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快速脱钙骨组织病理切片台盼蓝-伊红染色方法研究
目的 研究建立台盼蓝-伊红(trypan blue and eosin,TE)染色法,并用于强酸脱钙后的骨组织病理切片染色,以提高制片质量.方法 对10只大鼠胫骨进行5％硝酸脱钙、石蜡包埋、连续切片后,对每份胫骨标本分别进行苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和甲苯胺蓝(toluidine blue,TB)染色及TE染色,比较不同染色方法的骨组织病理切片显微结构染色的差异.结果 10只大鼠胫骨组织标本每只分别进行3种染色,其中HE染色的骨小梁与骨髓分色不明显,骨细胞核无明显着色;TB染色的骨小梁与骨髓分色不明显,骨细胞边界模糊;TE染色的骨小梁显绛红色,骨髓细胞显紫红色,骨细胞陷窝、细胞核、骨小梁及附着的成骨细胞和破骨细胞、骨髓细胞中的巨噬细胞等结构特征清晰可辨.结论 本研究所用的TE染色法适用于强酸脱钙处理的骨组织病理制片.
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不同灸量隔药灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织病理学的影响
目的:观察隔药灸不同灸量对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠损伤的作用差异,从组织病理学角度筛选隔药灸干预UC大鼠的佳灸量组合.方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、隔药灸1组、隔药灸2组、隔药灸3组、隔药灸4组,每组9只.采用抗原免疫加局部化学刺激法制备UC模型.隔药灸各组选取双侧“天枢”穴给予不同灸量组合(每日1壮、每日2壮、隔日1壮、隔日2壮)隔药灸治疗.观察大鼠一般情况,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织形态变化,过碘酸雪夫(PAS)染色观察结肠黏蛋白分泌情况,高铁二胺阿辛蓝(HID-AB)染色观察结肠黏蛋白硫酸化程度.结果:与正常组比较,模型组大鼠便稀,肛周脓血分泌,体质量增加缓慢(P＜0.01);巨检显示模型大鼠结肠充血明显,严重者局部存在数个浅小溃疡;HE染色镜检显示结肠浅表性溃疡连续分布,腺腔不规则,黏膜固有层、黏膜下层水肿伴大量炎性细胞浸润,组织损伤评分显著升高(P＜0.01);PAS染色、HID AB染色显示结肠肠腺黏蛋白明显减少(P＜0.01).与模型组比较,西药组及隔药灸各组大鼠均体质量增加(P＜0.01,P＜0.05),大便成形,结肠组织损伤改善,表现为黏膜愈合和炎性反应减轻,损伤评分明显降低(P＜0.01);PAS染色、HID-AB染色显示隔药灸各组大鼠结肠腺体分泌黏蛋白增加(P＜0.01).两因素两水平析因分析结果显示,隔日灸对组织学评分的改善作用优于每日灸(P＜0.05),隔日灸2壮对黏蛋白硫酸化程度的调节效应优于1壮(P＜0.01).隔药灸壮数与频次对结肠组织评分、黏蛋白分泌均有交互作用,共同影响灸效.结论:隔药灸“天枢”穴具有促进UC大鼠结肠损伤修复及黏液分泌作用,隔日2壮灸为佳灸量组合.
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苏木素-伊红染色中常见问题原因分析
苏木素-伊红染色(HE染色)是病理切片的一种常规染色方法,操作方法简单,但在染色过程中易受组织固定、脱水、温度等因素的影响,导致染色质量下降.笔者就染色中常出现问题的原因进行了分析,以提高病理切片染色质量.
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鸵鸟眼球栉膜的形态学观察
目的 观察和分析10只鸵鸟眼球栉膜的解剖学和组织学结构.方法 采用常规石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色、Gordon-Sweet法、Van Gieson苦昧酸酸性复红染色法,对健康的10月龄非洲黑颈鸵鸟眼球栉膜的形态学结构进行观察和分析.结果 鸵鸟眼球栉膜位于视乳头部,呈椭圆锥体形浸入玻璃体内.体视显微镜下可见栉膜由三级栉片构成,位于中央的主栉片和主栉片延伸的次级栉片,以及少数次级栉片延伸出的三级栉片.有1个主栉片,次级栉片18 ～ 22个,少数次级栉片可以延伸出2～3个三级栉片.栉膜主要由疏松结缔组织构成,含有丰富的胶原纤维、血管及大量黑色素颗粒.结论 鸵鸟眼球栉膜的解剖学和组织学结构是研究哺乳动物和人的视网膜血管功能的理想模型.
