生成及白色脂肪棕色化的机制被阐明,而且有些研究结果尚未统一.因此,亟需建立较为完善的研究方案,从而进一步验证microRNAs对棕色脂肪组织激活及白色脂肪棕色化的调控作用及其机制,为代谢性疾病提供潜在治疗.
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微小RNA在乳腺癌诊断和治疗中的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,近研究指出,微小RNA(miRNA)在乳腺癌中表现促进或抑制瘤细胞生长与分化.miRNA 在乳腺癌的基因诊断、治疗和指导乳腺癌个体化用药方面具有一定的临床应用潜力,是乳腺癌生物治疗领域的一个新亮点.该文对miRNA在诊断和治疗乳腺癌方面的应用现状作一综述.
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微小核糖核酸与肿瘤发生
微小核糖核酸 (microribonucleic acids,miRNAs)是指含有19～25个核苷酸的小核糖核酸分子,近年研究发现其与肿瘤的发生密切相关,该文综述近年miRNAs与肿瘤关系的研究,为临床研究提供理论基础.
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人胰腺癌BxPC-3细胞上皮-间质转化过程中的微小RNA差异表达谱
目的 分析人胰腺癌BxPC-3细胞上皮-间质转化(EMT)过程中微小RNA(miR)表达谱的差异.方法 培养BxPC-3细胞,设立转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导96 h组(TGF-β1处理组)与未经诱导组(对照组),倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Transwell-Matrigel体外侵袭试验检测细胞的侵袭迁移能力,实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞EMT相关标记物的变化.采用miR微阵列芯片技术检测BxPC-3细胞EMT前后miR表达的变化.结果 在TGF-β1的刺激下,BxPC-3细胞拉长,细胞间连接变得疏松.Transwell试验显示,TGF-β1处理组BxPC-3细胞中侵袭细胞较对照组增多(P<0.05).上皮标记物上皮钙黏素的蛋白及mRNA表达水平均下降(P均<0.05),而其间质标记物波形蛋白、神经钙黏素蛋白及mRNA表达水平均升高(P均<0.05).提取BxPC-3细胞总RNA,2组细胞样本的A260/A280比值分别为2.03、2.06,变性琼脂糖凝胶电泳结果显示RNA无降解,提示BxPC-3细胞RNA纯度及完整性符合试验要求.RNA微阵列芯片技术筛选结果显示,BxPC-3细胞有26个miR的表达水平在诱导前后比较差异有统计学意义(P均<0.05),其中15个miR表达上调和11个miR表达下调.结论 人胰腺癌细胞EMT过程中miR表达谱发生了变化,其中26个miR的表达水平在诱导EMT前后存在差异.
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miRNA在神经胶质瘤中作用的研究进展
神经胶质瘤在原发性神经系统肿瘤中发病率高,传统治疗方法有一定的局限性,预后差.寻求新的分子基因靶点成为治疗胶质瘤新的突破点.研究发现非编码小RNA(microRNA,miRNA)参与了与肿瘤增殖、凋亡、转移、血管生成、免疫应答等相关的所有过程.其可通过抑制特定靶基因表达,而发挥促癌或抑癌作用.该文对近年来miRNA在胶质瘤基础研究中所取得的进展以及在临床诊治过程中的应用作一综述.
