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MALDI-TOF MS鉴定一株小菌落变异型金黄色葡萄球菌
目的 探讨运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对金黄色葡萄球菌小菌落变异型的特征性蛋白指纹图谱进行深度研究的价值.方法 分别采用传统生化鉴定、16S rRNA测序技术和MALDI-TOF MS技术对1株小菌落变异型金黄色葡萄球菌进行鉴定,通过质谱鉴定系统VITEK MS的质谱科研模式获取金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCV)的质谱图,分析代表金黄色葡萄球菌agr和sigB系统的m/z表达强度,并用SARAMIS软件构建基于质谱峰谱特征的系统发育树.结果 使用MALDI-TOF MS技术鉴定该菌株为金黄色葡萄球菌,与传统生化鉴定、16S rRNA测序技术的鉴定结果一致.其菌落形态符合典型SCV菌株的特征,预示生物膜形成的PSMα3(m/z 2634.4)、PSMα1(m/z 2286.8)和PSMα4(m/z 2198.6)的表达强度分别为100％、76.1％和32.3％,反映急性早期感染状态的agr调控系统的delta毒素强度只有10％;反映慢性、复发性感染的sigB调控系统的峰谱相对强度均<25％,该菌株和科研菌种库SCV的系统发育树近似度>70％.结论 MALDI-TOF MS技术不仅能够快速准确鉴定不典型金黄色葡萄球菌,且生成的质谱图能够初步提示菌株在宿主体内的感染状态,表明该技术具有极大的应用前景.
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金黄色葡萄球菌sigB基因同源重组质粒构建的研究
目的:构建金黄色葡萄球菌sigB基因的同源重组质粒,为进一步研究其生物膜的形成机制奠定基础.方法:将"sigB上游序列-卡拉霉素抗性基因-sigB下游序列"目的片断以金黄色葡萄球菌X387基因组DNA和pEGFP-N2质粒分别进行PCR扩增,其中3个片段互连的末端以其本身的序列互补,两端分别携带EcoR Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点,并采用融合PCR法进行片段连接;按pBluescriptⅡSK(+)质粒说明书构建含连接片断的质粒,分别将重组pBluescriptⅡSK(+)质粒和载体质粒pGEM-7zf(+)用Sac Ⅰ和Xho工双酶切后,用T4连接酶构建pGEM-7zf(+)-sigB基因同源重组质粒.结果:同源重组质粒经PCR扩增出目的片断,且琼脂糖凝胶电泳和测序证实目的片断正确.结论:金黄色葡萄球菌sigB基因同源重组质粒构建成功.