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丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分、氧化损伤和形态学的影响
目的：探讨丁苯酞（ NBP）预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分、氧化损伤和形态学的影响。方法90只雄性SD大鼠随机分为假手术组（ Sham）、模型组（ IR）、NBP预处理低剂量组（ NBP Ⅰ）、NBP预处理中剂量组（NBP Ⅱ）和NBP预处理高剂量组（NBP Ⅲ），每组18只，制造模型前7d开始灌胃给药，1次／d。线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血2h 再灌注24h后进行神经功能缺损评分；2，3，-氯化三苯基四氮唑（ TTC）染色观察脑组织梗死的情况；苏木素-伊红（ HE）染色显微镜下观察脑组织形态学变化；采用羟胺法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性，化学比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性，硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量。结果（1） Sham组神经功能缺损评分为零，脑组织无梗死情况发生，神经元形态规则，脑组织中SOD、GSH-PX活性和MDA含量正常。（2）与IR组比较， NBP预处理各组大鼠神经功能评分显著降低（均P＜0．01），NBPⅠ、Ⅱ、Ⅲ组神经功能评分依次递减（均P＜0．05）。（3）与IR组比较，NBP预处理各组脑组织梗死体积依次减小（均P＜0．05），神经元损伤减轻。（4） NBP预处理各组脑组织中SOD、GSH-PX活性明显升高，MDA含量显著减少（P＜0．01）；NBPⅠ、Ⅱ、Ⅲ组SOD、GSH-PX活性依次递增，MDA含量依次递减（均P＜0．05）。结论丁苯酞预处理可上调SOD、GSH-PX活性，降低MDA含量，减小脑梗死体积，减轻神经元损伤，发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠的预防性保护作用。
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比格犬上颌窦的应用解剖
目的 探讨比格犬上颌窦正常解剖,为与上颌窦有关的动物实验提供解剖学依据.方法 收集16个比格犬上颁窦,利用锥形束投照计算机重组断层影像(CBCT)扫描,并完成局部解剖,详细观察上颌窦形态、位置、容积、自然窦口位置及与周围组织的毗邻关系.另购买2只健康成年比格犬,利用CBCT确定上颌窦窦底,经腭侧开窗,显露软组织,夹取该位点黏膜行组织学检查,光学显微镜下验证所夹取黏膜是否为上颌窦黏膜.结果 比格犬上颌窦形状略似锥形,前部较窄,后部宽大,位于上颌第3前磨牙与第1磨牙之间的腭侧,四周均有骨壁包绕.于第4前磨牙远中牙尖腭侧,距腭中缝约17 ～ 18mm处可见上颌窦低点.同一个体双侧对比,差异无统计学意义.结论 比格犬双侧上颌窦无明显差异,有利于上颌窦相关研究进行随机分组;窦腔内无明显骨嵴或分隔,降低窦黏膜穿孔的危险;行上颌窦外提升时,结合CBCT于上颌窦低点经腭侧骨板开窗是佳的术式.
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组织化学染色技术在超薄生物塑化标本中的应用
目的：探讨组织化学染色技术是否可以应用于塑化标本并验证染色塑化标本是否具有自发荧光。方法选取1个手掌标本经超薄生物塑化技术做成组织块，进行连续切片，切片数量56张，并按切片顺序进行染色处理：原始切片，苏木素-伊红染色，凡尔霍夫-酸性品红染色，亚甲蓝-天青Ⅱ号染色，在扫描仪、光学显微镜和激光扫描共焦显微镜下观察染色效果和组织结构特点并进行比较。结果3种染色技术都可应用于塑化切片染色。苏木素-伊红染色显示肌肉、结缔组织呈红色或紫红色，骨质呈紫蓝色或蓝色。凡尔霍夫-酸性品红染色显示弹力纤维呈黑色，胶原呈红色，其他组织为黄色或棕黄色。亚甲蓝-天青Ⅱ号染色显示肌腱呈紫红色，骨质呈粉红色，软骨呈紫罗兰，其他组织呈紫色。但细胞内结构的染色效果并不理想。在激光扫描共焦显微镜下，胶原纤维、弹力纤维和肌肉纤维具有自发荧光，结构清晰可辨。结论常用的组织化学染色技术适合于超薄塑化切片染色，染色切片的各种组织结构比未染色的观察效果好。染色后，塑化切片中具有自发荧光的结构在激光扫描共焦显微镜下亦可清晰显影。
关键词： 超薄生物塑化 苏木素-伊红染色 凡尔霍夫-酸性品红染色 亚甲蓝-天青Ⅱ号染色 人 -
正丁醇替代无水乙醇和二甲苯在制作大鼠全胚切片中的应用
目的 探索一种以正丁醇替代无水乙醇和二甲苯制作不同胎龄大鼠全胚切片的简便方法.方法 收集胚龄14d(El4)、El6、El8、E20大鼠胚胎,固定及低浓度乙醇脱水后,部分标本按传统方法用无水乙醇脱水和二甲苯透明(无水乙醇-二甲苯法),另一部分标本用正丁醇脱水、透明(正丁醇法).所有标本进行石蜡包埋、切片、HE染色.对两种方法从蜡块质量和切片质量等方面进行比较和评价.结果 正丁醇法大大简化了操作步骤,标本处理时间容易控制,包埋块的切割性能及对肝脏组织的保存优于无水乙醇-二甲苯制片法.结论 正丁醇法步骤简单且制片安全可靠,可替代无水乙醇-二甲苯法制作大鼠全胚切片.
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脂滴在小鼠酒精性肝损伤过程中的表达变化
目的 探究小鼠酒精性肝损伤中的病理表现.方法 健康昆明小鼠♂30只,随机分为对照组(n=10),模型组(n=20),对照组于0 wk处死,取肝脏;模型组进行适应性喂养1 wk后,给予56度白酒灌胃(0.15 mL/20 g·d),连续8 wk,于4 wk和8 wk,颈椎脱臼处死小鼠,取其肝脏待用,制备石蜡切片和冰冻切片,采用HE染色和油红O染色,观察酒精性肝损伤中的脂滴表达变化,采用Image-ProPlus6.0对病理切片样本进行累计光密度(integral opticaldensity,IOD)定量分析.结果 与对照组比较,第4周脂滴含量开始增加(20.29±7.07 vs 8.06±2.06,P＜0.01),第8周末脂滴含量明显增多(34.88±15.33 vs 8.06±2.06,P＜0.01),8 wk与4 wk相比,脂滴的表达量呈上升趋势(34.88±15.33 vs 20.29±7.07,P＜0.05).结论 8 wk末成功建立了酒精性脂肪肝模型,可以用来评估酒精性脂肪肝治疗药物的预后作用;在小鼠酒精性肝损伤中,随着脂肪变性的发生,脂滴含量不断增加.
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胶原性胃炎一例并文献复习
目的 胶原性胃炎(coHagenous gastritis,CG)临床少见,现报道一例CG并进行文献复习.方法 患者行胃镜检查,活检组织切片分别行HE染色、Masson染色、刚果红染色及Warthin-Starry染色;分析病例临床资料并进行随访.结果 1例20岁女性患者主因无规律上腹痛4年,伴腹胀、呃逆、体重明显下降2个月就诊.胃镜检查于角切迹及窦部可见白色结节(活检).病理诊断为胶原性胃炎,上皮下胶原带厚度为16.6-120.3μm,平均厚度43.8 μm,Masson染色阳性,刚果红染色阴性.给予泼尼松(20 mg/d)4周,配合促动力和胃黏膜保护药,患者食欲好转,呃逆减轻,体重略有增加.结论 目前国外文献报道CG仅40余例,其发病机制尚不明确.综合本病例临床及组织病理学特点,符合儿童和青少年发病型CG.综合相关文献及本例治疗经验,无谷胶饮食和糖皮质激素可以有效改善患者症状.
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特殊染色技术在艾滋病合并真菌病理诊断中的应用
目的 探讨特殊染色技术在艾滋病合并真菌病理诊断中的应用价值.方法 选取2010年2月至2013年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心确诊为艾滋病合并真菌感染的患者20例,回顾性分析经苏木素-伊红(HE)染色、过碘酸希夫染色(PAS)和六胺银染色的病理资料,观察常见真菌在光镜下的形态.结果 20例艾滋病合并真菌感染的患者中,肺部隐球菌2例,皮肤、肺、腹腔肠系膜淋巴结马尔尼菲青霉菌3例,会厌、颈部淋巴结、口腔、腹腔及皮肤组织胞浆菌5例,上颌窦、肺及声带曲霉4例(合并结核3例),肝、咽、食道及胃部白色假丝酵母菌6例.HE染色组织中炎性细胞浸润,可见肉芽肿形成,凝固性坏死,真菌形态尚能辨认,但需仔细观察,否则易漏诊或误诊;PAS染色,真菌孢子和假菌丝呈亮丽的紫红色,细胞核紫蓝色;六胺银染色,真菌孢子和假菌丝呈清晰可辨的黑褐色.结论 除常规进行HE染色外,联合应用PAS染色和六胺银染色,有助于提高真菌的病理诊断率.
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统一实验大鼠和小鼠肝细胞空泡变及坏死的毒性病理学诊断术语探讨
毒性病理学研究报告是新药研发以及新药申报的安全性评价中不可或缺的重要组成部分,由于病理学诊断受染色方法、检验仪器设备等实验条件制约,而且受诊断人员学识和经验的影响,具有一定的主观性,因此建立统一、规范、科学的诊断术语是保证准确的药物安全性评价必不可少的要素.我国毒性病理学尚处于发展阶段,各诊断人员之间诊断用语有较大差异.组织形态相似的病变,其发病机制可能完全不同,可能出现不同病理学家做出不同诊断的现象.本文以安全性评价中的重要脏器肝脏为例,就肝细胞空泡变和坏死,通过比较各诊断术语的定义、病理生理机制、光学显微镜下所见及确诊的方法,结合我国目前以苏木素-伊红染色切片为主的现状,探讨毒性病理学诊断术语规范化问题.
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输液微粒对机体影响的时量效应
目的大输液引入微粒对机体有损害,本试验旨在对输入大量小微粒(D＜10μm)后的小鼠,在不同时期做生化及病理分析,从而得出微粒在小鼠体内对机体损伤及其和时间、数量的相关性.方法把试验小鼠随机分为四组,其中三组注入0.1ml含不同微粒浓度的液体,再把每组小鼠分三小组饲养3,6,12个月后处死,观察不同浓度的试验小鼠在不同时间肝小叶中央静脉,肾脏血管区的病理性改变;取血清酶联检测生化改变.结果输液中微粒浓度不同对机体影响不同;同一浓度对机体影响也因时间延长而出现不同变化.结论少量微粒输液对机体无明显影响,一般适量微粒输液在短期会有一定影响,其生化改变随时间延长可恢复,不会引起病理变化,但当输入微粒量较大时病理性改变是不可逆的,而且在观察期内一些生化改变仍持续高水平.
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Thermo全自动染色封片机在常规病理中的使用和维护保体会
常规苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理学技术中常用的染色方法.近年来随着医院规模的扩大,病理科工作量也随之增长,传统的手工操作已难以适应大批量制片工作的要求.本科室自2014年引进Thermo全自动染色封片机应用于常规HE染色,制片工作效率和染色质量显著提高.现将应用体会报告如下.
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卵巢巧克力囊肿 MR 诊断价值与临床特点分析
目的：探讨低场M RI诊断卵巢巧克力囊肿的临床价值，考证低场M RI诊断卵巢巧克力囊肿的准确性。方法：收集我院就诊的42例经病理切片证实为卵巢囊性病变患者病例，观察各病例病变部位M R信号特点并与病理切片结果对比，探讨低场M RI诊断卵巢巧克力囊肿的准确性。结果：在42例卵巢囊性病变患者中，病理切片诊断为巧克力囊肿28例，卵巢腹膜包裹性囊肿7例，卵巢囊腺癌5例。M R诊断为卵巢巧克力囊肿26例，检出率92．86％；卵巢腹膜包裹性囊肿4例，检出率57．14％；卵巢囊腺癌2例，检出率40．00％。结论：低场M RI对卵巢巧克力囊肿的术前诊断具有较高的准确性，其在卵巢巧克力囊肿术前诊断中具有一定的临床价值，值得推广。
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RANTES、TSLP与EOS在鼻息肉组织中的表达及意义
目的 检测胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、正常T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在鼻息肉组织中的表达,探讨其在鼻息肉发病过程中的作用,两者与嗜酸粒细胞(EOS)浸润的关联性.方法 苏木素-伊红染色,免疫组化和实时定量PCR.结果 显微镜下观察嗜酸性粒细胞百分比实验组为73.33±9.33,对照组为21.50±5.67,两组比较P<0.05;TSLP阳性细胞计数实验组为34.65±9.25,对照组为15.56±6.35,两组比较P<0.05;RANTES阳性细胞计数实验组为49.50±8.35,对照组为9.67±5.25,两组比较P<0.05;TSLP mRNA相对值实验组为27.18±6.11,对照组为7.14±4.29,两组比较P<0.05;RANTES mRNA相对值实验组为19.14±7.18,对照组为3.04±1.37,两组比较P<0.05.结论 以EOS为主的鼻息肉中,TSLP和RANTES的蛋白和mRNA表达明显高于正常组织,TSLP和RANTES与鼻息肉组织中EOS的发生发展有密切关系.
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人工感染犬多头多头绦虫组织结构的观察
目的 观察人工感染家犬肠道中多头多头绦虫(Multiceps multiceps)的显微和超微结构. 方法 收集自然感染的羊脑多头蚴,分别经口感染2只6月龄雄性家犬(80～100个/只).感染后67 d,取家犬肠道中多头多头绦虫成虫,常规方法固定后,分离多头多头绦虫的头节、颈节、成熟节片和未成熟节片,制备石蜡切片和电镜超薄切片,分别进行苏木素-伊红(HE)染色和醋酸双氧铀染色后,用光学显微镜和透射电镜观察. 结果 光镜下见多头多头绦虫成虫各节片均可分为皮质层和髓质层.电镜下皮质层的基本结构为绒毛、合胞体和基质,髓质层主要为肌肉组织,以排泄系统、生殖系统为主.头节的绒毛层比颈节、成节的薄,绒毛长的部位主要分布在节片的结合部位.头节部位肌肉组织发达.神经系统和排泄系统见于各节片.成熟节片有雌性、雄性生殖器官各一套.孕卵节片中的雄性生殖器官萎缩,主要以子宫和虫卵为主. 结论 多头多头绦虫显微结构的特别之处在于皮质部位的绒毛以圆柱状为主.成熟节片间的连接部位的微绒毛比成熟节片其他部位的微绒毛长.
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生长激素对大鼠牙齿移动及牙周组织影响的研究
目的：研究生长激素（growth hormone，GH）对大鼠牙周膜、牙槽骨和正畸牙齿移动的影响。方法40只7周龄Wistar雄性大鼠，随机分成对照组（C）和实验组（E），每组20只。实验组每只大鼠每天接受腹部皮下注射GH0．15 IU／（kg· d）；对照组每天接受等量的生理盐水注射。所有大鼠的上切牙和左侧上颌第一磨牙间放置一力值0．49 N镍钛拉簧，以使第一磨牙向近中移动。加力后3、7、10和14 d处死大鼠。游标卡尺测量第一磨牙移动的距离。上颌骨切片做HE染色。结果10 d和14 d时，实验组和对照组相比，牙齿移动距离有显著差异（P ＜0．05）。与对照组相比，实验组在7 d 有更多的破骨细胞，同时在7和10 d表现出更多的血管。结论短期注射GH会影响骨改建及加快正畸牙齿移动，缩短治疗时间。
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一种新型教学切片在留学生病理实验教学中的应用初探
为提高留学生病理学实验教学水平，结合留学生的实际情况，该文探索采用一种新型的病理教学切片，将每一组的疾病和正常组织联合制作成一张切片，使学生在认识疾病的形态特点的同时可以复习到正常的组织结构，起到举一反三的作用，并且此法较为简单省时，可重复性强，值得借鉴和推广。
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改良PASM染色法在牙髓-牙本质复合体研究中的应用
目的 探讨进一步认识牙髓-牙本质复合体组织形态学特征的方法.方法 选择20个因正畸治疗拔除的无龋前磨牙,处理后暴露牙本质,经10%福尔马林固定,8%硝酸脱钙常规组织切片.采用过碘酸-银-乌洛托品 (PASM) 染色套染苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察牙髓-牙本质复合体的组织结构.结果 复染后的切片背景呈浅红色,神经纤维组织呈黑色网状结构,牙髓端有螺旋状神经纤维穿过牙本质细胞层进入前期牙本质,前期牙本质内有一定数量呈弯曲状的神经纤维分布,走行方向与牙本质小管基本一致;牙髓内的血管、细胞亦清晰显示.结论 改良PASM染色结合HE复染,可获得牙髓微血管、细胞、神经组织多重结构的清晰图像.
